高效液相色谱法检测食用油中的丙二醛

朱洪亮,葛芳芳,管佳丽

(1.嘉兴市产品质量监督检验所,浙江嘉兴 314050;2.嘉兴市农产品监测中心,浙江嘉兴 314050)

高效液相色谱法检测食用油中的丙二醛

朱洪亮1,2,葛芳芳1,管佳丽1

(1.嘉兴市产品质量监督检验所,浙江嘉兴 314050;2.嘉兴市农产品监测中心,浙江嘉兴 314050)

建立了柱前衍生高效液相色谱检测食用油中丙二醛的方法。样品中的丙二醛用三氯乙酸溶液提取后与硫代巴比妥酸(TBA)进行衍生化反应后,采用液相色谱分离,荧光检测器测定。在优化的条件下,丙二醛的检出限为0.02mg/kg,回收率在87.1%～103.2%之间,相对标准偏差小于6%。该方法具有操作简单、灵敏度高等特点,适用于食用油中丙二醛的测定。

丙二醛,高效液相色谱,食用油

丙二醛(Malonaldehyde,MDA)是油脂氧化变质生成的过氧化脂质,在热、光、重金属等过氧化物分解因子存在下,进一步分解产生的一种醛类物质。通常油脂在氧化过程中,产生的过氧化物会不断降解,使过氧化值会逐渐下降,因此很难判断油脂的氧化酸败程度。但随着油脂氧化变质程度的发展,丙二醛的含量值会有明显的增高,并且丙二醛的稳定性好,因此更能准确反映油脂的氧化程度[1-2]。

氧化酸败的食用油脂不仅会产生不良风味,影响食用口感,而且由于脂肪酸组成发生了变化,长期食用会使得人体缺乏必需的脂肪酸,并产生动脉粥样硬化,诱发心脑血管疾病,严重危害人体健康[3];此外,酸败产生的自由基会促使人体衰老,产生的氢过氧化物具有潜在的致癌性[4],因此对油脂中的丙二醛含量进行监测具有重要意义。

目前测定油脂中丙二醛含量的方法主要是硫代巴比妥酸(TBA)比色法[5-6],但是TBA与丙二醛的反应具有非特异性,测定的丙二醛含量比实际含量要高,增高的原因是样品中除丙二醛之外其它的醛类和酮类也能参与反应。高效液相色谱法通过液相色谱柱将不同显色物质相互分离能够避免其他物质对丙二醛测定的干扰,近来已见报道,但相关研究主要用在血液、尿液等生物体系及饲料中丙二醛含量的测定[7-10],对油脂中的丙二醛含量的液相色谱检测方法尚未见报道。本实验利用TBA与丙二醛反应生成的衍生物具有荧光性,利用HPLC对油脂样品中的干扰成分进行分离,对样品中的丙二醛含量进行测定。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1,1,3,3-四乙氧基丙烷标准品 日本TCI公司;三氯乙酸、乙二胺四乙酸二钠、硫代巴比妥酸均为分析纯;乙腈 色谱纯;大豆油、菜籽油、食用猪油、花生油、玉米油均为送检样品。

Agilent1100高效液相色谱仪,配荧光检测器 美国Agilent公司。

1.2 实验方法

1.2.1 待测样品的提取 样品处理:称取5g油脂(精确至0.0001g)于250mL三角烧瓶中,准确加入50.0mL三氯乙酸混合提取液(75g/L三氯乙酸与1.0g/L乙二胺四乙酸二钠水溶液),振荡提取0.5h,取约25mL提取液于50mL离心管中,5000r/min离心8min。

1.2.2 衍生反应的温度 在5种温度下(60,70,80,90,100℃)分别MDA标准溶液与TBA反应,结果发现适当提高温度有利于提高衍生化反应的进行,反应在90℃时衍生物含量最大,继续升高温度对衍生物的生成量影响不大,甚至开始下降,为了避免其它副反应的产生,选择90℃作为反应温度。

表1 温度对MDA响应面积的影响Table 1 The effect of temperature on the corresponding area of MDA

1.2.3 衍生反应的时间 取MDA标准溶液分别与TBA衍生反应15、20、30、45、60min,比较衍生产物的色谱峰面积。当反应在20min后,所得衍生物的峰面积变化不大,考虑时间成本,选择20min作为衍生反应的时间。

1.2.4 标样及样品的处理 各取5.00mL离心后的样品处理液及标样于25.0mL比色管中,加入5.0mL TBA溶液,在90℃下分别将MDA与TBA反应,水浴保温20min,冷却,上清液过膜,进样测定。

1.2.5 色谱分析条件 色谱柱:ODS-2 Hypersil C18柱(200mm×4.6mm,5μm);柱温:30℃;进样体积:10μL;流速:1.0mL/min;流动相:乙腈+水(25∶75);检测波长:激发波长525nm,发射波长560nm。

1.2.6 标准溶液的配制与曲线绘制 丙二醛标准溶液由1,1,3,3-四乙氧基丙烷水解制得。称取0.315g1,1,3,3-四乙氧基丙烷,用水溶解后稀释至1000mL,此标准储备溶液浓度为100μg/mL。用去离子水稀释至浓度为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0μg/mL,与待测样液一同衍生后进液相色谱仪。以待测物的峰面积y对浓度x(μg/mL)做标准曲线。

2 结果与分析

2.1 液相色谱分析条件的选择

考察了不同流动相比例组成对MDA分离检测的影响:当有机相组成为甲醇时,色谱峰保留时间明显延长,且峰面积较小,因此选择乙腈作为流动相;添加一定浓度的磷酸二氢钾有利于色谱峰形的改善,综合考虑,选择乙腈与0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液混合体系作为流动相,两者的比例为25∶75。

图1 浓度为0.05μg/mL的MDA标准色谱图Fig.1 Standard chromatogram of 0.05μg/mL MDA

图2 MDA标准曲线Fig.2 Standard curve of MDA

2.2 线性范围和检出限

将MDA标准系列溶液按1.2方法衍生,以选定的液相色谱条件进行HPLC分析,以保留时间定性,以峰面积对浓度做标准曲线,结果表明,MDA在0.1～5.0μg/mL范围内,线性回归方程为y=486.8x-91.02,相关系数r=0.9993。以信噪比S/N=3计算方法的检出限为0.02mg/kg。

2.3 回收率及精密度

分别取一定量的大豆油、菜籽油、食用猪油、花生油、玉米油样品,加入MDA两个不同浓度水平,混匀后按照1.2方法进行提取、衍生、检测,重复6次实验,计算平均回收率及相对标准偏差,结果见表2。

表2 回收率测定结果(n=6)Table 2 Results of spiked recovery test(n=6)

表2结果表明,以高效液相色谱法测定食用油脂中的丙二醛,对不同样品加标的平均回收率在87.1%～103.2%之间,相对标准偏差均小于6%,回收率较高,相对标准偏差较小,满足实际检测需要。

3 结论

本文成功建立了采用柱前衍生HPLC-FLD法检测食用油脂中的丙二醛含量,方法前处理简单,灵敏度和准确度较好,能够有效避免传统比色法检测丙二醛含量带来的误差,可用于实际工作中油脂中丙二醛含量的检测。

[1]张荣华,赵士权,林明珠,等.腌腊肉制品中丙二醛测定方法的探讨[J].中国食品卫生杂志,2001,13(4):16-17.

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[5]Rogerio Mendes,Carlos Cardoso,Carla Pestana,etal.Measurement of malondialdehyde in fish:A comparison study between HPLC methods and the traditional spectrophotometric test[J].Food Chemistry,2009,112:1038-1045.

[6]中华人民共和国卫生部,中国国家标准化管理委员会.GB/T5009.181-2003 猪油中丙二醛的测定[S].北京:中国标准出版社,2003.

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[10]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会.GB/T28717-2012 饲料中丙二醛的测定 高效液相色谱法[S].北京:中国标准出版社,2012.

Determination of malondialdehyde in edible oils by high performance liquid chromatography

ZHU Hong-liang1,2,GE Fang-fang1,GUAN Jia-li1

(1. Jiaxing Product Quality Supervision Testing Institute,Jiaxing 314050,China;2. Jiaxing Agriculture Products Supervision & Teting Agency,Jiaxing 314050,China)

A method was developed for determination of malondialdehyde(MDA)in Oil by high performance liquid chromatography.The malondialdehyde was extracted by trichloroacetic acid solutions and reacted with thiobarbituric acid(TBA)in samples. The final derivatives were separated by C18column and analyzed by HPLC with fluorescence detector. Under the optimized conditions,the limit of detection was 0.02mg/kg,the recovery was in the range of 87.1%～103.2%,the RSD was less than 6%. This method was simple,high sensibility and suitable for the analysis of MDA in edible oils.

malondialdehyde;high performance liquid chromatography;edible oils

2014-03-27

朱洪亮(1981-)，男，工程师，研究方向：食品质量安全与检测。

TS227

A

1002-0306(2015)01-0309-03

10.13386/j.issn1002-0306.2015.01.056