高效液相色谱法测定人头发中喹硫平浓度

张岳春，施琳琳，顾丽泽，苏旭江，吕振雷，凌卫明Δ

(1.南京医科大学附属无锡精神卫生中心，南京医科大学附属无锡同仁国际康复医院 检验科，江苏 无锡 214151； 2.天津市第三中心医院 营养科，天津 300170；3.南京医科大学附属无锡精神卫生中心 精神科，江苏 无锡 214151)



高效液相色谱法测定人头发中喹硫平浓度

张岳春1，施琳琳2，顾丽泽1，苏旭江3，吕振雷3，凌卫明1Δ

(1.南京医科大学附属无锡精神卫生中心，南京医科大学附属无锡同仁国际康复医院 检验科，江苏 无锡 214151； 2.天津市第三中心医院 营养科，天津 300170；3.南京医科大学附属无锡精神卫生中心 精神科，江苏 无锡 214151)

目的 建立一种高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)，用来测定人头发中的喹硫平浓度。方法 色谱柱使用Inertsil ODS-C18柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，流动相为0.01 mol/L醋酸铵-甲醇(32︰68)，流速为1.0 mL/min，柱温40 ℃，检测波长为254 nm，以正已烷为萃取剂，建立HPLC法。结果 喹硫平在5～200 ng/mg范围内峰面积与浓度呈良好线性关系，萃取回收率>75.0%，方法回收率在 95.0%～105.0%之间，日内和日间精密度均<10.0%，符合生物样品分析要求。结论 本研究建立了测定人头发中喹硫平浓度的HPLC法，该方法操作简单，结果灵敏、准确，具有一定的应用价值。

头发；喹硫平；高效液相色谱

精神分裂症是临床上最常见的慢性精神疾病，其复发、致残率高，给家庭和社会带来沉重的负担[1]。喹硫平是一种新型非典型抗精神病药，主要作用于5-羟色胺及多巴胺(D1、D2、D4)受体，常用于治疗各型精神分裂症，也可减轻与精神分裂症有关的情感症状如抑郁、焦虑及认知缺陷等，同时喹硫平有阻断α1肾上腺素受体作用，可引起头晕、直立性低血压等不良反应。为保证临床疗效，减少药物不良反应，临床常进行喹硫平的药物浓度监测，以血液标本检测最为常用[2-3]，但血液分析只能反映个体的短期用药信息，且血液标本易污染、保存需冷藏，而头发标本易保存，采集无创伤性，且检测窗口长，可以反映患者的长期用药史，从数周到数月、数年，甚至数十年。

本实验通过条件优化，建立一种HPLC法用来测定人头发中的喹硫平浓度，为临床合理用药及相关研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 头发样品：头发样本来源于2015年4～5月无锡市精神卫生中心住院精神分裂症患者，共6名，均连续服用喹硫平3个月以上，其中男性3名，女性3名，年龄20～54岁。健康对照组5人，男3名，女2名，年龄21～55岁，从未服用过任何抗精神病药物。所有入组者均为黑发，知情同意本实验。

1.1.2 仪器：1260高效液相色谱仪：配G1311C溶液输送泵、G1329B自动进样器、G1316可调柱温恒温箱、G1314B二极管阵列紫外检测器、Agilent色谱化学工作站(美国Agilent公司)；XS105电子分析天平和S20PH计(梅特勒-托利多仪器公司)；EVAP氮吹仪(美国Organomation公司)。

1.1.3 药品与试剂：喹硫平和安定标准品(购自中国药品生物制品检定所，批号分别为：100815-201202，100364-200301)；甲醇为色谱纯(TEDIA公司产品，批号：13090462)；洗洁精(上海和黄白猫有限公司产品，批号：2014101011B)；其他试剂均为国产分析纯。水为净化超纯水。

1.2 方法

1.2.1 头发样品的采集和清洗：入组者头枕部贴头皮处剪下一小簇头发，取距离根部约5 cm的样品。头发样品先用0.1% 洗洁精清洗1次，再用清水和二氯甲烷交替清洗2次，以去除头发外部污染，自然晾干后剪成长约1 mm头发粉末，待检。

1.2.2 标准品溶液的配制：精密称取喹硫平标准品10 mg，置10 mL定量瓶中，加甲醇溶解、摇匀后再加50%甲醇溶液定容至10 mL，作为喹硫平储备液，浓度为1 g/L。以此储备液为母液配制系列浓度的标准品溶液。密闭避光4 ℃冷藏备用。

1.2.3 内标工作液的配制：用50%甲醇将内标安定配制成0.02 g/L的内标工作液，4 ℃冷藏备用。

1.2.4 色谱条件：Inertsil ODS-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)；检测波长254 nm；柱温：40 ℃；流动相：0.01 mol/L醋酸铵-甲醇(32︰68)，用冰乙酸调节pH至6.0；流速：l mL/min；进样量25 μL。

1.2.5 标准曲线的制备：取 10 mL 带盖锥形离心试管8个，分别加入 50 μL浓度分别为2×103、4×103、8×103、1.6×104、2.4×104、3.2×104、4.8×104、8×104ng/mL的喹硫平标准品溶液，氮气吹干，再分别加入 20 mg清洗干净的空白头发粉末，配制成头发中的喹硫平浓度分别为 5、10、20、40、60、80、120、200 ng/mg头发。然后各自加入安定内标工作溶液30 μL，加1 mol/L NaOH溶液2 mL，超声水解90 min，用2 mol/L HCL调pH约8.0，离心，取上清液加正已烷3 mL，密塞，漩涡混匀萃取，离心后吸取上清液转移至另一试管中，50 ℃水浴中氮气流下吹干。残留物以100 μL流动相复溶，取25 μL进样分析。

1.2.6 回收率及精密度试验：取清洗干净后的健康对照头发粉末，按1.2.5方法制备喹硫平浓度为10、60、120 ng/mg头发样品，按文献方法[4]测定。

1.2.7 喹硫平的稳定性测定：按1.2.5方法分别配制喹硫平浓度为10、60、120 ng/mg样品各4份，共12个样品，每份样品分别在室温放置4 h，-20 ℃冻存1d，1周和1月后进行样品稳定性测定。

1.3 临床应用 实验组中6例患者,均口服喹硫平片,剂量分别为500、400、700、400、300、200 mg，按照1.2.5方法进行测定。

2 结果

2.1 标准色谱图 在1.2.4色谱条件下，喹硫平和安定均有很好的分离，头发中杂质对测定不产生干扰，2者的保留时间分别为4.35 min及5.76 min，测得喹硫平峰面积Ai、内标峰面积As，以Ai/As的值为横坐标(X)，以头发样品所对应各点喹硫平浓度为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程：Y= 15.2237X+1.1564(r=0.9996)，n=8，头发中喹硫平浓度在5～200 ng/mg头发范围内线性关系良好，当信躁比S/N=3时，喹硫平的检测限可达到3ng/mg。见图1。

图1 头发样品的高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of hair samples

2.2 回收率及精密度试验 测得喹硫平日内及日间RSD均<10%，萃取回收率>75%，方法回收率在95.0%～105.0%之间，符合生物样品分析要求。见表1。

加入浓度ng/mg萃取回收率(%)方法回收率(%)日内精密度测定值(ng/mg)RSD(%)日间精密度测定值(ng/mg)RSD(%)1079.45103.6010.64±1.049.7710.25±1.019.856075.5796.1261.15±4.166.8059.67±4.277.1512075.1495.83117.13±7.726.59115.15±9.268.04

2.3 喹硫平的稳定性，样品稳定性测定结果未见药物喹硫平降解，RSD 均<10%。

2.4 临床应用 实验组中6例患者头发中均检出药物喹硫平，浓度分别为45.71、42.35、68.29、37.04、33.12、15.27 ng/mg，所建立的实验方法能够用于临床检测。

3 讨论

毛发中药物检测有着悠久的历史。1954年，Goldblum等[5]首次报道在豚鼠毛发中检出苯巴比妥。1992年Tracqui等[6]从头发中检出了抗抑郁药阿米替林。近年来，随着微量检测技术的发展，毛发中药物检测日益受到重视，许多抗精神病药、麻醉药、物质依赖药物等都可以通过毛发进行检测[7-8]。

头发表面会被汗液、油脂等多种物质污染，因此，药物检测前需对头发样本进行清洗。目前尚无统一的清洗程序，一般根据分析药物的不同而采用不同的清洗溶剂。常用清洗溶剂有：洗洁精、二氯甲烷、丙酮、十二烷基磺酸钠、异丙醇、吐温等[9]。即使采用很复杂的清洗程序也无法完全除去外来污染物质。一般认为，如清洗溶剂中被分析物浓度远低于头发中被分析物的浓度，则可忽略外源性的药物污染[10]。另外清洗程序越多越复杂时，头发内的药物也被洗出得越多。因此，对于很少产生环境污染的喹硫平来说，只需洗净头发表面的一般污染物，对HPLC测定背景无明显干扰时即可。

头发内药物紧密结合在头发内的髓质，外有毛皮质的保护，因此必须进行前处理提取程序，才能使药物释放出来。头发前处理常用的方法有酸化、碱化、酶解、甲醇提取，缓冲液超声等，在提取过程中首要考虑药物及其代谢物在不同水解系统下的稳定性。对于喹硫平而言，采用条件温和的酸性水解或单纯缓冲液超声，不能完全溶解头发，提取回收率较低。甲醇水解、碱性水解、酶水解这3种处理方式均能溶解头发，形成均一溶液。但甲醇的溶解能力很强，头发中基质及黑色素对本实验干扰明显，影响检测背景。虽然酶解提取回收率也高，但其成本过大。根据喹硫平在碱性条件不易被水解的结构特性，本研究采取将头发在不同浓度碱作用下进行浸泡超声提取，考察了0.1、0.5、1、2 mol/L氢氧化钠等条件下的提取效率，发现以1 mol/L氢氧化钠，作用90 min时效果最好，此时喹硫平提取回收率可大于75%。而当碱浓度过低，过高或作用时间超过2 h后也会降低喹硫平的回收率。

喹硫平属于二苯二氮类衍生物，化学结构式中含有苯环结构，因此紫外吸收明显。实验过程中，用190～400 nm波长范围内对喹硫平标准品溶液进行紫外扫描，发现喹硫平在210 nm、254 nm 处有强吸收峰，因210 nm靠近末端吸收，容易受溶剂和杂质的干扰，因此本实验波长选择254 nm。

喹硫平可通过CYP450酶系参与代谢，其代谢物共有20种，其中7-OH喹硫平具有少量药理活性。这些代谢物虽数量众多，但浓度很小，实验中没有对母药喹硫平的测定带来过多影响，故本次未作代谢物的浓度检测。

本研究在碱性条件下水解提取头发内喹硫平，然后采用HPLC方法检测。所建立的方法操作简单，结果准确、可靠，可用于头发中喹硫平的药物浓度检测。

[1] 闫赖赖，吕超，邱锦云.探讨精神分裂症与血清中10种元素的关系[J].中国生化药物杂志，2015，35(6)：55-58.

[2] Leslie DL,Mohamed S,Rosenheck RA.Off-label use of antipsychotic medications in the Department of Veterans Affairs Health Care System[J].Psychiatr Serv, 2009,60(9): 1175-1181.

[3] 张巧真.我院994例喹硫平血药浓度日常检测及药师干预分析[J].中国药房，2015，26(8)：120-1122.

[4] 张岳春，陈珉池，凌卫明.高效液相色谱法与化学发光法测定血清丙戊酸钠浓度的比较[J].中国卫生检验杂志，2013，23(15)：3051-3053.

[5] Goldblum RW,Goldbaum LR,Piper WN,et al.Barbiturate concentration in the skin and hair of guinea pigs[J].Invest Dermatol,1954,22(2):121-128 .

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[9] Druid H,Strandberg JJ,Alkass K,et al.Evaluation of the role of abstinence in heroin overdose deaths using segmental hair analysis[J].Forensic Sci Int,2007, 168(2-3): 223-226.

[10] Berankova K,Habrdova V,Balikova M,et al.Methampetamine in hair and interpretation of Forensic finding in a fatal case[J].Forencic Sci Int,2005,151(1): 93-97.

(编校：王冬梅)

Determination of quetiapine in human hair by HPLC

ZHANG Yue-chun1, SHI Lin-lin2, GU Li-ze1, SU Xu-jiang3, LU Zhen-lie3, LING Wei-ming1Δ

(1.Department of Clinical Laboratory, Wuxi Mental Health Center, Wuxi Tongren International Rehabilitation Hospital, Nanjing Medical University, Wuxi 214151, China; 2.Department of Nutritional, Tianjin Third Central Hospital, Tianjin 300170, China; 3.Department of Psychiatry, Wuxi Mental Health Center, Wuxi Tongren International Rehabilitation Hospital, Nanjing Medical University, Wuxi 214151, China)

ObjectiveTo establish a method for determinning quetiapine in human hair by HPLC.MethodsA reverse phase HPLC system was performed on Inertsil ODS-C18column (4.6 mm×150 mm,5 μm)with the mobile phase consisted of 0.01 mol/Lammonioum-methanol(32︰68).The flow rate was 1.0 mL/min,column temperature was 40 ℃,the detection wavelength was 254 nm.N-hexane was used as extracting solvent.ResultsThe calibration curve was linear in the range of 5-200 ng/mg.for quetiapine.The recovery of extraction >75.0%, the recovery of method was between 95.0% and 105.0%, the intra-day and inter-day precision were all no more than 10.0%.This method met the requirements of biological samples.ConclusionA HPLC method of concentration of quetiapine in human hair is established, which is simple,sensitive,accurate and has a certain value.

hair; quetiapine; high performance liquid chromatography

南京医科大学科技发展基金(2013NJMU207)

张岳春，男，硕士在读，副主任医师，研究方向：临床检验，E-mail：zhangming5656@163.com；凌卫明，通讯作者，男，本科，副主任技师，研究方向：临床检验，E-mail：lwmjyk888@sina.com。

R446.19

A

1005-1678(2015)09-0161-03