丹皮提取物对系统性红斑狼疮患者Th17细胞的影响

胡银娥,代淑芳,王斌,瞿伟

(河南大学淮河医院 皮肤科，河南 开封 475000)



丹皮提取物对系统性红斑狼疮患者Th17细胞的影响

胡银娥,代淑芳,王斌,瞿伟

(河南大学淮河医院 皮肤科，河南 开封 475000)

目的 探究丹皮提取物对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)患者Th17细胞的影响。方法 选择2012年3月～2013年8月在河南大学淮河医院接受治疗的SLE患者168例，以数字法随机法分为对照组和观察组，每组84例。对照组应用常规药物治疗，观察组在常规治疗基础上加用丹皮提取物治疗。对比2组治疗前后Th17细胞与Th1细胞百分率，并观察不良反应发生率。结果 治疗前2组患者一般资料比较差异无统计学意义。治疗后观察组Th17细胞百分率下降至(0.27±0.15)%、Th1细胞上升至(2.53±1.72)%，均较对照组变化幅度更明显(P<0.05)。治疗后观察组IL-6水平、SLEDAI评分以及ESR均比对照组下降明显(P<0.05)。总不良反应发生率也显著少于对照组(P<0.05)。结论 丹皮提取物能有效改善SLE患者病情，通过降低Th17细胞百分比及增加Th1细胞的百分比发挥作用，不良反应少。

系统性红斑狼疮；Th17细胞；丹皮提取物

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)在临床上属于多因素引发的自身免疫性疾病，因为免疫功能被打乱或者被抑制，导致系统异常[1]。临床研究认为SLE发病的源头是T细胞异常，T细胞在体现抗原作用的过程中特异性分化为Th1、Th2、Th17与Th1细胞4种细胞亚型[2]。研究发现SLE患者Th17与Th1细胞百分率异常[3]，因此猜测Th17可能参与SLE的发病机制。鉴于此，本文旨在通过应用丹皮提取物治疗SLE,研究Th17水平的变化，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年3月～2013年8月在河南大学淮河医院接受治疗的SLE患者168例。均满足美国风湿病学会在1997年制定的SLE诊断标准[4]。其中男性71例，女性97例。年龄37～72岁，平均(41.2±14.3)岁。采用数字法随机分为观察组和对照组,每组各84例。观察组男性35例，女性49例。年龄37～70岁，平均(41.1±14.2)岁。平均病程(8.56±3.37)月，平均补体C3为(0.46±0.16)g/L，平均ALB为(26.67±6.12)g/L。对照组男性36例，女性48例。年龄38～72岁，平均(41.3±14.4)岁。平均病程(8.49±3.21)月，平均补体C3为(0.48±0.13)g/L,平均ALB为(26.71±6.09)g/L。2组患者在年龄、性别、治疗前相关指标等基本资料相仿，差异无统计学意义。本试验得到相关伦理委员会批准，并获得患者及家属同意且均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂：氯喹、羟氯喹，丹皮粉末(西安瀚华生物科技公司)；氟伐他汀(北京诺华制药有限公司，国药准字H20010518)；酶联免疫吸附试验IL-6试剂盒(上海谷研生物科技公司)；RPMI1640(美国Gibco公司)；Th17、Th1抗体、固定液、破膜洗涤液(美国Sigma公司)

1.2.2 主要仪器：二氧化碳培养箱(Heraeus，德国)；低温高速离心机(德国HERAEUS 公司，型号：FRESCO21)；魏氏血沉管、超净工作台(中国苏州，型号：SW-CJ-IFD)；恒温水浴箱(Selby Scientific and Medical，美国)；不锈钢灭菌锅(上海申安医疗设备，型号DSX-280A)；Σ960全自动酶标读数仪(美国Thermor)；流式细胞仪(美国Beckman Coulter公司)。

1.2.3 分组:对照组采用常规药物治疗(非甾体类抗炎药、肾上腺皮质激素及免疫抑制剂，常用剂量为氯喹0.25 g，每天1次；羟氯喹0.2～0.4 g，每天分1～2次。部分患者每周服5 d即可。待症状控制后，可改为隔天服药，或每周服2 d维持)，观察组在常规治疗基础上加用丹皮提取物进行治疗。丹皮提取物的提取过程：取适量的丹皮粉末于圆底烧瓶后,加入10倍蒸馏水浸泡0.5 h，通过多层纱布过滤。循环2次后将所有滤液合并，减压至药物浓度为5 g/mL备用。观察组每天以1 g/60 kg的标准服用丹皮提取物，而对照组服用常规氟伐他汀1 g/60 kg进行治疗。持续治疗2个月。

1.2.4 观察指标 观察对比2组Th17细胞与Th1细胞的百分率、IL-6水平、血沉(ESR)、系统性红斑狼疮疾病活动度评分(systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI)评分及不良反应发生率[5]。

使用流式细胞术检测Th17及Th1细胞所占的比例，具体步骤如下：①抽取患者空腹血，加入EDTA抗凝，以密度梯度离心法分离提取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)；②用含10%胎牛血清的RPMI1640培养PBMC；③调节细胞浓度为2×106个/mL，取单个核细胞悬浮液20 μL，加20 μL 1 μg/mLPMA工作液+8 μL 50 μg/mL lonomycin工作液+6.8 μL 0.1 μg/mL Monensin+5 μL PBS工作液,且充分混匀，在5%CO2、37 ℃的细胞培养箱中培养5h；④荧光素标记CD3+、CD4+、IL-17、Th17细胞：取100 μL培养后的细胞悬浮液，置入流式管内，每管中加入固定液5 mL，混匀后室温孵育20 min。加入破膜洗涤液2 mL，混匀后室温孵育20 min，离心机离心后去上清液，再进行破膜洗涤液洗涤与细胞重悬，加入10 μL抗人Th17 Alex Flour647-CD3FITC-CD4PE抗体(1:1000)震荡摇匀后，室温暗处孵育30 min。上流式细胞仪检测。Th1细胞的比例检测步骤同上。

使用酶联免疫吸附试验检测血清中IL-6，取2 mL患者静脉血，加至抗体包被板条的对应小孔中，37 ℃孵箱孵育30 min。洗板，加入生物素化抗体溶液，37 ℃孵箱孵育60 min。洗板，加入酶结合物溶液，37 ℃孵箱孵育30 min。洗板，加入显色剂，避光孵育10～15 min；加入终止液，均匀混合后立即测定OD450值。

采用魏氏法对血沉进行测定[6]，取静脉血1.6 mL，置入魏氏血沉管中，按1:4比例加入109 mmol/L枸橼酸钠，移入干净、干燥的血沉管中，调零后，血沉管在室温下严格垂直放置1 h后，观察血浆凹液面底部至沉降红细胞柱顶部之间的距离，该距离的数值即为血沉结果。

1.2.5 患者不良反应评价 应用SLEDAI积分来进行不良反映评价[7]。总计105分，其中<9分表示稳定，≥10分为活动。

2 结果

2.1 治疗前后2组Th17细胞与Th1的百分率比较 治疗前2组Th17细胞与Th1细胞的百分率比较差异无统计学意义。与治疗前比较，治疗后2组患者Th17细胞百分率均下降，Th1细胞百分率均上升，差异均有统计学意义(P<0.05)；与对照组比较，治疗后观察组Th17细胞百分率更低，Th1细胞百分率更高，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 2组治疗前后Th17细胞与Th1的百分率比较Tab.1 Comparison of percentage of Th17 cells and Th1 cells before and after treatment of two ±s，%)

#P<0.05，与治疗前比较，compared with before treatment；*P<0.05，与对照组相比，compared with control group

2.2 2组治疗前后IL-6水平、SLEDAI评分以及ESR比较 治疗前2组IL-6、SLEDAI、ESR指标差异标无统计学意义。治疗后观察组IL-6水平、SLEDAI评分及ESR均比对照组下降更明显，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 2组治疗前后IL-6水平、SLEDAI评分以及ESR水平比较Tab.2 Comparison of levels of IL-6, SLEDAI score and ESR before and after treatment of two ±s)

*P<0.05，与对照组相比，compared with control group

2.3 2组不良反应发生率比较 2组均出现胃肠道不适、感染以及肝损害等不良反应，但观察组的总不良反应数仅为8.33%(7/84)，显著小于对照组的21.43%(18/84)，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 2组不良反应发生率对比[n(%)]Tab.3 Comparison of adverse reactions of two groups[n(%)]

*P<0.05，与对照组相比，compared with control group

3 讨论

丹皮是指牡丹的根皮，由于根皮富含芍药苷以及丹皮酚等重要成分而被广泛应用。丹皮对人体有多种调节作用，主要是对血管、炎症的影响[8]。许多研究表明丹皮能增加血流量，对心肌血管有明显的保护作用[9-10]，并且丹皮中的丹皮酚有明显的降压效果，对动脉粥样硬化有显著的缓解作用。研究发现：丹皮中的芍药苷以及丹皮酚是通过抑制小鼠血小板的正常凝聚来抵制小鼠粥样硬化，抑制纤维蛋白溶酶原的活性以达到抵抗作用[11]。另外，丹皮酚具有明显的抗菌消炎作用[12-13]，且丹皮中的丹皮酚有明显的降压效果，对动脉粥样硬化有显著的缓解作用。

本文通过研究丹皮提取物对SLE患者Th17细胞百分率的影响，发现治疗后观察组Th17细胞百分率下降至(0.27±0.15)%、Th1细胞上升至(2.53±1.72)%，较对照组变化均更明显(P<0.05)。而IL-6水平、SLEDAI评分以及ESR均比对照组下降明显(P<0.05)，与马纪林等[14]的报道相符。Th17细胞会产生IL-17，在他们的共同作用下激活蛋白激酶后增强炎症反应[15]。而Th1细胞主要功能是维持自身免疫力的耐受性，减少自发性免疫疾病发生时对系统的影响[16]。研究表明，应用丹皮提取物治疗SLE后患者免疫功能明显提高，这是因为丹皮酚对血流速度有提升效果[17]。有研究表明，丹皮对大鼠SLE症状缓解主要体现在脾脏质量的增加中[18]，由此可见丹皮对SLE的疗效显著。此外，在对治疗SLE的不良反应中发现：观察组的不良反应总比例少于对照组，与许文芳等[19]，赵慧霞等[20]的报道一致。这可能是因为丹皮具有高效抗菌作用，对神经系统的缓解影响大。因此能显著改善病况，减轻病患压力。

综上所述，应用丹皮提取物治疗SLE效果显著，能通过降低Th17细胞百分率及升高Th1细胞的百分率增强患者免疫功能，降低治疗后不良反应比例。

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(编校：吴茜)

Effect of moutan cortex extract on Th17 cells of patients with systemic lupus erythematosus

HU Yin-e,DAI Shu-fang,WANG Bin,QU Wei

(Department of Dermatology, Huaihe Hospital of Henan University, Kaifeng 475000, China)

ObjectiveTo study the effect of moutan cortex extract on Th17 cells of systemic lupus erythematosus (SLE) patients, so as to provide reference for clinical practice.MethodsA total of 168 SLE patients admitted to our hospital from March 2012 to August 2013 were selected as subjects, andrandomized into the observation group and control group.84 patients in observation group received moutan cortex extract treatment and 84 patients in control group received conventional medical treatment.The Th17 and Th1 cell percentage of two groups before and after treatment were compared, and the incidence of adverse reactions were observed.ResultsAll the indicators before treatment showed no statistically significant differences between two groups.After treatment, the Th17 cell percentage of observation group decreased to (0.27±0.15)%, and the Th1 cell percentage increased to (2.53±1.72)%, showing more significant changes than control group (P<0.05).The reduction of IL-6 level, SLEDAI score and ESR after treatment were more significant in observation group than in control group(P<0.05).The incidence of adverse reactions was lower in observation group than in control group (P<0.05).ConclusionMoutan cortex extract can effectively improve the condition of SLE through reducing the Th17 cell percentage and increasing Th1 cell percentage with less adverse reactions.

systemiclupus erythematosus;Th17 cells;moutan cortex extract

胡银娥，女，本科，副主任医师，研究方向：红斑鳞屑性皮肤病、结缔组织病、皮肤附属器疾病及性传播疾病，E-mail: hye123587@163.com。

R758.62

A

1005-1678(2015)03-0119-03