液相色谱仪-蒸发光散射检测器的检定*

何海红 何雅娟 王卫华

(中国计量科学研究院，北京 100029)



液相色谱仪-蒸发光散射检测器的检定*

何海红 何雅娟 王卫华

(中国计量科学研究院，北京 100029)

本文详细描述了按照新版JJG 705—2014液相色谱仪检定规程的要求，对液相色谱仪-蒸发光散射检测器进行检定的过程，并总结了检定过程中的经验和注意事项，以供广大检定员参考。

液相色谱仪；检定规程；蒸发光散射检测器

0 引言

蒸发光散射检测器(ELSD)，是通过将洗脱液雾化蒸发，使剩下高沸点组分的小液滴进入到光散射池被光电管接收形成电信号，再传输到计算机形成色谱图，理论上可以检测到挥发性低于流动相的任何物质，因此为通用型检测器。与示差折光率检测器相比，ELSD可以进行梯度洗脱，而且基线在进行梯度洗脱时也不会有太大的变化，这就使得很多在示差折光率检测器上分离不好的混合物在ELSD上可以进行很好的分离，大大提高了分离度。ELSD作为紫外检测器的补充，现常用于检测没有紫外吸收或无发色基团的物质，在药物分析、保健品分析、组合化学、脂类分析、氨基酸分析、聚合物分析和表面活性剂分析等领域被广泛应用。

为满足社会上对ELSD检定校准的需求，JJG 705—2014液相色谱仪检定规程(于2014年8月14日实施)中增加了ELSD检定内容和指标要求，笔者以ELSD-LT II型号(日本岛津制作所)的检定为实例，详细介绍了其检定过程，并总结了检定过程中的经验和注意事项，供广大检定员参考，方便大家的日常检定、校准工作。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

液相色谱系统：岛津LC-20AT，配置ELSD-LT II蒸发光散射检测器；

甲醇：色谱纯，merk公司；

甲醇中胆固醇溶液标准物质：标物编号GBW(E)130405，200μg/mL，U=2.0%，k=2；标物编号GBW(E)130406，5.0μg/mL，U=5.0%，k=2。

1.2 色谱条件

色谱柱：AgilentZORBAX Eclipse XDB C-18(50mm×4.6mm，3.5μm)；流动相：甲醇；流速：1.0mL/min；漂移管温度35℃；增益(Gain)为7；载气压力350kPa(雾化气流速大概在2.7L/min左右)；进样量：定性定量重复性为10μL，最小检测浓度为20μL。

2 ELSD的检定

2.1 检定方法

1)首先以1.1中的甲醇为流动相，将1.2中的色谱柱安装到柱温箱中；然后，打开仪器电源并连接工作站，设定1.2中检测器中漂移管的温度和雾化气压力；待检测器温度与雾化气压力达到设定值并稳定后，将泵流速设定为1.0mL/min并运行，待仪器达到稳定状态准备进样，该稳定时间约15min；

2)用标物编号GBW(E)130405，200μg/mL甲醇中胆固醇溶液标准物质进行定性定量重复性检定，连续进样7次，每次进样10μL，取连续6次数据作为定性定量重复性数据，记录每次进样中胆固醇峰的保留时间和峰面积，分别计算保留时间和峰面积的相对标准偏差;

3)用标物编号GBW(E)130406，5.0μg/mL甲醇中胆固醇溶液进行最小检测浓度检定，连续进样3次，每次进样20μL，记录每次进样中胆固醇的峰高，取3个峰高值的平均值作为最终峰高值。

4)按照1.2色谱条件，不进样，采集30min空白基线，记录色谱图。

2.2 检定数据

2.2.1 定性定量重复性数据

利用200μg/mL甲醇中胆固醇溶液标准物质在岛津公司的ELSD-LT II蒸发光散射检测器上进行定性定量重复性检定，数据见表1，色谱图见图1。

图1 定性定量重复性色谱图

表1 定性定量重复性数据

2.2.2 最小检测浓度数据

利用5.0μg/mL甲醇中胆固醇溶液标准物质在岛津公司的ELSD-LT II蒸发光散射检测器上进行最小检测浓度检定，数据见表2，色谱图见图2。

图2 最小检测浓度色谱图

表2 最小检测浓度峰高数据

根据检定规程中最小检测浓度计算公式(1)，计算最小检测浓度，结果见表3。

(1)

式中，cL为最小检测浓度，g/mL；Nd为基线噪声峰高，mV；c为标准溶液浓度，g/mL；V为进样体积，μL；H为标准物质峰高，mV；20为系数，μL。

表3 最小检测浓度检定结果

2.2.3 检测器的噪音、漂移数据

在岛津公司的ELSD-LTII蒸发光散射检测器上进行检测器噪音与漂移检定，色谱图分别见色谱图3、图4。检测数据：噪音为0.3mV，漂移为1.1mV/30min。

图3 ELSD-LT II蒸发光散射检测器噪音色谱图

图4 ELSD-LT II蒸发光散射检测器漂移色谱图

2.2.4 检定结果汇总

岛津公司的ELSD-LT II蒸发光散射检测器检定结果汇总，见表4。

表4 ELSD-LT II蒸发光散射检测器检定结果

3 经验介绍与注意事项

根据笔者的经验ELSD走基线大概15min左右就稳定了，只要流动相与气源质量没问题检定过程一般都很顺利。笔者在ELSD的检定过程中总结了一些经验以供广大检定员参考：

1)检测器需要把流动相全部蒸发掉，所以要求流动相与样品里面都不能有不挥发的物质；

2)如果长时间不用要提前用纯水冲洗系统，保证检测器部分没有灰尘污染；

3)气源最好由高纯氮气钢瓶提供，这种气源比氮气发生器提供的气源要干净一些，如果用氮气发生器会有干扰信号产生；

4)由于胆固醇样品出峰时间较长，所以用的色谱柱不要超过150mm，这样可以保证出峰时间在10min以内，还可以适当提高泵流速来加快胆固醇样品出峰，当提高流速后要适当提高一点雾化气流速来保证流动相挥发完全；

5)当遇到高温型ELSD时，漂移管设定的温度一定要高于流动相的沸点，保险起见建议高10℃左右，比如在Alltech公司生产的2000ES型号ELSD上面，漂移管温度要设定在70℃左右。

[1] JJG 705—2014液相色谱仪检定规程.北京：中国质检出版社，2014

[2] JJG 705—2002液相色谱仪检定规程.北京：中国计量出版社，2002

[3] 汪正范.色谱定性与定量.北京：化学工业出版社，2000

[4] 张庆和.高效液相色谱实用手册.北京：化学工业出版社，2008

[5] 于世林.高效液相色谱方法及应用.北京：化学工业出版社，2000

[6] 何海红，何雅娟.采用新液相色谱仪检定规程检定荧光检测器.计量技术，2014(10)

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国家重大科学仪器设备开发专项(2013YQ510391)

10.3969/j.issn.1000-0771.2015.1.15