白英乙醇提取物对四氯化碳诱导的急性肝损伤的保护作用

李国天

白英乙醇提取物对四氯化碳诱导的急性肝损伤的保护作用

李国天

目的 观察白英乙醇提取物(EEST)对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠急性肝坏死的影响。方法 将Wistar大鼠分为五组, 每组10只。对照组(A组)、CCl4组(B组)、150 mg/kg EEST+ CCl4组(C组)、300 mg/kg EEST+CCl4组(D组)和50 mg/kg Silibinin + CCl4组(E组)灌胃7 d, 1次/d, 0.5 ml/次, 最后1 d, A组腹腔注射生理盐水, 余各组腹腔注射CCl41 ml/kg。16 h后检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基酸转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)；肝组织苏木素-伊红(HE)染色观察病变程度；黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分别检测肝匀浆中超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)。结果 与A组比较, B组血清中ALT、AST、ALP的含量显著增加, 差异有统计学意义(P＜0.05), HE染色肝组织变性坏死累及全小叶。与B组比较, C、D、E组血清中ALT、AST、ALP的含量显著下降, 差异有统计学意义(P＜0.05), HE染色病变程度较轻；胞浆中SOD和CAT活性提高、MDA水平降低, 差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 EEST能显著减轻CCl4诱导的肝损伤, 可能与EEST抗脂质过氧化作用有关。

白英；大鼠；四氯化碳；肝损伤

茄科植物白英(solanum lyratum thunb)又名白毛藤, 主产于江苏、浙江、江西, 据《中华本草》记载具有清热解毒、祛风利湿、化瘀等作用。临床常用于治疗感冒发热、胆囊炎、胆石病、癌症、子宫颈糜烂、白带异常等病症［1-3］。CCl4等直接肝毒性物质, 除了职业性接触外, 越来越严重的污染到了水源和空气［4］。鉴于脂质过氧化, 自由基生成是CCl4肝损伤的主要机制之一, 本实验通过观察EEST作用于CCl4肝损伤的急性动物模型, 探讨EEST对CCl4急性肝损伤的影响。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 试剂仪器及EEST的制备 Wistar大鼠［延边大学医学部实验动物科, 合格证号, SCXK(吉)2003-000］, 四氯化碳, 乙醚、HE染液、SOD、CAT、MDA测定试剂盒、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒、多聚甲醛(上海华美生物公司),酶联免疫检测(RT2100C, 美国), 显微镜及摄像机(Nikon), Microfuge22R台式冷冻离心机(Beckman Coulter), 全自动生化分析仪(Beckman Coulter), 真彩色病理显微图像分析系统(CH30RF200)。取干燥的白英400 g(延边大学附属医院药剂科提供)加3000 ml 70%乙醇, 用萃取机萃取3 h, 将取得的萃取液用滤纸过滤, 然后使用回转真空浓缩机, 上清液在45℃减压浓缩, 经冷冻干燥得粉末, 临用前以蒸馏水或生理盐水配置。

1.2 动物分组及给药与CCl4注射制作方法 Wistar大鼠50只, 清洁级, 雄性, 平均体重(200±30)g, 随机分成五组, 每组10只。对照组(A组)、CCl4组(B组)、150 mg/kg EEST+ CCl4组(C组)、300 mg/kg EEST+CCl4组(D组)和50 mg/kg Silibinin + CCl4组(E组)灌胃7 d, 1次/d, 0.5 ml/次, 最后1 d, A组腹腔注射生理盐水, 余各组腹腔注射CCl41 ml/kg［5］。16 h后乙醚麻醉打开胸腔取血, 取肝脏。

1.3 血清ALT、AST、ALP测定和肝组织病理学观察 大鼠打开胸腔后, 从左心室直接抽血5 ml, 37℃ 温浴10 min, 3000 r/min离心, 10 min, 取上血清1000 μl, 全自动生化分析仪测定ALT、AST、ALP。肝组织学观察在同一部位切取1块肝组织, 以10%甲醛固定后制备石蜡切片, HE染色, 在光镜下观察肝组织变化。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 实施t检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EEST对血清中ALT、AST、ALP含量的影响 与A组比较, B组血清中ALT、AST、ALP的含量显著增加, 差异有统计学意义(P＜0.05)。与B组比较, C、D、E组ALT、AST、ALP下降, 差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.2 EEST对肝匀浆SOD、CAT与MDA的影响 与A组比较, B组胞浆和线粒体中的SOD、CAT活性降低, 差异有统计学意义(P＜0.05), MDA的含量升高, 差异有统计学意义(P＜0.05)。与 B组比较, C、D、E组胞浆中SOD、CAT的活性显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05), MDA的含量显著降低, 差异有统计学意义(P＜0.05)；线粒体中的CCl4活性增加, MDA含量降低差异无统计学意义(P＞0.05)；C、D组胞浆和线粒体中SOD、CAT活性均显著增加, 差异有统计学意义(P＜0.05), 降低MDA含量差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表1 EEST对CCl4所致肝损伤小鼠血清中ALT、AST及ALP活性的影响(-x±s, U/L)

表2 EEST对CCl4诱导大鼠肝组织中SOD、CAT及MDA含量的影响( x-±s)

2.3 EEST对肝组织变性坏死的影响 B组肝细胞气球样变性, 液化性坏死, 变性坏死范围几乎波及全小叶, 有多种炎症细胞浸润。C、D组变性坏死明显减少, 炎症细胞数减少。

3 讨论

CCl4是氯化烷烃类化合物, 可直接溶解肝细胞膜, 同时, CCl4经肝细胞色素P450依赖性功能氧化酶的代谢, 生成活泼的三氯甲基自由基和氯基自由基, 启动脂质过氧化作用, 致肝细胞损伤［6］。CCl4目前主要被用于动物肝损伤模型［7］。CCl4导致肝损伤的详细机制仍是不太明确, 目前认为与CCl4自身和其自由基代谢产物有关。CCl4直接导致肝细胞膜完整性破坏, 可能由于细胞膜结构主要成分不饱和脂肪酸的过氧化,膜蛋白变性所致, CCl4长期作用后可导致胶原纤维沉积, 可能是CCl4诱发肝纤维化的机制之一［8］。丝氨酸蛋白酶凝血酶是中枢因子, 在四氯化碳处理72 h后, 凝血酶原活化达到最大值, 随后在168 h降至基础水平。组织损伤指数-丙氨酸转氨酶活性在处理后36 h显著升高, 至72 h基本恢复正常水平。另外, CCl4代谢产物还可以刺激肝脏枯否细胞, 释放促炎性细胞因子, 进一步加重肝脏的损伤。脂肪过氧化的副产物如反应性醛类还可以结合胞内正常的蛋白质和DNA,具有肝毒性和致癌作用。本研究HE染色病理切片证实了EEST较CCl4组显著改善肝小叶变性、坏死的范围和程度,证明EEST对CCl4诱导的急性肝损伤有保护作用。

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Protective effect of Solanum lyratum Thunb ethanol extract for carbon tetrachloride-induced acute liver injury

LI Guo-tian.Department of Neurosurgery, Jilin Yanji City Hospital, Yanji 133000, China

Objective To observe the influence of Solanum lyratum Thunb ethanol extract (EEST) on carbon tetrachloride (CCl4)-induced rats acute liver injury.Methods Wistar rates were divided into five groups, with 10 rates in each group.Control group (group A), CCl4group (group B), 150 mg/kg EEST + CCl4group (group C), 300 mg/kg EEST + CCl4group (group D), and 50 mg/kg Silibinin + CCl4group (group E) all received lavage for 7 d by 0.5 ml each time and once a day.On the last 1 d, group A received intraperitoneal injection of normal saline, and the other groups received intraperitoneal injection of CCl4by 1 ml/kg.Detection after 16 h was made on serum alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), and alkaline phosphatase (ALP).Lesion extent was observed by liver tissue hematoxylin-eosin (HE).Xanthine oxidase method and thiobarbituric acid method were applied respectively in detection of liver homogenate superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and methane dicarboxylic aldehyde (MDA).Results Compared with group A, group B had obviously increased ALT, AST, and ALP contents, and the difference had statistical significance (P＜0.05).HE staining showed degenerative necrosis of liver tissue involved lobule.Compared with group B, groups C, D and E had remarkably decreased ALT, AST, and ALP contents, and their difference had statistical significance (P＜0.05).HE staining showed mild lesion.SOD and CAT had increased activity in cytoplasm, while MDA level was reduced.The difference had statistical significance (P＜0.05).Conclusion EEST can remarkably reduce CCl4-induced liver injury, and it may be correlated with anti-lipid peroxidation effect of EEST.

Solanum lyratum Thunb; Rat; Carbon tetrachloride; Liver injury

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.19.004

2015-02-05］

133000 吉林省延吉市医院神经外科