幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜组织细胞因子变化的实验研究*

韩岩智，刘 浩，阮开学

(新疆石河子大学医学院第一附属医院消化内科 832008)

·论著·

幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜组织细胞因子变化的实验研究*

韩岩智，刘 浩，阮开学

(新疆石河子大学医学院第一附属医院消化内科 832008)

目的 研究幽门螺旋杆菌(简称幽门螺杆菌)感染小鼠胃黏膜组织细胞因子变化,初步探讨幽门螺杆菌感染的免疫机制。方法 选取8～10周龄BALB/c小鼠24只，雌雄各半，分为观察组和对照组，两组造模前均禁食12 h，观察组以2×109CFU/mL浓度的幽门螺杆菌菌液 0.5 mL/d灌胃，连续7 d。对照组灌胃给生理盐水，0.5 mL/d，连续7 d，进行幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜造模。采用实时定量荧光PCR(Real-time PCR)检测检测感染2、4周后，小鼠血浆中γ干扰素(IFN-γ)、重组改构人肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)以及IL-10 mRNA的表达量，并于感染4周后，处死小鼠，无菌取各组小鼠的胃组织，采用酶联免疫吸附试验夹心法检测胃黏膜组织中IFN-γ、TNF-α、IL-8及IL-10蛋白的水平。结果 两组小鼠感染2周后，观察组IL-8高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。感染4周后，IFN-γ、TNF-α、IL-8的mRNA及蛋白表达量均明显上升，但观察组上升幅度明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TH2细胞在幽门螺杆菌感染中的作用表现不明显，能促进TH1型细胞细胞因子的表达，引发TH1为主的免疫反应。

螺杆菌，幽门；胃黏膜；细胞因子类；感染

近年来研究发现，幽门螺旋杆菌(下文简写为幽门螺杆菌)与胃溃疡、胃癌的发生密切相关[1-2]。细胞因子是指主要由免疫细胞分泌的、能调节细胞功能的小分子多肽，他们有调节机体多种细胞的生理功能，在胃肠道黏膜免疫系统中起着至关重要的调控作用[3-4]。本研究采用8～10周龄BALB/c小鼠12只，灌胃给幽门螺杆菌菌液，连续7 d，进行造模。之后采用实时定量荧光PCR(Real-time PCR)检测感染2、4周后各小鼠部分细胞因子mRNA的变化及酶联免疫吸附试验夹心法检测感染4周后小鼠胃黏膜组织中部分细胞因子蛋白的表达量。本文初步探讨了幽门螺杆菌感染的免疫机理，旨在为幽门螺杆菌的预防及治疗提供部分理论依据和重要参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选取8～10周龄BALB/c小鼠24只，雌雄各12只，体质量18～22 g。分为观察组和对照组，每组12只。各组小鼠在周龄、体质量、性别构成比以及灌胃给药操作等方面差异无统计学意义(均P>0.05)，说明两组小鼠具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 两组造模前均禁食12 h，观察组BALB/c小鼠灌胃给2×109CFU/mL浓度的幽门螺杆菌菌液，0.5 mL/d，连续7 d；对照组灌胃给生理盐水，0.5 mL/d，连续7 d[3]。之后正常饲养，自由饮食饮水。

1.2.2 检测血浆中γ干扰素(IFN-γ)、重组改构人肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)以及IL-10的表达量 感染2周后，从各组小鼠眼眶静脉丛采集小鼠的血液，感染4周后，采集小鼠的血液，并处死小鼠，无菌条件下取各组小鼠的胃黏膜组织。将血液样本进行离心3 500 r/min。采用Real-time PCR检测感染2、4周后，小鼠血浆中IFN-γ、TNF-α、IL-8以及IL-10 mRNA表达量。操作方法：首先，血浆总RNA的提取，进行逆转录；其次，将得到的cDNA后进行荧光PCR扩增。采用酶联免疫吸附试验夹心法检测胃黏膜组织中IFN-γ、TNF-α、IL-8以及IL-10蛋白的水平。取胃黏膜组织，匀浆，取上清液。仪器使用酶标仪，实验操作步骤严格按照试剂盒上的说明进行。

1.2.3 观察指标 幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜的造模后，分别检测感染2、4周后小鼠血浆中IFN-γ、TNF-α、IL-8以及IL-10 mRNA的表达量，以及感染4周后，检测胃黏膜组织中IFN-γ、TNF-α、IL-8以及IL-10蛋白的水平。

2 结果

2.1 感染2周后，两组小鼠血浆中IFN-γ、TNF-α、IL-8以及IL-10的mRNA表达量 感染2周后，将两组小鼠血浆中的IFN-γ、TNF-α、IL-8以及IL-10 mRNA表达量进行比较，观察组IL-8 mRNA的表达量，明显高于对照组，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 感染2周后血浆中各指标表达量的比较

2.2 感染4周后，两组小鼠血浆中IFN-γ、TNF-α、IL-8以及IL-10的mRNA表达量 感染4周后，将两组小鼠血浆中的IFN-γ、TNF-α、IL-8以及IL-10 mRNA表达量进行比较，IFN-γ、TNF-α以及IL-8的表达量，观察组明显高于对照组，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 感染4周后血浆中各指标表达量的比较

2.3 感染4周后，两组小鼠胃黏膜组织中IFN-γ、TNF-α、IL-8以及IL-10蛋白水平 感染4周后，将两组小鼠胃黏膜组织中IFN-γ、TNF-α、IL-8以及IL-10蛋白的水平进行比较，观察组IFN-γ、TNF-α以及IL-8蛋白的水平明显高于对照组，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 感染4周后胃黏膜组织中各指标蛋白水平的比较

3 讨论

幽门螺杆菌是一种呈S形或弧形弯曲状的微需氧细菌，呈革兰染色阴性[5-6]，寄生于胃黏膜上皮表面及胃内黏膜层腺腔中。有研究发现，幽门螺杆菌是慢性胃炎和消化性溃疡的重要致病因素之一[7-9]。本文分析了幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜组织细胞因子变化，初步探讨了幽门螺杆菌感染的免疫机制。

本组资料首先进行幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜组织造模，结果显示，各组小鼠感染2周后，观察组小鼠血浆中IFN-γ、TNF-α以及IL-10 mRNA表达量和对照组小鼠血浆比较差异无统计学意义，仅IL-8明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。感染4周后，观察组小鼠血浆中IFN-γ、TNF-α、IL-8以及IL-10的mRNA表达量明显高于对照组。观察组胃黏膜组织中IFN-γ、TNF-α、IL-8以及IL-10 mRNA的表达量明显高于对照组。感染4周后，观察组胃黏膜组织中IFN-γ、TNF-α、以及IL-8蛋白水平明显高于对照组。

由于IFN-γ能够增强各种炎症细胞如巨噬细胞、中性粒细胞的活性。TNF-α、IL-8均有很强的抗炎活性[10-11]。同时TNF-α能够正向调节IL-8的产生。IL-8具有强大的多形核细胞趋化性及激活的功能[12-13]。但感染4周后，无论是血浆中的IL-10 mRNA表达量还是胃黏膜组织中IL-10蛋白的水平与对照组相比较，均无明显变化。表明IL-10在幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜中上升不明显，说明幽门螺杆菌感染对TH2型细胞因子表达无明显作用[14-15]。综上所述，幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜组织，对TH2细胞作用表现不明显，但能促进TH1型细胞细胞因子的表达，引发TH1为主的免疫反应。

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Experimental study of cytokines in gastric mucosa of mice with Helicobacter pylori infection*

HanYanzhi,LiuHao,RuanKaixue

(DepartmentofInternalMedicine,theFirstAffiliatedHospitalofShiheziMedicalUniversity,Shihezi,Xinjiang832008,China)

Objective To study the change of cytokines in gastric mucosa of mice with Helicobacter pylori infection and explore the immune mechanism.Methods Twenty-four 8-10 weeks-old BALB/c mice were randomly divided into observation group and control group.After first 12 hours of fasting,observation group was given 0.5 mL/d Helicobacter pylori bacterial liquid with concentration of 2×109CFU/mL for 7 consecutive days.The control group was fed with 0.5 mL/d saline for 7 consecutive days.Then the mice were infected with Helicobacter pylori gast model was established.Using Real-time PCR to detect the expressions of IFN-γ,TNF-α,IL-8 and IL-10 in murine plasma within 2,4 weeks after infection.And after 4 weeks of infection,mice were sacrificed,and their stomach tissue sterile were separated.ELISA was used to detect the levels of IFN-γ,TNF-α,IL-8,and IL-10 mRNA in gastric mucosa.Results There was significantly difference between groups 2 weeks after infection(P<0.05).With lastingness of infection,the expression and the mRNA of IFN-γ,TNF-α,IL-8 were significantly increased,and the rate of increase of observation group was higher(P<0.05).Conclusion TH2 cells may have no effect on Helicobacter pylori infection in mice gastric mucosa and promote the expression of TH1-type cytokines,triggering immune response of TH1.

Helicobacter pylori;gastric mucosa;cytokines;infection

10.3969/j.issn.1671-8348.2015.03.002

国家自然科学基金资助项目(49201065)。 作者简介： 韩岩智(1981-),主治医师,硕士，主要从事消化内科及消化疾病内镜诊疗方向研究。

R332

A

1671-8348(2015)03-0293-02

2014-09-08

2014-11-21)