天山雪莲醇提液对连续光照雌性小鼠生殖激素水平及离体子宫活动能力的影响

庄淑珍，张晓红，张 冀，张贝贝，侯 宇，周玉东，姚 刚

（1.新疆大学生命科学与技术学院，新疆乌鲁木齐830046；2.新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐830052）

天山雪莲，又名“雪荷花”，属菊科凤毛菊，多年生草本植物，是新疆特有的珍奇名贵中草药，具有除寒、壮阳、调经、补血、收缩子宫和缓解高原反应等功效［1］。雪莲全草入药，对其药物化学和药理分析证明，雪莲中含有挥发油、生物碱、黄酮类、酚类、糖类、鞣质等成分［2］。天山雪莲作为药用植物，在民间习用已久，对风湿、关节炎效果显著，它还能壮阳补血，治肾虚腰痛、麻疹不透等症。目前，已有研究对雪莲的抗炎 镇 痛［3］、调 节 血 脂［4］、抗 氧 化［5］、抗 缺 氧［6－7］抗癌［8］、抗辐射［9］和免疫调节［10］几个方面的作用机理进行了初步阐述，张冀等［11］的研究表明雪莲提取液对连续光照造成的小鼠卵巢早衰具有一定的预防作用。虽然对雪莲的化学成分、药用价值等方面进行了研究，但是作为民间保健调理和女性美容保健佳品，雪莲对雌性机体生殖激素水平以及子宫平滑肌的影响未见报道。本研究通过观察雪莲醇提液对连续光照雌性小鼠血清生殖激素水平及离体子宫活动能力的影响，初步探讨雪莲提取液维持雌性小鼠主要生殖激素水平和子宫平滑肌活力的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 7周龄～8周龄昆明小鼠，雌性，体重20g左右，购自新疆医科大学实验动物中心，实验动物使用许可证号：SYXK（新）2010－0003；实验动物生产许可证号：SCXK（新）2010－0001。

1.1.2 试剂 小鼠血清促卵泡素（follicle－stimulating hormone，FSH），雌二醇（estradiol，E2），促黄体素（luteinizing hormone，LH），ELISA试剂盒为武汉基因美生物科技有限公司产品；9g／L 生理盐水（国药准字H65020253）为国药集团新疆制药有限公司产品；雪莲提取液为天山雪莲的乙醇提取液，由新疆农业大学提供。

1.2 方法

1.2.1 小鼠的饲养 小鼠用无病菌的食物和水喂养，饲养条件为恒温（24℃）、恒湿（60%）、自然昼夜节律光照（光照和黑暗各12h），给予足够的水和食物。

1.2.2 小鼠血清FSH、E2和LH 的ELISA分析 适应性饲养1周后，选择性周期正常的小鼠随机分为试验组和对照组，每组20只，常规饲养。随后对2组小鼠实施连续光照3周。试验组小鼠每天12：00灌胃雪莲提取液0.5mL，对照组同法灌胃9g／L生理盐水0.5mL。3周后小鼠眼眶采血，获得血清，用于生殖激素ELISA分析，按ELISA试剂盒说明书进行。

1.2.3 小鼠离体子宫的活力分析 将处理的小鼠依次断颈处死，取子宫用于离体子宫检测，将离体子宫固定于Powerlab系统的体外器官浴槽内，槽内加30 mL的Locke液，恒温37 ℃，pH 7.3～7.4，持续通入空气，上端通过张力换能器连于自动记录仪，描记收缩曲线，静息张力为1.0g，标本稳定30min后，开始试验。本试验所应用软件中，相性收缩以收缩波形的幅值和波峰出现的周期／频率表示，张力性收缩主要以平均最小值（基线）表示［12］。记录张力曲线并在不同条件下观察10min内子宫平滑肌条收缩幅度的变化状况。每观察一样品后，冲洗标本3次，然后再平衡30min进行下一样品的试验。

1.2.4 统计学处理 本试验部分数据均采用Prism 5.0统计软件进行处理。计量资料均采用平均数±标准差表示，其多组间两两比较用单因素方差（One－Way ANOVA）分析。

2 结果

2.1 雪莲提取液对小鼠血清中主要生殖激素水平的影响

连续光照3周后，对照组小鼠E2、FSH 和LH 的水平均低于试验组，且差异显著（图1），表明连续光照可以降低雌性小鼠体内E2、FSH 和LH 水平。

2.2 雪莲提取液对小鼠离体子宫活动能力的影响

2.2.1 雪莲提取液灌胃处理对小鼠子宫活动能力的影响 观察光照处理前后试验组和对照组小鼠离体子宫的蠕动，结果表明，连续3周的光照处理使对照组小鼠离体子宫的活动力显著降低，而对试验组小鼠离体子宫的活动力影响不大；对照组小鼠子宫蠕动的振幅比光照前显著降低；对照组经光照后虽然子宫蠕动的周期变慢，但和光照前相比差异不明显（表1，图2）。

图1 小鼠血清主要生殖激素含量ELISA分析Fig.1 Level analysis of seral reproductive hormones in mice by ELISA

表1 雪莲提取液灌胃对小鼠离体子宫活动能力的影响Table1 Effect of ethanol extract of Saussurea involucrate by intragastric administration on uterus activities in vitroin mice

2.2.2 雪莲提取液对小鼠离体子宫活动能力的影响

待上述对照组小鼠的离体子宫收缩稳定后，向浴槽内每隔10min加入雪莲提取液，使其终浓度分别达到0.33、0.67、1mL／L，直接刺激离体子宫。结果表明，加入相应浓度的雪莲提取液可以使小鼠离体子宫蠕动的振幅逐渐增大，周期变小，子宫活动力显著提高。但当浓度达到1mL／L时，小鼠离体子宫蠕动明显减弱，振幅降低，周期变大，表现出对子宫活动力的抑制作用（表2和图3）。

3 讨论

E2主要由卵巢的卵泡内膜和颗粒细胞分泌，能引起子宫兴奋，增加蠕动；FSH 由垂体前叶嗜碱粒细胞分泌，可刺激卵巢生长、增加卵巢重量；LH 是在下丘脑促性腺激素释放激素的作用下，由垂体前叶嗜碱性细胞分泌的，可以促进雌性个体卵巢血流加速，并在FSH 的预先作用下促进排卵以及黄体的生成。E2、FSH 和LH 协同作用，共同维持着雌性个体的性别特征以及各项生殖功能。正常情况下，当E2减少时，可通过反馈引起FSH 的增加，促进卵泡发育和激素分泌；当E2增多时，又可抑制FSH 的分泌，促进LH 的释放，导致排卵。本研究对照组小鼠经连续光照3周后，其子宫蠕动的振幅和活动力与光照前相比明显减弱，周期变长，可能和连续光照造成卵巢早衰［11］，从而使得E2、FSH 和LH 分泌紊乱有关，而对血清中E2、FSH 和LH 水平检测的ELISA 试验也证实了连续光照使得对照组E2、FSH 和LH 水平降低。与对照组相反，试验组的小鼠经连续3周光照后，其子宫蠕动的振幅、周期和活动力与光照前相比无明显差异，仍然维持在正常水平，表明灌胃雪莲提取液可降低连续光照对小鼠卵巢造成的损害，保护小鼠卵巢机能，改善因外界不良因素导致的小鼠生殖激素水平紊乱，从而维持或调节雌性小鼠生殖激素水平正常，对因外界不良因素（如连续光照）造成的卵巢早衰可能起到一定的预防作用。

图2 雪莲提取液灌胃对小鼠离体子宫活动能力的影响Fig.2 Effect of ethanol extract of Saussurea involucrata by intragastric administration on uterus activities in vitroin mice

表2 雪莲提取液对小鼠离体子宫活动能力的影响Table 2 Effect of ethanol extract of Saussurea involucrata on uterus activities in vitroin mice

图3 雪莲提取液对小鼠离体子宫活动能力的影响Fig.3 Effect of ethanol extract of Saussurea involucrata on uterus activities in vitroin mice

本研究还将雪莲提取液直接作用于收缩能力已经显著降低的对照组小鼠离体子宫，结果显示由低浓度到高浓度依次加入雪莲提取液后小鼠子宫的收缩能力逐渐加强，并达到正常子宫的水平，但是当到达一定浓度后，会抑制子宫收缩，最终导致子宫收缩停止。可见适当浓度的雪莲提取液对蠕动缓慢的离体子宫具有雌激素样作用，可以促进子宫收缩力增强，但当浓度过大时则会抑制子宫的蠕动，表现出对子宫平滑肌的毒性作用。

［1］ 李君山，蔡少青.雪莲花类药材的化学和药理研究进展［J］.中国药学杂志，1998，33（8）：449－451.

［2］ 陈玉珍，李凤兰.药用资源植物雪莲化学成分及药理作用［J］.中国野生植物资源，2005，24（3）：1－4.

［3］ 杨伟鹏，王怡薇，王彦礼，等.培养雪莲总黄酮对巨噬细胞炎性介质一氧化氮和前列腺素E2的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（18）：157－159.

［4］ 杨 波，李天德，胡显文，等.水母雪莲细胞培养物调血脂作用的初步研究［J］.生物技术通讯，2005，16（1）：46－47.

［5］ 张会会，王怡薇，王彦礼，等.雪莲细胞培养物调血脂及抗氧化作用研究［J］.中国中医基础医学杂志，2013，19（12）：1466－1468.

［6］ 马慧萍，焦 阳，高荣敏，等.天山雪莲乙醇提取物对模拟高原缺氧小鼠生化指标的影响［J］.中药材，2014，37（1）：9－13.

［7］ Ma H P，Fan P C，Jing L L，et al.Anti－hypoxic activity at simulated high altitude was isolated in petroleum ether extract of Saussurea involucrata［J］.J Ethnopharmacol，2011，137（3）：1510－1515.

［8］ Midori T，Takao K，Katsuko K，et al.Anti－tumor－promotingactivity of lignans from the aerial part of Saussureameduse［J］.Cancer Letters，2000，158（1）：53－59.

［9］ 高 博，梁中琴，顾振纶.天山雪莲水提取物对小鼠辐射损伤的保护作用［J］.中草药，2003，34（5）：443－445.

［10］ 贾景明，吴春福.天山雪莲培养物对小鼠免疫功能的影响［J］.中华中医药杂志，2007，22（4）：238－240.

［11］ 张 冀，张曼曼，王 军，等.新疆雪莲提取液预防小鼠卵巢早衰的初步研究［J］.安徽农业科学，2013，41（26）：10622－10623.

［12］ 林秀珍，王国祥.雪莲多糖对离体大鼠子宫的作用［J］.药学学报，1986，21（3）：220－222.