表皮生长因子及其受体在尿道型阴茎弯曲畸形阴茎皮肤及纤维短缩尿道中的表达特征分析

安 宇，唐耘熳，谭树林，黄建林，熊国兵，李 俊

(1.四川省医学科学院·四川省人民医院 a.泌尿外科，b.小儿外科，四川 成都 610072；2.四川省德昌县中医院泌尿外科，四川 德昌 615500)

表皮生长因子及其受体在尿道型阴茎弯曲畸形阴茎皮肤及纤维短缩尿道中的表达特征分析

安 宇1a，唐耘熳1b，谭树林2，黄建林1a，熊国兵1a，李 俊1a

(1.四川省医学科学院·四川省人民医院 a.泌尿外科，b.小儿外科，四川 成都 610072；2.四川省德昌县中医院泌尿外科，四川 德昌 615500)

目的 探讨尿道型阴茎弯曲畸形阴茎皮肤及纤维短缩尿道组织中表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)的表达特征。方法 收集25例接受手术治疗的尿道型阴茎弯曲患者阴茎背侧、腹侧皮肤和纤维短缩尿道组织(尿道型阴茎弯曲组)，以包皮过长患者18例作为正常对照组，收集包皮环切术中正常阴茎背侧、腹侧包皮组织。组织标本经免疫组化LSAB法染色后检测EGF、EGFR表达特征。结果 正常阴茎包皮及尿道型阴茎弯曲组织EGF、EGFR均存在阳性表达。尿道型阴茎弯曲背侧、腹侧包皮EGF及EGFR表达与正常对照组比较差异均无统计学意义(P> 0.05)。尿道型阴茎弯曲自身背侧、腹侧包皮EGF及EGFR表达差异均无统计学意义(P> 0.05)；重度弯曲纤维短缩尿道与轻中度弯曲比较，EGFR表达显著减低(P< 0.05)，EGF表达差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 尿道型阴茎弯曲畸形阴茎皮肤及纤维短缩尿道组织中EGF和EGFR表达无显著减少，重度弯曲纤维短缩尿道EGFR表达存在缺陷。

阴茎弯曲；表皮生长因子；表皮生长因子受体

先天性单纯性阴茎弯曲畸形分为Ⅰ型皮肤型、Ⅱ型筋膜型、Ⅲ型海绵体型和Ⅳ型尿道型，尿道型阴茎弯曲属于其中少见类型，约占7%，病因至今尚不明确，其临床表现为尿道外口正位开口于阴茎头，远段尿道发育缺陷，呈特征性的纤维短缩尿道，并牵引阴茎向腹侧弯曲[1，2]。人类表皮生长因子(epidermal growth factand，EGF)、表皮生长因子受体(epidermal growth factand receptand，EGFR)在上皮组织表面细胞均丰富表达，在泌尿生殖道上皮细胞的增殖分化和再生愈合过程中发挥着重要的调控作用。本研究以正常阴茎包皮组织为对照，观察尿道型阴茎弯曲阴茎背、腹侧皮肤EGF/ EGFR的表达规律；以自身为对照，观察弯曲畸形发育不平衡的背、腹侧皮肤EGF/ EGFR的表达是否存在差异；并观察纤维短缩尿道EGF/ EGFR的表达特征，为手术治疗尿道型阴茎弯曲提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 四川省人民医院2005年8月至2014年10月诊治的尿道型阴茎弯曲患者 25例，年龄2.4～18岁，平均年龄6.6岁。经人工勃起试验致阴茎勃起后测量阴茎长度及弯曲角度[1]，阴茎长度2.2～7.1 cm，平均 4.1 cm。其中，弯曲30～45°11例，弯曲≥45° 14例。术中收集阴茎背侧、腹侧皮肤和纤维短缩尿道组织。同期阴茎正常包皮过长患者18例为对照，年龄3.9～12.4岁，平均年龄6.3岁，行包皮环切术，收集正常阴茎背、腹侧包皮，未收集正常尿道组织。

1.2 方法 ①主要试剂及材料：一抗为兔抗EGF多体，兔抗EGFR单体，二抗为生物素标记羊抗兔IgG，三抗为辣根酶标记链霉卵白素。OLYMPUS双目光学显微镜、Nikon显微图像采集系统。图象分析软件Image-Pro Plus 5.0。②免疫组织化学染色：组织标本采用免疫组化LSAB法染色(AEC显色)并观察EGF/ EGFR的表达特征[3]。阴性对照为PBS代替一抗染色的标本，阳性对照为中分化胃癌(EGF)和中分化结肠癌(EGFR)。EGF/ EGFR阳性染色判定标准为细胞浆中出现红染颗粒，阳性表达结果以积分光密度(integrated optical density，IOD)表示。

1.3 统计学方法 运用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验。P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

阴性对照正常阴茎包皮及尿道型阴茎弯曲阴茎皮肤的各层组织中见细胞浆蓝染，无细胞浆中红色颗粒表达。阳性对照中分化胃癌标本EGF表达见细胞浆红染，中分化结肠癌标本EGFR表达见细胞浆红染。EGF和EGFR在正常阴茎包皮、尿道型阴茎弯曲全部标本的上皮组织全层细胞中均见阳性表达(图1、图2)。EGF和EGFR表达IOD值见表1。尿道型阴茎弯曲背侧、腹侧包皮EGF及EGFR表达与正常对照比较差异均无统计学意义(P> 0.05)。尿道型阴茎弯曲自身背侧、腹侧包皮EGF及EGFR表达差异均无统计学意义(P> 0.05)。重度弯曲纤维短缩尿道与轻中度弯曲比较，EGFR表达显著减低(P< 0.05)，EGF表达差异无统计学意义(P> 0.05)。

表1 正常阴茎包皮、尿道型阴茎弯曲 EGF和EGFR表达IOD值

组别nhs-CRP(mg/L)治疗前治疗后2周TC(mmol/L)治疗前治疗后2周LDL-C(mmol/L)治疗前治疗后2周A组5015.32±0.953.67±0.54*5.67±1.243.10±0.89*4.07±0.981.50±0.35*B组5015.67±0.781.66±0.60*△#5.51±1.352.28±0.85*△#4.12±0.852.29±0.46*△#C组5014.98±0.567.89±0.88*5.49±1.413.93±0.73*4.11±0.892.68±0.56*D组5015.49±0.628.53±0.59*5.55±1.223.89±0.83*4.74±0.782.43±0.35*

图1 组织标本免疫组化EGF表达观察(AEC×400，箭头示阳性细胞) a：正常包皮皮肤，阴性对照；b：尿道型阴茎弯曲皮肤，阴性对照；c：中分化胃癌EGF，阳性对照；d：正常阴茎背侧包皮；e：正常阴茎腹侧包皮；f：阴茎弯曲背侧包皮；g：阴茎弯曲腹侧皮肤；h：阴茎弯曲纤维尿道

图2 组织标本免疫组化EGFR观察(AEC×400，箭头示阳性细胞) a：中分化结肠癌EGFR，阳性对照；b：正常阴茎背侧包皮；c：正常阴茎腹侧包皮；d：阴茎弯曲背侧包皮；e：阴茎弯曲腹侧皮肤；f：阴茎弯曲纤维尿道

3 讨论

3.1 尿道型阴茎弯曲阴茎背、腹侧皮肤和纤维短缩尿道EGF/EGFR分布规律 胚胎研究表明，胚胎期阴茎由弯曲状态逐渐伸直，尿道沟卷管融合形成尿道[3，4]。若雄激素生成缺乏和作用不足，均可能导致靶组织和器官雄性化不足，阴茎和尿道发育停滞，从而出现不同类型的尿道下裂和阴茎弯曲等畸形[5，6]。Gupta等[7～9]体外培养和动物研究证明，EGF(EGFR)可调节性腺类固醇(雄激素)生成，反之雄激素可刺激EGF产生和EGFR成熟。EGF(EGFR)与雄激素的相互调节作用可诱导和促进雄性胎鼠中肾管分化。若胚胎期生殖管道雄激素生成和作用不足，阻断性腺激素与EGF(EGFR)相互作用，机体内环境平衡破坏和内分泌紊乱均可能导致外生殖器发育畸形的发生。我们的研究结果提示，尿道型阴茎弯曲畸形的发生可能与皮肤、筋膜组织及尿道层面的EGF(EGFR)因素无关。分层分析发现，与轻中度弯曲相比，重度弯曲纤维短缩尿道EGFR表达显著减低，而EGF表达差异无统计学意义，这表明弯曲畸形的程度越严重，EGFR表达缺陷越显著，受体功能缺失越明显。

3.2 尿道型阴茎弯曲EGF/EGFR表达特征对手术修复重建材料选择的启示 胃肠、呼吸、泌尿生殖道及角膜等上皮组织的表面细胞EGF/EGFR丰富表达，EGF(EGFR)既作用于组织的正常再生，调节表皮细胞增分化，又促进组织的创伤修复，刺激肉芽组织新生[10]。手术治疗尿道型阴茎弯曲，原则上应充分游离并切除纤维性的尿道及其深面的挛缩纤维，解除限制后以充分矫正弯曲畸形，根据新尿道口位置裁选适宜的自身材料并重建尿道[11，12]。若发育缺陷的尿道组织保留过多，不仅弯曲畸形纠正不完全，而且术后短期内因残存尿道端生长潜力和愈合能力欠佳而易发生吻合口尿瘘和尿道狭窄；但是若尿道周围纤维组织游离过多不仅会造成阴茎腹侧创面加大，循环损伤加重，而且需要重建的新尿道更长，自身材料选择有限，皮瓣缺血坏死概率增加，组织修复及创伤愈合能力下降，尿瘘、尿道狭窄等并发症更加难以避免。因而术者精细的手术操作和丰富的手术经验都十分重要，需权衡利弊施治[13，14]。我们的体会是：①对于轻中度弯曲，皮肤及纤维短缩尿道EGF和EGFR并无显著减少，适当保留近端部分发育尚好的纤维短缩尿道可能是合理的，这样可以缩短重建尿道的长度，减少并发症的发生。②对于重度弯曲，纤维短缩尿道EGFR表达存在缺陷，纤维性和菲薄尿道的保留不能过于积极，应考虑予以充分切除，以免残留的纤维束引起下弯纠正不全和复发，避免尿道残端吻合口愈合不良。③选择相对健康、容易获取、生长潜力和创伤修复能力较好的自身组织替代重建尿道。阴茎背侧包皮较腹侧材料充足，且EGF和EGFR表达与正常阴茎包皮无显著性差异，因而背侧带蒂包皮瓣成为合适的材料。

尿道型阴茎弯曲病例少见，标本取材也相当不易，我们的研究样本例数相对有限，大样本的研究结果可能更能准确揭示EGF和EGFR的表达特征。同时，研究还不能扩展到各型弯曲畸形间相互比较，就目前技术及伦理限制下，这个问题尚难以解决。

[1] 唐耘熳，黄进，陈绍基，等.小儿先天性无尿道下裂阴茎弯曲畸形的解剖特点及诊治[J].中国修复重建外科杂志，2006，20(3)：217-219.

[2] Donnahoo KK，Cain MP，Pope JC，et al.Etiology，management and surgical complications of congenital chordee without hypospadias[J].J Urol，1998，160(3 Pt 2)：1120-1122.

[3] 安宇，刘雪辉，唐耘熳，等.先天性尿道下裂和单纯性阴茎下曲患者阴茎皮肤组织中雄激素受体表达研究[J].中国修复重建外科杂志，2012，25(4)：82-86.

[4] Baskin LS.Hypospadias and urethral development[J].J Urol，2000，163(3)：951-956.

[5] Quigley CA，Bellis AD，Marschke KB，et al.Androgen receptand defects：histandical，clinical，and molecular perspectives[J].Endocrine Reviews，1995，16：271-321.

[6] Kraft KH，Shukla AR，Canning DA.Hypospadias[J].Urol Clin Nandth Am，2010，37(2)：167-181.

[7] Gupta C，Siegel S，Ellis D.The role of EGF in testosterone-induced reproductive tract differentiation[J].Dev Biol，1991，146(1)：106-116.

[8] Gupta C，Jaumotte J.Epidermal growth factand binding in the developing male reproductive duct and its regulation by testosterone[J].Endocrinology，1993，133(4)：1778-1782.

[9] Gupta C，Singh M.Stimulation of epidermal growth factand gene expression during the fetal mouse reproductive tract differentiation：role of androgen and its receptand[J].Endocrinology，1996，137(2)：705-711.

[10]Gregandy LB，Luke JC.Acceleration tensile of strength incisions treated with EGF and TGF-β[J].Ann Surg，1988，208：788-794.

[11]Montag S，Palmer LS.Abnandmalities of penile curvature：chordee and penile tandsion[J].Scientific Wandld Journal，2011，28，11：1470-1478.

[12]Tang YM，Chen SJ，Huang LG，et al.Chordee without hypospadias：repandt of 79 Chinese prepubertal cases[J].J Androl，2007，[Epub ahead of print].

[13]Snodgrass W.A farewell to chordee[J].J Urol，2007，178(3 Pt 1)：753-754.

[14]Snodgrass WT.Management of penile curvature in children[J].Curr Opin Urol，2008，18(4)：431-435.

The expression features of epidermal growth factor and its receptor in genital tissue and fibrotic urethra of patients with urethral type penis bending deformity

AN Yu1a，TANG Yun-man1b，TAN Shu-lin2，HUANG Jian-lin1a，XIONG guo-bin1a，LI jun1a

(1a.Department of Urology Surgery，1b.Department of Pediatric Surgery，Sichuan Academy of Medical Sciences & Sichuan Provincial People’s Hospital，Chengdu 610072，China；2.Department of Urology Surgery，Dechang County Traditional Chinese Medicine Hospital，Dechang 615500，China)

TANGYun-man

Objective To investigate the expression characteristics of epidermal growth factor(EGF)and epidermal growth factor receptor(EGFR)in genital tissue and fibrotic urethra of patients with urethral type penis bending deformity.Methods Dorsal prepuce，ventral perimeatal skin and fibrotic urethra from 25 patients with the disease were harvested in surgery.The prepuce from 18 boys in circumcision was used as control.The expression distribution of EGF and EGFR was assessed with immunohistochemistry.Results The expressions of EGF an EGFR were positive in specimens from the both group.No significant difference in EGF or EGFR expressions was detected between skin specimens between the two groups(P> 0.05)，and between dorsal and ventral specimens from the patients(P> 0.05).However，EGFR expression was significant decreased in fibrotic urethra of serious deformity when compared to mild-to-moderate deformity(P< 0.05)，but no significant difference in EGF expression was detected.Conclusion No difference in EGF and EGFR expressions is detected in dorsal，ventral skin and fibrotic urethra of patients with urethral type penis bending deformity.In patients with serious deformity，the expression of EGFR is flawed.

Phallocampsis，Epidermal growth factor，Epidermal growth factor receptor

唐耘熳

R697+.1

A

1672-6170(2015)05-0087-04

2015-05-26；

2015-06-20)