高效液相色谱法测定健阳片中淫羊藿苷含量

谭安军

(重庆市永川区中医院，重庆 402160)

健阳片是卫生部《药品标准中药成方制剂(第八册)》(WS3－B－1604－93)收载品种，由淫羊藿提取物、蜈蚣粉、甘草提取物、蜂王浆精制而成的中药复方制剂，功效为补肾益精、助阳兴萎，用于肾虚阳衰引起的阳萎、早泄等性功能低下症。其质量标准项目下只有简单的颜色反应和薄层鉴别试验。为有效控制产品质量，笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定本制剂组方中君药淫羊藿主要成分淫羊藿苷的含量，为完善、提升该制剂质量控制提供理论依据。

1 仪器与试药

Waters Alliance 2695/2996型高效液相色谱仪，Empower色谱工作站(美国Waters公司)。淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110737－200414);乙腈为色谱纯、水为纯化水;健阳片(市售，批号为 140501，140502，140503)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Waters Symmetry C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 －水(30∶70);流速:1.0 mL/min;检测波长:270 nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3 000。

2.2 溶液制备

称取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.12 mg的溶液，作为对照品溶液。取重量差异项下的本品20片，除去糖衣层，研细，取0.3 g，精密称定，置100 mL容量瓶中，加甲醇80 mL超声提取20 min，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，取续滤液，即得供试品溶液。按健阳片制备工艺，制备缺淫羊藿的阴性样品，照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性考察:照上述色谱条件，取2.2项下3种液溶液各10 μL，进样测定。供试品溶液色谱中，在与淫羊藿苷对照品溶液色谱图相应位置上有一相应色谱峰，阴性对照品溶液则无此峰，表明阴性样品对测定无干扰，选择性较好。色谱图见图1。

线性关系考察:精密吸取对照品溶液 2，4，8，16，20 μL，注入液相色谱仪，以淫羊藿苷进样量(μg)为横坐标、峰面积为纵坐标(Y)进行回归分析，得回归方程 Y=210 729X－13 213，r=0.999 9(n=5)。结果表明，淫羊藿苷进样量在 0.24 ～2.40 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。

图1 高效液相色谱图

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样5次。结果淫羊藿苷峰面积的 RSD为0.94%(n=5)，表明仪器精密度好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，1，4，8，14 h进样。结果淫羊藿苷峰面积的 RSD为1.10%(n=5)，表明供试品溶液在14 h内稳定性良好。

重复性试验:按拟订的含量测定方法，取同一批样品(批号为20140501)6份测定，计算含量。结果样品中淫羊藿苷平均含量为每片含 10.72 mg，RSD 为 1.04%(n=6)。

加样回收试验:取已知含量的样品(批号为20140501)6份，分别加入淫羊藿苷对照品，按拟订色谱条件，依法测定淫羊藿苷含量，计算回收率。结果见表1。

表1 淫羊藿苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3批样品，按供试品溶液制备方法，并依法测定样品中淫羊藿苷含量。结果批号为140501，140502，140503样品每片含量分别为 10.72，10.97，10.66 mg。

3 讨论

[1]，选用乙腈－水系统作为流动相，基线平稳，经多次试验，该流动相能使样品中淫羊藿苷峰与相邻色谱峰达到基线分离且分离良好，峰形对称，阴性对照无干扰。

供试品溶液制备方法参考文献[2－5]，分别对提取溶剂的种类、提取次数、超声处理时间进行了考察。试验结果表明，供试品制备方法采用超声提取20 min，淫羊藿苷的含量趋于稳定，运用平行测定方法，计算含量的 RSD符合相关规定。

根据文献[6－9]报道，分别对不同厂家、不同规格的色谱柱进行筛选试验。结果表明，采用Waters Symmetry C18柱色谱图基线平稳，峰形对称。

采用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量，方法快速、准确、峰形对称，可用于健阳片的质量控制。

参考文献:

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