463株血培养阳性病原菌分布及耐药分析

刘德华 秦海燕 胡大春 卢赞 任宝军 王霞 尹丽民 钱净

（昆明市第一人民医院检验科，云南 昆明 650211）

463株血培养阳性病原菌分布及耐药分析

刘德华 秦海燕 胡大春 卢赞 任宝军 王霞 尹丽民 钱净

（昆明市第一人民医院检验科，云南 昆明 650211）

目的：分析我院2014年检出的463株血培养阳性菌的分布及耐药状况。方法：回顾经BD 9240和Bact/A l ert 3D 240血培养系统进行培养，使用V i t ec2 com pact对分离菌株鉴定及药敏试验。数据分析采用W honet 5.6软件。结果：463株非重复分离菌中革兰阴性菌286株（61.77%）；革兰阳性菌156株（33.69%）；真菌21株（4.54%）。本研究共检出金黄色葡萄球菌29株，其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（M RSA）7株（24.14%）；甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（M SSA）22株（75.86%）；凝固酶阴性葡萄球菌（CN S）92株，其中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（M RCN S）81株（88.04%），甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（M SCN S）11株（11.96%）。M SSA与M RSA在庆大霉素、利福平、万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁、环丙沙星、左氧氟沙星耐药率方面有差异（P＜ 0.05）。M RCN S与M SCN S在万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方磺胺甲唑耐药率方面有差异（P＜ 0.05）。屎肠球菌对青霉素耐药率为90.9%，未检出对万古霉素耐药的屎肠球菌。产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌占比52.59%。产ESBLs肺炎克雷伯菌占比40.32%。产ESBLs大肠埃希菌菌株与非产ESBLs菌株在氨曲南、头孢他啶、氯霉素、环丙沙星、头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢唑林及左氧氟沙星耐药率方面有差异（P＜ 0.05）。产ESBLs肺炎克雷伯菌菌株与非产ESBLs菌株在氨曲南、头孢他啶、氯霉素、环丙沙星、头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢唑林、左氧氟沙星、头孢西丁及氨苄西林-舒巴坦耐药率方面有差异（P＜ 0.05）。铜绿假单胞菌检出3株泛耐药菌株（15.78%），鲍曼不动杆菌泛耐药菌株4株（22.22%），沙门氏菌耐药率均低于6.5%。结论：血培养阳性分离菌分布广泛，不同病原菌间耐药性亦不相同。应加强对血培养病原菌分布和耐药性的监测。

血培养；病原菌分布；耐药性

血流感染包括菌血症和败血症，是致病菌或条件致病菌侵入血液中生长繁殖并释放毒素和代谢产物而引起的急性重症感染性疾病，其发病率和致死率都较高。随着各种血管留置导管技术的快速发展，各种侵袭性操作的推行、移植手术的开展以及临床抗菌药物的广泛应用和大量免疫受损宿主的出现，条件致病菌所致的血流感染有增长的趋势，对抗菌药物的耐药性也发生了变化。为此回顾我院2014年血培养阳性菌株分布及耐药资料，旨在为临床治疗血流感染提供数据参考。

1 材料和方法

1.1 标本来源

昆明市第一人民医院2014年全年住院及门诊患者送检的血培养标本中连续分离的不重复病原菌463株。

1.2 标本采集与培养方法

参照《血培养检测规范化操作》[1]进行标本的正确采集，并将其快速置于BD 9240或Bact/A l ert 3D 240血培养仪中进行连续震荡培养和检测，仪器报警有阳性瓶时，取出后无菌操作抽取培养液立即革兰染色作初级报告，并快速转种血平板、巧克力平板、麦康凯平板等进行五区划线方式培养，待其菌落生长良好备用。如7天仪器未报阳性，则盲种后观察有无细菌生长，若有细菌生长，则进一步做菌株鉴定。

1.3 仪器与试剂

血培养使用BD 9240和 Bact/A l ert 3D 240血培养仪，细菌鉴定及药敏试验使用V i t ec2 com pact。试剂使用与仪器配套的相应培养基、鉴定卡。

1.4 质控菌株

金黄色葡萄球菌A TCC25923，粪肠球菌A TCC 29212，大肠埃希菌 A TCC25922，肺炎克雷伯菌A TCC700603，铜绿假单胞菌 A TCC27853和白色念珠菌A TCC66027等由国家卫生计生委临床检验中心提供。

1.5 统计学处理

判断标准依据CLSI M 100-S24[2]，细菌菌谱及耐药性分析采用W honet 5.6软件和SPSS l 6.0软件。针对抗菌药的耐药率差异，采用χ2检验进行统计学分析（当检出菌株数小于40时用确切概率法计算概率），P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血培养阳性标本菌株的分布及构成

11 423份血培养标本中阳性标本 925份，阳性率8.10%，剔除重复菌株（双瓶或多瓶培养出同一细菌），共检出病原菌463株，其中革兰阴性菌286株（61.77%）；革兰阳性菌156株（33.69%）；真菌21株（4.54%）。463份阳性菌株数量排序依次为大肠埃希菌（135株，29.16%）、凝固酶阴性葡萄球菌（92株，19.87%）、肺炎克雷伯菌（62株，13.39%）、沙门氏菌（34株，7.34%）、金黄色葡萄球菌（29株，6.26%）、铜绿假单胞菌（19株，4.10%）、鲍曼不动杆菌（18株，3.89%）、屎肠球菌（11株，2.38%）等。

2.2 革兰阳性球菌药敏试验结果分析

本研究共检出金黄色葡萄球菌29株，其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（M RSA）7株，占24.14%；甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（M SSA）22株，占75.86%；凝固酶阴性葡萄球菌（CN S）92株，其中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（M RCN S）81株，占 88.04%；甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（M SCN S）11株，占11.96%。M SSA与M RSA在庆大霉素、利福平、环丙沙星、左氧氟沙星耐药率方面有差异（P＜0.05）。M RCN S与M SCN S在庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方磺胺甲耐药率方面有差异（P＜0.05）。屎肠球菌对青霉素耐药率为90.9%，未检出对万古霉素耐药的屎肠球菌。详见表1。

2.3 革兰阴性杆菌耐药率分析

大肠埃希菌共检出135株，其中产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌为 71株，占比52.59%。肺炎克雷伯菌共检出62株，其中产ESBLs肺炎克雷伯菌25株，占比40.32%。产ESBLs大肠埃希菌菌株与非产ESBLs大肠埃希菌菌株在氨曲南、头孢他啶、氯霉素、环丙沙星、头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢唑林及左氧氟沙星耐药率方面有差异（P＜0.05）。产ESBLs肺炎克雷伯菌菌株与非产ESBLs肺炎克雷伯菌菌株在氨曲南、头孢他啶、氯霉素、环丙沙星、头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢唑林、左氧氟沙星、头孢西丁及氨苄西林-舒巴坦耐药率方面有差异 （P＜0.05）。铜绿假单胞菌检出3株泛耐药菌株，占比15.78%。鲍曼不动杆菌泛耐药菌株4株，占比22.22%。详见表2。沙门氏菌检出34株，对常规检测药物耐药率如下：氨苄青霉素3.2%，头孢曲松3.2%，左氧氟沙星0.3%，复方磺胺甲6.5%，氯霉素6.5%。

表1 革兰阳性球菌对抗菌药物的耐药率 （%）

表2 革兰阴性杆菌对抗菌药物的耐药率 （%）

3 讨论

本研究显示，血培养阳性检出菌中革兰阴性菌占 61.77%，革兰阳性菌占 33.69%，真菌 4.54%。张凯等[3]报道的四川地区也是革兰阴性菌检出数量占优，然而凌华志等[4]研究显示检出数量上阳性菌占优。菌株检出前几位也与张凯等[3]的报道接近，只是本研究中阴沟肠杆菌检出数量较少。说明病原菌的分布具有地域性特征。国外G al es A C等[5]报道血流感染中最常见的病原菌与本文基本一致。

本研究中M RSA检出率24.14%；比吕媛等[6]报道的54.5%要低。M RCN S检出率与吕媛等[6]报道相当。表明我院在金黄色葡萄球菌菌血症治疗上选择β-内酰胺类抗菌药压力相对较小。据报道[7-8]在美国、日本等已发现耐万古霉素的葡萄球菌，我国目前虽未检出对万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌，但此项感染防控工作依然应得到重视。本研究中屎肠球菌对青霉素耐药率高达90.9%，对万古霉素未发现耐药，与李晓琴等[9]的研究结论相似。

本研究中产ESBLs大肠埃希菌菌株检出率为52.59%；产 ESBLs肺炎克雷伯菌菌株检出率为40.32%；上述两菌未发现有耐碳青霉烯酶的情况。董海新等[10]也有相同研究结论。K ai ser RM[11]认为耐碳青霉烯酶的肠杆菌特别是肺炎克雷伯菌逐年快速上升，本文虽未检出此类细菌，但可能由于数据有限未揭示出规律，还应加强数据监测。泛耐药铜绿假单胞菌及鲍曼不动杆菌发生率分别为15.78%及22.22%，泛耐药菌株的出现造成临床治疗困难，多黏菌素单剂及其联合治疗可能成为新的解决手段[12]。

[1] 徐英春，倪语星，王金良.血培养检测规范化操作[M].上海：上海科学技术出版社，2012.

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[10] 董海新，胡小行，金呈强.血流感染病原菌种类及耐药性分析[J].中华医院感染学杂志，2014，24（9）：2104-2106.

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[12] 刘立凡，陈佰义.多粘菌素B与美罗培南联合用药对泛耐药铜绿假单胞菌体外抗菌活性的研究[J].中国生化药物杂志，2014，34（2）：40-41.（收稿日期：2014-12-12）

Analysis of Pathogen Distribution and Drug Resistance of 463 Strains of Blood Culture Positive

Li u D ehua，Q i n H ai yan，H u D achun，Lu Zan，Ren Baoj un，W ang X i a，Y i n Li m i n，Q i an Ji ng（D epart m ent of Cl i ni cal Laborat ory of t he Fi rst Peopl e’s H ospi t al of K unm i ng Ci t y，Y unnan K unm i ng 650211，Chi na）

Objective：To i nvest i gat e and anal yze t he pat hogen di st ri but i on and drug resi st ance of 463 st rai ns of bl ood cul t ure posi t i ve det ect ed i n our hospi t al i n 2014.Methods：BD 9240 and Bact/A l ert 3D 240 bl ood cul t ure syst em s w ere used.Ident i fi cat i on and drug sensi t i ve t est of t he i sol at ed bact eri al st rai ns w ere conduct ed usi ng V i t ec2 com pact.D at a w as anal yzed by W honet 5.6 soft w are.Results：In t he st udy 286 st rai ns（61.77%）w ere det ect ed as t he G ram-negat i ve bact eri a，156 st rai ns （33.69%）w ere G ram-posi t i ve，and 21 st rai ns （4.54%）w ere fungi. A bout 29 st rai ns w ere det ect ed as Staphylococcus aureus，i ncl udi ng 7 M RSA st rai ns （24.14%），22 M SSA st rai ns（75.86%）and 92 st rai ns of coagulase-negative staphylococcus，w i t h 81 M RCN S st rai ns（88.04%）and 11 M SCN S st rai ns（11.96%）.Si gni fi cant di fference of resi st ant rat es（P＜ 0.05）of M RSA and M SSA w ere show ed t o gent am yci n，ri fam pi n and vancom yci n，l i nezol i d，t ei copl ani n，ci profl oxaci n and l evofl oxaci n and si gni fi cant di fference ofresi st antrat es ofM RCN S and M SCN S （P＜0.05）w ere found i n vancom yci n，l i nezol i d，t ei copl ani n，gent am yci n，ci profl oxaci n，l evofl oxaci n and com pound sul fam et hoxazol e.The resi st ant rat e of Enterococcus faecium t o peni ci l l i n w as 90.9%butno resi st ance w as det ect ed t o vancom yci n.The st rai ns of ESBLs i n E.coli w ere account ed for 52.59% and 40.32% w as ESBLs i n Klebsiella pneumoniae.There w ere di fferent resi st ant rat es（P＜ 0.05）of E.coli（ESBLs+）and E.coli（ESBLs-）i n azt reonam，ceft azi di m e，chl oram pheni col，ci profl oxaci n，ceft ri axone，cefot axi m e，cefepi m e，l evofl oxaci n and cefazol i n.The di fferentresi st antrat es （P＜0.05）of Klebsiella pneumoniae （ESBLs+）and Klebsiella pneumoniae（ESBLs-）w ere show ed i n azt reonam，ceft azi di m e，chl oram pheni col，ci profl oxaci n，ceft ri axone，cefot axi m e，cefepi m e，cefoxi t i n，am pi ci l l i n/sul bact am，l evofl oxaci n and cefazol i n.Three st rai ns （15.78%）of pan-drug resi st ant Pseudomonas aeruginosa and 4 st rai ns （22.22%）of pan-drug resi st ant Acinetobacter baumannii w ere det ect ed.The resi st ant rat e of salmonella w as l ess t han 6.5%.Conclusion：There i s a w i de di st ri but i on of posi t i ve i sol at es from bl ood cul t ure and t he resi st ance rat es of di fferent bact eri a vari ed.The m oni t ori ng of pat hogeni c di st ri but i on of bl ood cul t ure and drug resi st ance shoul d be st rengt hened.

Bl ood Cul t ure；Pat hogen D i st ri but i on；D rug Resi st ance

10.3969/j.i ssn.1672-5433.2015.04.003

卫生部公益性行业科研基金（201002021）；云南省教育厅科学研究基金项目（2010C097）

刘德华，男，硕士，主治医师。研究方向：细菌耐药机制及流行病学研究。E-m ai l：l i udehua12340244@si na. com.cn