张家港市汉族女性MTHFR与MTRR基因多态性分布

李欣欣，鲁衍强，马少杰*，龚明霞，袁亚琴，黄云霞，张忠良，杨 琦

（1.张家港市妇幼保健所，江苏张家港 215600;2.上海靶向分子医学研究所，上海 200433;3.中国疾病预防控制中心妇幼保健中心，北京 100101）

张家港市汉族女性MTHFR与MTRR基因多态性分布

李欣欣1，鲁衍强2，马少杰2*，龚明霞1，袁亚琴1，黄云霞1，张忠良1，杨 琦3

（1.张家港市妇幼保健所，江苏张家港 215600;2.上海靶向分子医学研究所，上海 200433;3.中国疾病预防控制中心妇幼保健中心，北京 100101）

目的 探讨张家港市汉族女性MTHFR、MTRR基因多态性的频率特征，以指导孕妇增补叶酸和出生缺陷一级预防。方法 以张家港市4008例汉族女性为研究对象，检测MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G的基因分型。统计分析基因多态性的频率特征，并与已报道的其他地区汉族女性的数据进行比较。结果 张家港市汉族女性的MTHFRC677T位点CC、CT和TT基因型频率分别为32.2%、49.5%和18.3%。C等位基因频率为64.3%，T等位基因频率为35.7%。MTHFRA1298C位AA、AC和CC基因型频率分别为68.7%、28.7%和2.5%。A等位基因频率为80.8%，C等位基因频率为19.2%。MTRRA66G位点AA、AG和GG基因型频率分别为54.4%、38.5%和7.1%。A等位基因频率为76.3%，G等位基因频率为26.4%。结论 张家港市汉族女性MTHFR和MTRR基因多态性频率具有地域特异性。

亚甲基四氢叶酸还原酶;甲硫氨酸合成酶还原酶;单核苷酸多态性

*通信作者（corresponding author）:mashaojie@genechina.com

5，10 -亚甲基四氢叶酸还原酶（5，10-methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）和甲硫氨酸合成酶还原酶（5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase，MTRR）是参与体内叶酸代谢的关键酶［1］，MTHFR基因 C677T位点、A1298C位点与MTRR基因A66G位点的多态性会影响MTHFR与MTRR的酶活性，造成叶酸代谢异常，影响体内叶酸及同型半胱氨酸水平，与神经管缺陷、唇腭裂、先天性心脏病等出生缺陷［2］、复发性流产、妊娠期高血压［3］等疾病的发生密切相关。孕龄妇女作为一个特殊的群体，体内叶酸营养素的水平对于新生儿的健康生长发育和孕妇的身体健康都有极其重要的影响。

本研究针对张家港市汉族女性，开展大样本的分子流行病学调查，旨在阐明本地区人群的遗传特征，为个体化的孕期保健提供依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取自2013年10月至2014年12月在张家港市妇幼保健所进行孕前与孕期检查的汉族女性，排除籍贯非本市者，入组对象共4 008例，平均年龄（26.7±3.6）岁。根据知情同意原则，采集口腔黏膜细胞。

1.2 方法

利用硅胶吸附方法提取口腔黏膜细胞样本的基因组DNA。采用荧光定量PCR技术，检测MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G的基因多态性。相关仪器、试剂（ABI公司）。每个 PCR反应体系10 μL:1 μL DNA 模板（20 ng/μL），5 μL Taqman Universal Master Mix，0.5 μL Taqman-MGB 探针，3.5 μL去离子水。反应条件:95℃预变性10 min，92℃变性15 s，60℃延伸1 min，20个循环;89℃变性15 s，60℃延伸90 s，30个循环。反应完成后，在ABI7900型荧光定量PCR仪上读取样品孔中的终点荧光，利用分析软件确定各个样本的基因分型结果。

1.3 统计学分析

采用 SPSS19.0软件进行统计学分析，应用HaploView4.2软件进行SNPs的Hardy-Weinberg平衡、LD水平和单倍型结构分析。计数资料采用率表示，对基因型及等位基因频率进行χ2检验。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg平衡分析

MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G基因多态性，检验结果符合Hardy-Weinberg遗传平衡，说明样本具有本区域群体代表性。

2.2 MTHFR、MTRR基因型和等位基因频率

MTHFRC677T位点、A1298C位点和MTRRA66G位点的基因型和等位基因频率，如表1、表2所示。

表1 张家港市汉族女性MTHFR、MTRR基因型频数和频率Table 1 MTHFR and MTRR genotype distributions and frequencies among Han women in Zhangjiagang city（n/%）

表2 张家港市汉族女性MTHFR、MTRR等位基因频数和频率Table 2 MTHFR and MTRR allele frequencies among Han women in Zhangjiagang city（n/%）

表3 MTHFR C677T和A1298C连锁型分布Table 3 MTHFR C677T and A1298C linkage analysis（n/%）

2.3 MTHFR C677T和A1298C两位点连锁情况及单倍型分析

MTHFRC677T和A1298C两位点组合情况与贵州布依族和苗族人群的报道类似［4］（表3）。单倍型分析表明，存在 4种组合:CA（40.4%）、TA（42.2%）、CC（17.3%）和 TC（0.1%）。两位点间存在强连锁不平衡现象（D'=0.993）。

3 讨论

出生缺陷是中国严重的公共卫生问题和社会问题，每年新增出生缺陷约90万。出生缺陷的发生受环境、营养和遗传因素的共同影响。作为参与体内叶酸代谢的关键酶，MTHFRC677T和A1298C位点的多态性会降低酶活性，影响叶酸代谢和利用，与神经管畸形、先天性心脏病、唇腭裂、唐氏综合征等出生缺陷，以及复发性流产、妊娠期高血压等孕期疾病密切相关。C677T和A1298C存在协同作用，双杂合子个体与仅含C677T突变的个体相比，同型半胱氨酸浓度显著升高。本研究显示张家港市汉族女性这两个位点的双杂合子占14.6%。

张家港市汉族女性MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G位点多态性与其他地区［5-10］汉族女性的频率存在差异。这种差异可能与人群对多种疾病的群体易感性有关。MTHFR677T等位基因频率呈现北方高、南方低的趋势，与中国出生缺陷发病率北方高、南方低的趋势一致。研究表明，T基因型女性在未服用叶酸增补剂及低叶酸饮食的情况下，其胎儿唇腭裂的发生风险均会增加，若以上两种情况同时存在，则风险进一步增高。反之，如果能够补服叶酸增补剂、提高饮食中叶酸的含量则可以降低胎儿唇腭裂的发生风险［11］。

MTHFRC677T基因多态性与神经管畸形的关系已有大量证据证明，叶酸增补预防神经管畸形是20世纪公共卫生领域取得的最重要成果之一。但是，由于受教育程度、医疗资源、饮食环境等地域性差异的限制，中国北方贫困地区叶酸增补依从性依然较低，因此以神经管畸形为主的出生缺陷仍呈高发态势［12］，进一步的健康教育和预防措施（叶酸增补）仍然十分重要。通过对育龄女性进行遗传筛查，针对存在叶酸代谢障碍的遗传风险人群，采取增加营养素补充、加强红细胞叶酸水平监测、提高产前筛查和孕期管理依从性等干预措施是有效达到出生缺陷及孕期疾病一级预防目的的重要方法，也是提高人口素质的必要手段。

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The distribution of gene polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase and methionine synthase among Han women in Zhangjiagang city

LI Xin-xin1，LU Yan-qiang2，MA Shao-jie2*，GONG Ming-xia1，YUAN Ya-qin1，HUANG Yun-xia1，ZHANG Zhong-liang1，YANG Qi3

（1.Zhangjiagang Women and Children Health Center，Zhangjiagang 215600;2.Shanghai Institute of Target Molecules，Shanghai 200433;3.National Center for Women and Children's Health，China CDC，Beijing 100101，China）

ObjectiveTo explore the 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase（MTHFR）and 5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase（MTRR）gene polymorphisms among the Han women in Zhangjiagang city.MethodsA total of 4008 Han women were recruited.Their oral epithelial cells were collected to extract genome DNA in order to detect gene polymorphisms ofMTHFRandMTRRusing fluorescence quantitative PCR.Then the results were compared with those in other cities in China.ResultsThe genotype frequencies ofMTHFRC677T CC，CT and TT among Zhangjiagang women are 32.2%，49.5%and 18.3%，respectively.The C allele frequency is 64.3%，T allele frequency is 35.7%.The genotype frequencies ofMTHFRA1298C AA，AC and CC are 68.7%，28.7%and 2.5%，respectively.The A allele frequency is 80.8%，C allele frequency is 19.2%.The genotype frequencies ofMTRRA66G AA，AG and GG are 54.4%，38.5%and 7.1%，respectively.The A allele frequency is 76.3%，G allele frequency is 26.4%.ConclusionsTheMTHFR，MTRRpolymorphism distribution of Han women in Zhangjiagang city is region specific

methylenetetrahydrofolate reductase;methionine synthase reductase;single nucleotide polymorphisms

R715.5

A

10.16352/j.issn.1001-6325.2015.09.016

1001-6325（2015）09-1228-04

2015-02-11

2015-05-28

中国疾病预防控制中心妇幼保健中心妇幼保健分子遗传医学研究专项计划（FY-ZX-ZD-0106）