65例胸腹水细胞块免疫细胞化学的研究和分析

刘德美

65例胸腹水细胞块免疫细胞化学的研究和分析

刘德美

目的 探讨细胞块免疫细胞化学在胸腹水细胞学诊断中对提高肿瘤细胞阳性率、鉴别细胞良恶性、确定肿瘤细胞来源的临床意义。方法 回顾性分析收集的65例胸腹水涂片、细胞块和免疫细胞化学诊断, 并结合相关临床病史。结果 65例胸腹水中有3例涂片中仅见几个肿瘤细胞, 而细胞块为阴性, 其余62例标本涂片与细胞块检查结果完全相符；其中13例良性病变标本细胞涂片及细胞块均未查到肿瘤细胞或可疑细胞, 报告阴性；49例可疑阳性标本或需鉴定恶性肿瘤细胞来源的, 通过免疫细胞化学均得到准确结果。结论 细胞块免疫细胞化学在胸腹水肿瘤细胞学诊断中对细胞良恶性的鉴别和鉴别组织来源具有良好的应用价值, 值得推广, 但对提高阳性率方面细胞块不及普通涂片, 二者相互对照观察有助于提高判断结果准确性, 对于细胞块及免疫细胞化学的应用应注意与临床资料及细胞学形态相结合, 做到合理选择, 合理应用。

细胞块；免疫细胞化学；胸腹水；肿瘤细胞

近年来, 随着恶性肿瘤的发病率逐年升高并有年轻化的趋势, 肿瘤的早期发现、诊断和治疗已成为医疗界的重点和难点课题［1］。特别对于浆膜腔积液是唯一体征的就诊患者,其细胞学检查则显得极为重要。因很多恶性肿瘤常仅表现为体腔积液而原发部位隐匿［2］, 而单靠细胞形态很难明确肿瘤细胞来源和肿瘤细胞类型, 因此免疫细胞化学的检测对鉴别诊断非常有价值［3,4］。近年来, 随着细胞块及免疫学检测技术的发展和完善、抗原的纯化和抗体制备技术的提高, 免疫细胞化学技术已成为辅助细胞病理学诊断的重要方法［5］。本文收集了本院65例胸腹水标本, 进行普通涂片、细胞块及免疫细胞化学检测分析, 旨在探讨细胞块免疫细胞化学在胸腹水肿瘤细胞学诊断中对于提高肿瘤细胞阳性率、鉴别细胞良恶性、确定恶性细胞来源的临床意义, 现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 65例送检标本包括胸水47例, 腹水18例,所有标本均来自本院2014年1～7月住院及门诊患者, 其中男36例, 年龄32～80岁, 平均年龄61.6岁；女29例, 年龄29～81岁, 平均60.1岁。65例中37例具有恶性肿瘤病史, 28例以胸腹水为首发症状, 表现为胸闷、纳差、腹胀、肺不张、肺炎、胃溃疡、冠心病、电解质紊乱等, B超或CT检查显示胸腹腔积液。

1.2 标本处理 将临床送检的胸腹水标本置于50 ml离心管内, 2000 r/min离心10 min, 弃取上清液, 取离心后沉淀物或中间层的白膜(有核细胞层)涂片2张, 95%酒精固定、HE染色；剩余标本(如果细胞量少则需多次离心)加入10%福尔马林固定液, 离心、用滤纸包裹细胞团、脱水、浸蜡、包埋,制成石蜡细胞块, 切片1张, HE染色。

1.3 免疫细胞化学染色 所用免疫化学试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司, 方法采用SP法, 所有操作均由经验丰富的专业技术人员按说明书及标准操作完成。本室胸腹水免疫细胞化学常用检测项目有26项。见表1。

表1 常用免疫细胞化学检测项目

1.4 细胞形态学观察 观察细胞涂片的一般情况、细胞大小、形态、排列及细胞核的大小、形态、核浆比、染色质、核仁 、核膜、胞浆等特点并结合临床资料, 判定细胞良恶性。细胞形态学观察及判定标准参照诊断细胞病理学及细胞病理学鉴别诊断彩色图谱［2,6］, 如良性间皮细胞形态：细胞圆形、边界清晰或微绒毛、核中心或偏心位、圆形或肾形、核膜边界清晰、光滑、染色质细颗粒状、均匀分布、单个或多个微小核仁、浆丰富、淡或浓、外周渐淡。腺癌细胞学特点：胞体大、大小不一、核浆比高、核畸形、核偏位、染色质粗糙、深染、胞浆丰富、多有分泌现象、常成团或乳头状排列等。普通涂片与细胞块切片对照观察, 对发现可疑细胞不能明确诊断者或有肿瘤细胞不能明确来源及肿瘤类型者, 选择相应的免疫细胞化学项目进一步检测；对于涂片中仅有几个肿瘤细胞, 而细胞块中未发现可疑细胞者, 不再进行免疫化学检测。1.5 免疫细胞化学结果判定 以原始涂片及细胞块中细胞学形态为基础, 充分观察免疫化学标记后的目的细胞形态,结合不同抗体标记细胞不同的阳性部位及抗原在组织细胞分布的不规则性, 避免假阳性及假阴性, 严格按标准、准确判读免疫细胞化学标记结果。

2 结果

65例胸腹水中有3例涂片仅见几个肿瘤细胞, 而细胞块为阴性, 其余62例标本涂片与细胞块检查结果完全相符(占95.4%)；其中13例良性病变标本涂片及细胞块均未查到肿瘤细胞或可疑细胞, 报告阴性；5例可疑阳性及44例需鉴定肿瘤细胞来源的标本, 通过免疫细胞化学均明确诊断结果。

65例标本恶性肿瘤细胞阳性52例(占80.0%), 其中3例因肿瘤细胞极少, 结合临床资料以细胞涂片结果报告；其余49例可疑阳性或阳性标本根据各例不同的细胞形态及鉴别诊断需要、参考临床资料, 选择不同的项目组合, 进行相应的免疫细胞化学检测证实或进一步确证为：肺癌27例, 卵巢癌14例, 胃肠道癌5例, 乳腺癌1例, 食管癌1例, 胰腺癌1例, 肾恶性肿瘤1例, 纵隔肿瘤1例, 恶性鞘膜瘤病1例。

52例恶性肿瘤胸腹水中腺癌38例, 占73.1 %；小细胞癌4例, 占7.7 %；鳞癌3例, 占5.8 %；其他恶性肿瘤5例,占9.6 %；细胞学不能明确类型者2例, 占3.8%。

3 讨论

近年来, 随着细胞学特别是细胞块技术的发展, 免疫化学技术在胸腹水细胞学诊断中得到了进一步的应用。魏谨等［7］报道胸腔积液细胞块组阳性率为83.3%(25/30), 高于常规涂片组46.7%(14/30), 两者差异有统计学意义。而本文对65例胸腹水细胞块及免疫细胞化学研究显示, 常规涂片组(真阳性率80%)敏感度略高于细胞块组(真阳性率75%), 提示在提高肿瘤细胞阳性率方面, 尤其当肿瘤细胞极少时, 细胞块并不具优势。对于细胞形态学观察, 常规涂片中细胞形态舒展, 可观察细胞量大, 易于辨认；而细胞块在制作过程中因脱水固定等程序, 使细胞体积相对变小, 形态略有变化,故不及常规涂片中形态典型, 但肿瘤细胞的排列更接近组织学, 便于与组织学对照, 因此对于细胞块中细胞形态观察特别是异型性不明显的单个肿瘤细胞的观察, 应与常规涂片相对照, 二者相互结合对照观察可以弥补形态诊断上的不足。但细胞块具有可连续切片、可重复性、易于保存、做免疫组化染色定位准确、阳性率高、特异性强等优点［8-10］是普通涂片无法比拟的。

细胞块免疫细胞化学对于鉴别细胞良恶性直接体现于对细胞组织学来源的推断。通过免疫化学标记胸腹水中的可疑细胞为外来细胞特别是上皮源性的细胞等, 间接判定良恶性。本文有5例胸腹水发现可疑细胞, 通过免疫化学标记明确诊断为癌细胞, 49例标本通过细胞块免疫细胞化学检测, 明确诊断及组织类型45例(91.8%), 结合临床资料符合诊断2例,仅能鉴别良恶性细胞但不能明确组织类型者2例。这可能与抗体特异性及抗体组合的合理选用有关, 也与免疫细胞化学检测技术的局限性有关, 有待于进一步研究和探索。

关于抗体组合的合理选用, 一般应遵循两个原则, 一是确定性指标与排除性指标联合应用, 二是采用双标的方法。即选择一组至少两种互相支持的抗体, 同时再选用反向否定的抗体, 以同时获得双重互补, 正反两方面的证实。同时为避免假阳性和假阴性的发生, 选择正确的阳性和阴性对照。因为抗体的相对特异性和一种抗原在同一种肿瘤以及不同肿瘤间的异源性表达, 仅用一种抗体辅助诊断易产生误差, 故宜选用几种适当的抗体组合应用以提高诊断的敏感性和特异性［9,11］。本文对65例胸腹水细胞学诊断研究显示, 细胞块免疫细胞化学在胸腹水肿瘤细胞学诊断中对于细胞良恶性的鉴别和鉴别组织来源具有良好的应用价值, 值得推广应用。但在应用过程中必须注意以细胞形态学为基础, 与临床资料相结合, 合理选择检测项目, 做到三者联合应用, 对于提高细胞学诊断水平至关重要。

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Research and analysis of cell mass immunocytochemistry in 65 hydrothorax and ascite cases

LIU De- mei.Department of Pathology, Shandong Weifang City People’s Hospital, Weifang 261041, China

Objective To investigate clinical significance of cell mass immunocytochemistry in improving positive rate of tumor cell, identifying benign and malignant cells, determining tumor cell source in hydrothorax and ascite cytological diagnosis.Methods A retrospective analysis along with related clinical data was made on hydrothorax and ascite smear, cell mass, and immunocytochemical diagnosis in 65 cases.Results Among 65 hydrothorax and ascite cases, 3 cases of them had very few tumor cells with negative cell mass.The other 62 cases had totally corresponding smear and detection results.There were 13 cases without tumor cell or suspected cell in benign smear and cell mass, with negative report.There were 49 cases had accurate results for suspected positive smear and malignant cell source by immunocytochemistry.Conclusion Cell mass immunocytochemistry provides good application value for identification of benign and malignant cell and tissue source, and it is worthy of promotion.Its positive rate is lower than normal smear in improvement, and their combination can improve accuracy of diagnosis.Combined clinical data and cellular morphology are necessary for cell mass and immunocytochemistry.It is necessary for rational choice and application.

Cell mass; Immunocytochemistry; Hydrothorax and ascite; Tumor cell

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.19.009

2015-01-30］

261041 山东省潍坊市人民医院病理科