桂枝茯苓丸对子宫内膜异位症患者血清MAPK、ERK和VEGF水平影响研究

韩晶 ，吴文英

(1.常州工学院校医院 妇产科，江苏 常州 213002；2.常州市中医院 妇产科，江苏 常州 213003)



桂枝茯苓丸对子宫内膜异位症患者血清MAPK、ERK和VEGF水平影响研究

韩晶1Δ，吴文英2

(1.常州工学院校医院 妇产科，江苏 常州 213002；2.常州市中医院 妇产科，江苏 常州 213003)

目的 探讨桂枝茯苓丸对子宫内膜异位症患者血清丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor ，VEGF)水平影响。方法 选取收治的子宫内膜异位症患者60例，根据随机对照表分为实验组和对照组，其中对照组30例，予常规醋酸戈舍瑞林缓释植入剂皮下注射；实验组30例，予桂枝茯苓丸口服治疗。治疗结束后，对比各组患者临床疗效、血清MAPK、ERK-5、ERK及VEGF、T-钙黏蛋白(T-cadherin，T-cad)、宫颈上皮钙粘蛋白(vagina epithelial cadherin，VE-cad)水平变化。结果 治疗结束后，与对照组比较，实验组患者临床总有效率较高(P<0.05)；血清MAPK、ERK-5、ERK水平较低(P<0.05)；血清T-cad及VE-cad水平较低(P<0.05)；血清VEGF水平较低(P<0.05)。结论 桂枝茯苓丸可能通过抑制MAPK及ERK蛋白活性，阻断细胞间信号传导通路，从而抑制子宫内膜异常增殖及细胞分裂周期的进行，进而有效抑制肿瘤的生长与分化。

桂枝茯苓丸；子宫内膜异位症；MAPK；ERK；VEGF

子宫内膜异位症(endometriosis，EMT)是指具有生长功能的子宫内膜细胞种植在宫腔以外的位置而形成的一种女性常见妇科疾病[1]，分为在位性内膜及异位性内膜增殖。临床表现为痛经，呈继发性并进行性加剧，月经异常，不孕和性交疼痛，盆腔包块等[2]。治疗子宫内膜异位症主要以保守手术治疗和药物治疗为主[3-4]，目前对EMS的治疗有假孕疗法、假绝经疗法，药物有达那唑、孕三烯酮、孕激素等，其中促性腺激素释放激素激动剂的问世开启了EMT治疗的新里程[5]，但由于大量激素的应用，导致子宫产生类似绝经妇女的萎缩等副作用，内膜异位较重或有肿瘤增生时，最终需要病灶部位的外科切除治疗。桂枝茯苓丸口服等中医疗法，可调节内分泌及改善局部组织血流变等作用，从而抑制内膜细胞异常脱落及细胞增殖，改善卵巢及子宫激素分泌水平。本文就桂枝茯苓丸对子宫内膜异位症患者血清丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor ，VEGF)水平影响，分析其治疗机制为临床推广提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年1月至2014年1月于常州工学院校医院妇产科以子宫内膜异位症为诊断住院的女性患者60例，年龄28～48岁，平均年龄(35.25±4.92)岁，以随机数字表法分为实验组30例，年龄28～47岁，平均年龄(35.24±4.85)岁；对照组30例，年龄29～47岁，平均年龄(34.53±4.74)岁。2组患者的一般资料相仿，差异无统计学意义。

纳入标准：符合中华医学会妇科肿瘤分会第14届全国妇科肿瘤学会会议[6]中子宫内膜异位症的诊断标准，具备以下临床特点：月经周期不规则，经量异常，可有崩漏；痛经；膀胱刺激征；子宫内膜异位至膀胱者，出现有周期性尿频、尿痛、血尿；周期性局部肿块及疼痛；宫腔镜活检后病理证实子宫内膜异位症、子宫腺肌病患者。患者自愿参与实验，并签署知情同意书。方案获得本院伦理委员会批准并全过程跟踪。

排除标准：药物过敏史，接受免疫抑制剂治疗的患者，近3个月应用激素类药物，不规则阴道出血病史，盆腔炎；严重心、肝、肾等多脏器功能障碍或衰竭；恶性肿瘤、癫痫等神经系统疾病。

1.2 方法

1.2.1 试验方法：对照组参照临床用药指南，予常规醋酸戈舍瑞林缓释植入剂(英国AstraZeneca UK Limited；H20120063；诺雷得；10.8 mg/支)10.8 mg，1次/月皮下注射，1个月为1疗程，治疗2个疗程。实验组30例，予桂枝茯苓丸(山西双人药业有限责任公司，国药准字Z14021484；6 g/丸)，12 g/天，分2次口服，1个月为1疗程，治疗2个疗程。

1.2.2 观察指标及检测方法

疗效评定标准[7]：近期疗效评定标准如下，治疗结束后，临床症状和体征完全消失，患者盆腔包块及局部体征为痊愈；临床症状和体征明显改善，盆腔包块缩小超过1/2为显效；临床症状和体征减轻，盆腔包块缩小1/3以上为有效；临床症状和体征无改善或加重，患者生活无法自理为无效。记录并分析总有效率，总有效率=(痊愈例数+显效例数+有效例数)/本组患者例数×100%。

血清MAPK、ERK-5、ERK、VEGF、T-钙黏蛋白(T-cadherin，T-cad)及宫颈上皮钙黏蛋白(vagina epithelial cadherin，VE-cad)水平检测：于患者试验前后采取空腹外周静脉血5 mL，置于无菌无抗凝管内，静置30 min，3000 r/min离心15 min，取上清液，收集其血清标本于-70 ℃冰柜内冷冻保存。实验时，取出并进行解冻，实施酶联免疫吸附法(ELISA)法检测血清MAPK、ERK-5、ERK、VEGF、T-cad及VE-cad水平。检测波长430 nm，检测试剂盒购于武汉博士德生物制剂有限公司，全自动酶标仪，北京博欧实德生物技术有限公司。

2 结果

2.1 2组患者疗效比较 治疗后与对照组相比，实验组临床总有效率较高(χ2=4.04，P<0.05)。见表1。

表1 2组患者疗效比较[n(%)]Tab.1 Comparison of clinical effect between two groups[n(%)]

*P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.2 血清MAPK、ERK-5及ERK水平比较 治疗前2组患者血清MAPK、ERK-5及ERK水平比较差异无统计学意义；治疗后2组血清MAPK、ERK-5及ERK水平下降(P<0.05)，与对照组相比，实验组血清MAPK、ERK-5及ERK水平较低(P<0.05)。见表2。

组别 例数时间MAPK(μg/mL)ERK-5(μg/mL)ERK(μg/mL)对照组30治疗前6.91±1.1915.51±2.192.22±0.39治疗后5.77±1.69*13.34±2.16*1.59±0.27*实验组30治疗前7.11±1.1416.21±2.142.21±0.26治疗后4.05±0.75*#10.81±3.29*#0.99±0.17*#

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.3 血清T-cad及VE-cad及VEGF水平比较 治疗前2组患者血清T-cad、VE-cad及VEGF水平比较差异无统计学意义；治疗后2组血清T-cad、VE-cad及VEGF水平下降(P<0.05)，与对照组相比，实验组血清T-cad、VE-cad及VEGF水平较低(P<0.05)。见表3。

表3 血清T-cad及VE-cad及VEGF水平Tab.3 Comparison of T-cad，VE-cad and VEGF in serum between two ±s)

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

3 讨论

子宫内膜异位症是育龄期妇女常见的妇科疾病，也是发生盆腔疼痛和痛经的青少年最常见的病因，同时因其病因尚不完全明确[8]。其主要临床症状以渐进性经痛进行性加重、不孕、月经异常等表现，甚者可见肿物增生、崩漏等，严重影响患者生活治疗。研究表明桂枝茯苓丸内服及灌肠治疗子宫内膜异位症，能够加强了破瘀散结之力，且祛邪与扶正兼顾，多途径给药可提高疗效[9]。抑制丝裂原活化蛋白及细胞外信号调节激酶的分泌与合成，降低其在异位内膜的表达及含量，从而显著抑制子宫内膜异位症的血管生成，阻止疾病发生与进展，且副作用较小，对子宫的器质性及功能性影响较小，往往效果良好。本研究显示，与对照组比较，实验组患者临床总有效率较高(P<0.05)，证实桂枝茯苓丸改善子宫内膜异位症患者临床疗效，明显缓解疾病症状，提高患者生活质量。

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的一个家族，可将细胞外刺激传递至细胞内，对生长因子和不同形式的压力作出应答，是真核细胞中主要的激 酶传导通路[10]。MAPK磷酸化激活成为细胞外信号调节激酶(ERK)，进而转入细胞核经磷酸化调控特定基因的表达[11]，诱导炎症细胞因子高表达，参与细胞的生长发育、分裂、增殖、分化以及调亡，并参与细胞恶性转化、成纤维细胞VEGF基因转录过程。MAPK对乳腺癌患者癌细胞细胞的生长、抗凋亡以及介导细胞耐药性具有关键作用[12]。研究显示，与对照组相比实验组血清MAPK、ERK-5水平较低、ERK(P<0.05)血清T-cad及VE-cad水平较低(P<0.05)，提示桂枝茯苓丸可抑制细胞分裂活化蛋白活性并抑制细胞外信号调节激酶的合成与分泌，调节细胞移动性以及蛋白分泌，改善细胞活性和免疫反应，逆流入腹腔的子宫内膜中，预防癌症细胞在盆腹腔腹膜及器官内种植、生长、粘附，从而阻碍癌细胞生长增殖，促进其凋亡。

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是作用最强的促血管生成因子之一，是关系肿瘤生长的重要细胞因子[13]，为肿瘤生长提供养分以及排除代谢产物，故促使血管生长因子标志着肿瘤的形成与发展。研究表明肿瘤患者血管内皮生长因子能够促进组织增殖分化，故临床表现为血清VEGF水平升高，且在各种癌症中得到证实[14-16]。通过应用桂枝茯苓丸干预后，发现实验组用药能够抑制生长因子与细胞表面受体结合，直接阻断其变形、迁移、脱落、增殖及分化能力，并增加微血管通透性，提高局部对药物敏感性，提高疗效。本研究显示，与对照组相比实验组血清VEGF水平较低(P<0.05)，证实桂枝茯苓丸能够明显抑制子宫内膜异位症的细胞增殖与分化，降低血清VEGF水平，抑制癌细胞生长。

本研究通过对60例子宫内膜异位症患者进行研究，证实了桂枝茯苓丸能够通过抑制MEK及ERK蛋白活性，阻断细胞因子与表面受体结合，从而抑制子宫内膜细胞的增殖与分化能力，阻断细胞间信号传导通路，抑制子宫内膜异常增殖及细胞分裂的进行，并能有效抑制肿瘤的生长与分化。在下一步研究中，将进行药理学方面研究，对本实验过程中出现现象做进一步研究。

[1] 傅艳姝，吴俊，俎德学. 不孕症患者子宫内膜异位症合并子宫内膜息肉相关研究[J].浙江中西医结合杂志，2015，25(5)： 487-488.

[2] 李祥云. 补肾祛瘀法治疗子宫内膜异位症 [J].中国临床医生，2003，31(8)： 50-52.

[3] 王荣幸，王香桂. 子宫内膜异位症的药物治疗进展[J].中华实用医药杂志，2009(9)：1112-1114.

[4] 韩晓佳，孔宪超，陈冲，等. 子宫内膜异位症的临床诊断及治疗新进展[J].现代生物医学进展，2013，13(2)：388-391.

[5] 严凤英，王亚丛，官颖. 子宫内膜异位症手术治疗后加用 GnRH-a 意外受孕 1 例[J].实用妇产科杂志，2014，30(10)： 776-777.

[6] 中华医学会妇产科学分会子宫内膜异位症协作组.子宫内膜异位症的诊治指南[J].中华妇产科杂志，2015，50(3)：161-167.

[7] 韩新，冯淑静，吴富菊，等. 子宫内膜异位症60例临床分析[J].中国妇幼保健，2008，23(36)：5241.

[8] 宋作林. 子宫内膜异位症的研究与临床指南[M].四川出版集团，2005.

[9] 徐继辉. 桂枝茯苓丸加味治疗子宫内膜异位症50例[J].河南中医，2008，28(7)：21-22.

[10] 陈岩，朱雨岚. ERK5 激酶及其与神经系统发生发展及疾病的关系[J].卒中与神经疾病，2014，2(21)： 22.

[11] 王辉. ERK/ERK在乳腺增生和癌组织中的表达[D].沈阳：中国医科大学，2002.

[12] 赵文辉，张清媛，娄长杰. EGFR/CerbB-2/MAPK介导乳腺癌三苯氧胺耐药细胞的生长[J].实用肿瘤学杂志，2005，19(2)：143-146.

[13] 姚依勍，朱惠蓉，张怡，等. 血管内皮生长因子在常见消化系统恶性肿瘤中的表达及中医药治疗研究进展[J].河北中医，2014，36(6)： 943-947.

[14] 朱小生，马倩，操乐杰. 肺癌患者血管内皮生长因子和内皮抑素水平变化及意义[J].实用临床医药杂志，2008(6)：1-4.

[15] 徐卫国，王刚，邹玉环，等. 血管内皮生长因子在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义[J].中国综合临床，2008，23(4)：338-340.

[16] 胡瑛，李宝兰，韩毅，等. 非小细胞肺癌患者围手术期血清VEGF水平变化与临床特征的关系[J].肿瘤防治研究，2010，37(5)：535-539.

(编校：谭玲)

Effect of Guizhi Fuling pills on levels of serum MAPK, ERK and VEGF in patients with endometriosis

HAN Jing1Δ, WU Wen-ying2

(1.Department of Obstetrics and Gynecology, Changzhou Engineering College Hospital, Changzhou 213002, China; 2.Department of Obstetrics and Gynecology, Changzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Changzhou 213003, China)

ObjectiveTo investigate the effect of Guizhi Fuling pills on levels of serum MAPK, ERK and VEGF in patients with endometriosis.Methods60 patients with endometriosis were selected and according to the random control table were divided into the experiment group and the control group, 30 cases each. The control group were treated with conventional acetate goserelin sustained-release implantation agent subcutaneous injection, the experiment group were treated by Guizhi Fuling pill treatment. After treatment, the clinical efficacy, serum MAPK, ERK-5, VEGF, ERK, T-cad and VE-cad levels of the patients were compared.ResultsCompared with the control group, the clinical total effective rate was higher in the experiment group (P<0.05); MAPK and ERK-5 levels in serum were lower (P< 0.05), ERK level in serum was lower(P<0.05); T-cad and VE-cad levels in serum were lower(P<0.05); VEGF level in serum was lower(P<0.05). ConclusionGuizhi Fuling pill can block the cell signal transduction pathway through inhibition of MEK and ERK activity, thereby inhibit abnormal endometrial proliferation and cell division cycle, can effectively inhibit the proliferation and differentiation of the tumor.

Guizhi Fuling pills; endometriosis; MAPK; ERK; VEGF

韩晶，通信作者，女，本科，主治医师，研究方向：妇产科，E-mail：hanjingyt@163.com。

R711

A

1005-1678(2015)12-0125-03