痛风消颗粒质量标准研究

刘建忠，郭剑华，漆 伟，郭 亮，李 卿，廖兴隆，刘红露，唐荣珠

（1.重庆市中医骨科医院，重庆 400010；2.重庆市中药研究院，重庆 400065）

痛风消颗粒由黄柏、苍术、独活、丹参、威灵仙等组成，经提取制成的中药复方制剂，具有清利湿热、活血止痛功效，主要用于急性痛风性关节炎。

为有效监测制剂的产品质量，我们用薄层色谱法对制剂中的黄柏、丹参、独活进行定性鉴别。采用高效液相色谱法测定黄柏中的有效成分盐酸小檗碱的含量，报道如下。

1 仪器与试药

LC-20A型高效液相色谱仪（日本岛津公司），薄层成像色谱仪（瑞士卡玛公司），AE-240S型电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）， KQ-400DB数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司） ，盐酸小檗碱对照品（批号0713-9906），黄柏对照药材（批号121510-201105）、丹参对照药材（批号120923-201113），独活对照药材（批号120940-201111），均由中国食品药品检定研究院提供。硅胶G预制薄层板（青岛海洋化工有限公司），痛风消颗粒样品，缺黄柏、缺丹参、缺独活阴性样品（均由本院提供），试验用乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 黄柏的薄层鉴别

取本品2.5g，研细，加浓氨试液3ml使润湿，加乙酸乙酯40ml，超声处理40min，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材1.5g，加水45mL，煎煮30min，滤过，放冷，加入浓氨试液5mL，用乙酸乙酯提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣用无水乙醇2mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液5μL、对照药材溶液4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.5）为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸中，饱和20分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1。

图1 黄柏薄层色谱图

2.2 丹参的薄层鉴别

取本品4g，研细，加水50mL使溶解，用稀盐酸调pH值至2，用乙酸乙酯提取2次，每次50mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣用无水乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材2g，加水50mL，超声处理40分钟，滤过，滤液用稀盐酸调pH值至2，用乙酸乙酯提取2次，每次50mL，乙酸乙酯液蒸干，残渣用无水乙醇1mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（5∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中显色30min，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。见图2。

1 2 3 4 5图2 丹参薄层色谱图

2.3 独活的薄层鉴别

取本品3g，研细，加水40ml使溶解，用乙醚提取2次，每次40mL，合并乙醚液，蒸干，残渣用无水乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取独活对照药材1g，加乙醚30mL，浸渍过夜，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇1mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（2∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图3。

图3 独活薄层色谱图

2.4 含量测定

色谱条件：色谱柱为迪马 C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相以乙腈-0.03moL/L磷酸二氢钠-磷酸（30∶70∶0.08）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长265 nm，柱温30℃。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3 000。

图4 高效液相色谱图

供试品溶液的制备：取本品1.0g，研细，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇（1∶100）溶液50mL，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用盐酸-甲醇（1∶100）溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

对照品溶液的制备：精密称取在100℃干燥5小时的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1m含16.48μg的溶液，即得。

缺黄柏阴性对照溶液的制备：取不含黄柏的阴性样品适量，照供试品溶液制备方法，得缺黄柏阴性对照溶液。

系统适用性试验：精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL，测定。供试品色谱在与对照品色谱相应保留时间，有相应色谱峰，阴性对照色谱无相应色谱峰，结果表明阴性对照不干扰样品测定，目标峰与相邻色谱峰分离度均大于1.5。见图4。

线性关系考察：精密吸取对照品溶液2、4、8、12、16、20 μL，注入液相色谱仪。以峰面积积分值（A）为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，进行线性回归，得回归方程A=3476772.66C-6595.81， r=0.999 9。结果表明，盐酸小檗碱进样量在0.03296～0.3296 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，重复进样5次（进样量10μL），测定峰面积，盐酸小檗碱峰面积相对标准偏差（RSD）为0.68%。表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取样品1份，精密称定，照拟定的供试品制备方法制备样品，分别于0、1、4、8、12h注入高效液相色谱仪，测定盐酸小檗碱峰面积，其相对标准偏差（RSD）为0.57%，表明供试品溶液至少在12h内稳定。

重复性试验：取同一批样品，按拟定的含量测定方法，分别制备5份供试品溶液，测定盐酸小檗碱含量，其相对标准偏差（RSD）为1.21%，表明本方法重现性良好。

加样回收率试验：取本品内容物适量，研细，精密称定5份，分别加入盐酸小檗碱对照品溶液适量（配成溶液加入），按拟定的含量测定方法。测定盐酸小檗碱含量，计算回收率。盐酸小檗碱平均回收率为101.77%，相对标准偏差（RSD）为1.04%。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

样品含量测定：取痛风消颗粒不同批号样品，按供试品制备方法处理后测定。计算每粒胶囊中盐酸小檗碱的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨 论

制剂中黄柏、独活、丹参的薄层鉴别研究，分别以对照药材为对照，经方法学考察，薄层斑点分离良好，斑点圆整清晰，阴性无干扰，同时试验三批成品，结果均能检出相应色谱斑点，表明选定的方法具有专属性和重现性，可作为痛风消颗粒制剂质量控制定性检测指标。

采用HPLC方法测定制剂中君药黄柏有效成分盐酸小檗碱的含量。供试品溶液直接采用甲醇-盐酸（100∶1）超声提取，直接超声处理，操作简单，过程容易控制，用此方法制备供试品简单、快速，测定结果准确，供试品溶液中目标峰与相邻色谱峰分离度大于1.5，该方法可用作本制剂质量控制的含量测定。

建立鉴别黄柏、独活、丹参的TLC法，能够鉴别出黄柏、独活、丹参的特征性斑点；建立测定盐酸小檗碱含量测定方法，精密度、稳定性、重现性符合要求。两种方法为制定痛风消颗粒质量标准提供了理论依据。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：附录34.

[2] 盛国荣.退白汤中当归、黄芪、丹参、首乌、补骨脂的TLC法鉴别[J].海峡药学，2012，24（1）：62.

[3] 刘新国，周莉玲，郭丽蓉.跌打止痛巴布剂中蛇床子、独活、川芎等药味的鉴别研究[J].中成药，2010，32（12）：2186.

[4] 李红玲，莫炫永.HPLC法同时测定川黄柏中盐酸黄柏碱和盐酸小檗碱的含量[J].中国药房，2014，25（27），2562.

[5] 缪珊，栗艳，李捷.HPLC法测定参蛇软膏中盐酸小檗碱的含量[J].中国药师，2014，17（9）：1576.