磷酸化表皮生长因子受体与鼻咽癌患者预后关系的研究*

吴伟

鼻咽癌是我国南方常见的恶性肿瘤，放化疗是其最主要治疗方法，近年来，随着肿瘤基础研究的不断深入，分子靶向治疗越来越广泛地应用于鼻咽癌的个体化治疗体系当中。头颈部恶性肿瘤存在表皮生长因子 受 体（epidermal growth factor receptor，EGFR）超表达现象，鼻咽癌也不例外，很多研究表明，表皮生长因子高表达与鼻咽癌预后有关，磷酸化EGFR（phosphorylated EGFR，pEGFR）是EGFR的活性形式，有学者认为，EGFR在鼻咽癌的发生发展中的作用并非受体高表达，而活性受体才是癌细胞增殖的关键因素。本研究对2012年1月-2013年6月在本院治疗的107例鼻咽癌患者的病理标本行pEGFR检测，观察pEGFR不同表达患者的生存情况是否有差异，现具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年1月-2013年6月在本院经病理和影像学资料证实为鼻咽癌，病理类型为鼻咽未分化型非角性癌患者107例作为研究对象，其中男77例，女30例，年龄18~77岁，中位年龄50岁。根据pEGFR检测结果分为两组，阴性组47例，阳性组60例。两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。

表1 两组患者临床特征比较

1.2. 方法

1.2.1 放化疗 阴性组有41例患者行诱导化疗，阳性组有50例患者行诱导化疗，诱导化疗采用“顺铂+5-氟尿嘧啶”或“多西他赛+顺铂+5-氟尿嘧啶”方案，其中多西他赛60 mg/m2d1；顺铂30 mg/m2d1~5；5-氟尿嘧啶500 mg/m2d1~5。所有患者均接受根治性三维适形放射治疗，采用直线加速器面颈联合野照射，50 GY以后采用面颈分野放射，放疗总剂量：鼻咽68~74 GY/34~37次，颈部（N1~3）66~70 GY/33~35次，颈部（N0）50~54 GY/25~27次，放疗期间均配合化疗药物增敏，化疗药物采用单药“DDP”方案，1次/周，30 mg/（m2·次）。

1.2.2 pEGFR检测

1.2.2.1 试剂 鼠抗人pEGFR单克隆抗体购买自美国Abcam公司，二抗及DAB显色液来自购买自福州迈新公司的Elivision Super DAB检测试剂盒。

1.2.2.2 免疫组化检测方法 免疫组织化学染色采用SP二步法。所有标本组织均采用4%中性甲醛液固定，常规包埋、4 μm切片、脱蜡水化，进行高温高压抗原修复，加3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，依次滴加一抗、二抗，DAB显色、苏木素复染。操作步骤严格按照说明书进行，用乳腺癌标本作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.2.2.3 结果判断 由两位高年资病理医生独立阅片。pEGFR染色主要定位于细胞浆，染色强度计分：0分（无染色）、1分（淡黄色），2分（棕黄色）、3分（棕褐色）；染色范围计分：0分（无阳性细胞）、1分（阳性细胞1%~25%），2分（阳性细胞26%~50%）、3分（阳性细胞51%~75%）、4分（阳性细胞76%~100%）。两者相加得分0~7分，以大于等于3分为阳性，3分以下为阴性。

1.3 观察指标 所有患者均进行随访，观察两组患者的总生存率、无进展生存率和无局部区域复发生存率。

1.4 统计学处理 应用SPSS 18.0软件包对所得数据进行统计学处理，计数资料比较采用 字2检验，用Kaplan-Meier法计算生存率及比较生存情况，进行Log-rank检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组总生存率比较 随访截止时间2015年5月，随访率96.3%，中位随访时间31个月（23~40个月）。阴性组3年总生存率为77.6%，阳性组3年总生存率为69.4%，两组3年总生存率比较，差异无统计学意义（ 字2=2.431，P=0.119），见图 1。

2.2 两组无进展生存率比较 阴性组3年无进展生存率为70.5%，阳性组3年无进展生存率为62.9%，两组3年无进展生存率比较，差异无统计学意义（ 字2=2.065，P=0.151），见图 2。

2.3 两组无局部区域复发生存率比较 阴性组3年无局部区域复发生存率为86.0%，阳性组3年无局部区域复发生存率为65.7%，阴性组3年无局部区域复发生存率高于阳性组，比较差异有统计学意义（ 字2=4.303，P=0.038），见图 3。

图1 两组总生存率比较

图2 两组无进展生存率比较

图3 两组无局部区域复发生存率比较

3 讨论

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是发生在鼻咽部的一种恶性肿瘤，是我国最常见的恶性肿瘤之一，恶性程度较高，其发病机制尚未完全明确[1-2]。近年来对于影响研究鼻咽癌的预后因素的研究越来越多。其中，pEGFR的研究更为研究者所关注。

EGFR为酪氨酸激酶受体，属于Ⅰ型受体酪氨酸激酶超家族，在体内通过多种信号途径在肿瘤的发生发展中发挥重要作用[3]。EGFR在哺乳动物组织中，尤其是在其上皮、间质、神经源性器官中广泛表达，在头颈肿瘤中表达较为常见，87.5%（35/40）的口腔鳞癌，89%（48/54）的鼻咽癌，93.3%（42/45）的喉癌组织均有EGFR 的过表达[4-6]。EGFR是涉及细胞增殖和肿瘤发生、发展中的极为重要的受体信号系统，和肿瘤的侵袭、转移、恶性程度及预后密切相关。有成熟的研究也显示了EGFR控制了癌症的表型，有促进肿瘤细胞增殖以及转移的作用，同时可以促进血管的生成和抑制肿瘤细胞的凋亡等作用。自身磷酸化是EGFR的活性主要调节方式，EGFR通过磷酸化的酪氨酸残基与下游底物酶反应而传递信号。其下游主要的信号通路包括Ras-Raf-MEK-erk/MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路和JAK/STAT信号通路等。

张小鹏等[7]的研究认为COX-2和EGFR在鼻咽癌患者的组织和血清中都有较高的浓度，同时其浓度的高低和鼻咽癌患者的分期有相关性，故可以成为鼻咽癌患者的诊断和预后的参考指标。EGFR过表达与鼻咽癌进程、放疗抗拒性和预后差有关[8-11]。pEGFR是EGFR的活性形式。EGFR与细胞内其他的细胞因子，例如EGF、TGF-α相结合以后，使EGFR本身磷酸化而使其活化，进一步开启了MAPK通路，MAPK通路的作用可以使细胞外的信号调节激酶发生了核转位进而活化，最后促使靶基因进行转录。并且，在临床上的相关实验也证明了干扰EGFR进行磷酸化可以抑制其下游通路的发生，进而使细胞周期发生阻滞和延迟肿瘤的生长速度。有研究已经证实了在非小细胞肺癌患者中，pEGFR的高表达和临床预后差有明显的关系[12]。也有研究表明pEGFR低表达鼻咽癌患者无转移生存明显优于高表达患者，故pEGFR可能在鼻咽癌的转移中起着重要作用[13]。袁太泽等[14]的研究显示pEGFR高表达患者5年无转移生存率显著低于pEGFR低表达者（P=0.012）。也有学者认为EGFR表达与患者生存无关[15]。

本研究的结果显示，两组3年总生存率与无进展生存率比较，差异均无统计学意义（P>0.05），阴性组3年无局部复发生存率高于阳性组，比较差异有统计学意义（P=0.038）。pEGFR与患者的预后差相关联，本验的研究结果在临床方面进一步证实了pEGFR的过表达与鼻咽癌患者的局部控制差相关。这一研究结论在临床有一定的实际应用价值，可作为鼻咽癌患者预后的一个推测指标。但有关pEGFR导致鼻咽癌患者预后差的分子机制，本试验未做相关研究，可在以后的研究中进一步探索。

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