复方利多卡因乳膏体外透皮研究

贺亚静 ，武学鑫 ，周 洁 ，沈 腾 ，贺吉香

(1.山东中医药大学药学院，山东 济南 250355;2.复旦大学药学院药剂学教研室，上海 201203;3.山东宏济堂制药集团有限公司，山东 济南 250355)

复方利多卡因乳膏是由2.5%利多卡因和2.5%丙胺卡因通过形成低共熔混合物而制成的水包油型乳膏，是临床常用的皮肤表面局部麻醉制剂，常用于静脉穿刺、静脉插管和各种外科小手术操作的镇痛，尤其适用于儿童[1－3]。药代动力学研究显示，复方利多卡因乳膏涂于无损的皮肤时，有5%～10%的利多卡因和丙胺卡因被吸收，最高血浆药物浓度在中毒浓度以下，这表明该药在一定程度上能透皮进入血液循环。目前关于复方利多卡因乳膏的离体透皮规律少见报道[4]。因此，笔者采用离体大鼠腹部皮肤和改良Franz扩散池进行体外透皮试验，研究复方利多卡因乳膏的透皮规律，并与国外已上市产品(商品名为Emla)比较体外透皮规律的一致性。现报道如下。

1 仪器、试药与动物

Agilent－1260型高效液相色谱(HPLC)系统(美国Agilent公司);BT25S型分析天平(赛多利斯科学仪器＜北京＞有限公司);H1650型高速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司);PB－10型pH计(赛多利斯科学仪器＜北京＞有限公司);TK－20A型透皮扩散试验仪(上海锴凯科技贸易有限公司)。复方利多卡因乳膏(陕西兴邦药业有限公司，批号为120601，规格为每克膏体含利多卡因25 mg与丙胺卡因25 mg);Emla(英国阿斯利康公司，批号为PC5722A1，规格为每克膏体含利多卡因25 mg与丙胺卡因25 mg);空白复方利多卡因乳膏(批号为120601，陕西兴邦药业有限公司);利多卡因对照品(批号为100342－201003，含量为99.9%，中国药品生物制品检定所);盐酸丙胺卡因对照品(批号为P2939060，欧洲药典标准品);水(Millipore超纯水)，甲醇(色谱级，Merk公司)，磷酸二氢铵(批号为F20110923，国药集团化学试剂有限公司)。SD大鼠，雄性，体重250 g(上海西普尔－必凯实验动物有限公司，动物合格证号为SYXK＜沪2011－0099＞)。

2 方法与结果

2.1 含量测定[高效液相色谱(HPLC)法]

2.1.1 色谱条件

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇 －0.5%磷酸二氢铵(70 ∶30，pH=7.0);流速:1 mL/min;检测波长:220 nm;柱温:35℃;进样量:20 μL;理论板数不低于5 000。

2.1.2 溶液制备

分别精密称取利多卡因7.0 mg和盐酸丙胺卡因7.0 mg(相当于丙胺卡因6.01 mg)，置50 mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，得质量浓度为140 μg/mL的贮备液。

2.1.3 方法学考察

专属性试验:取空白复方利多卡因乳膏，按2.2.2项下方法试验，8 h后取出接受液，作为阴性对照品溶液;取接受液的阴性对照品溶液A、供试品溶液B和标准溶液C(利多卡因5.6 μg/mL和丙胺卡因4.8μg/mL)，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1。利多卡因的保留时间约为6.2 min，丙胺卡因约为9.8 min，表明接受液中的杂质对测定无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取贮备液 0.04，0.10，0.20，1.00，2.00，3.00 mL，置25 mL容量瓶中，用流动相稀释并定容至刻度，得系列质量浓度的利多卡因和丙胺卡因混合标准溶液。将上述标准溶液注入HPLC仪，以峰面积(A)与标准溶液质量浓度(C)进行线性回归，回归方程利多卡因为 C=0.014 1A+0.004 1(r=0.999 99)，丙胺卡因为 C=0.018 4 A+0.000 6(r=0.999 98)。结果表明，利多卡因和丙胺卡因质量浓度分别在 0.224 ～16.8 μg/mL 和0.192 ～14.414 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

回收试验:取空白复方利多卡因乳膏，均匀涂抹于离体皮肤上，按2.2.2项下方法试验，8 h后取出全部接受液，作为空白透皮接受液;精密吸取贮备液 0.1，1，3 mL，置 10 mL容量瓶中，用空白透皮接受液稀释至刻度。每个浓度平行制备6份，过滤，取续滤液测定。结果低、中、高质量浓度的平均回收率利多卡因分别为97.20% ，99.03% ，98.36%(n=6)，丙胺卡因分别为 94.69% ，99.13%，97.82% ，RSD 均小于 3%(n=6)。

最低定量限及最低检测限确定:以信噪比3∶1时作为最低检测限，信噪比10∶1时作为最低定量限。结果利多卡因和丙胺卡因的最低检测限为9.8 ng，最低定量限为26.4 ng。

精密度试验:取回收试验中的供试品溶液，按拟订色谱进样，分别连续进样6次，结果利多卡因和丙胺卡因的 RSD分别为0.12%和0.55%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取回收试验中的供试品溶液，于 0，1，2，4，8，12，24，48 h时进样，记录峰面积。结果低、中、高质量浓度的 RSD值，利多卡因分别为 0.817% ，0.212% 和 0.227%(n=8)，丙胺卡因分别为 1.134% ，0.656% ，0.507%(n=8)，表明供试品溶液在48 h内稳定。

2.2 体外透皮试验

2.2.1 大鼠腹部皮肤处理

取SD大鼠，水合氯醛麻醉，使用电动剃毛刀和眼科剪去除腹部毛发，将大鼠断颈处死，剥离腹部皮肤，去除皮下组织，用生理盐水冲洗，于－20℃条件下保存，备用。

2.2.2 体外透皮试验

采用改良Franz扩散池进行体外透皮试验。离体皮肤固定于供给池与接受池之间，皮肤的角质层面向供给池，有效涂药面积约 3.14 cm2，以约 17 mL的水为接受液，将扩散池置于(37±0.5)℃的恒温水浴中，开动电磁搅拌，转速为200 r/min。分别于0.5，1，2，3，4，5，6，8 h 取接受液 10 mL，并立即补充等量、等温度的接受液。接受液经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液进行HPLC测定。

2.3 试验结果

供试药和对照药于不同时间点所测定的利多卡因和丙胺卡因的累积透皮量(Q)见图2。供试药和对照药中利多卡因8 h累积透皮量分别为2.11 mg和2.04 mg;丙胺卡因8 h累积透皮量分别为 2.41 mg和 2.38 mg。经 t检验，均无显著性差异(P ＞0.05)。将达稳态的累积透皮量与时间 t进行线性回归，得线性方程和流通量(J)，结果见表1。可见，各线性方程的相关系数良好，复方利多卡因乳膏透皮行为符合零级动力学方程。供试药和对照药中利多卡因和丙胺卡因的流通量经 t检验，无显著性差异(P＞0.05)。

图2 供试药和对照药不同时间的累积透皮量

表1 利多卡因和丙胺卡因透皮动力学方程拟合结果

3 讨论

利多卡因和丙胺卡因的常用检测波长位于210～265 nm，笔者用流动相分别配制两药(质量浓度均为15 μg/mL)进行紫外扫描。结果显示，丙胺卡因在220～232 nm吸光度几乎不变，而利多卡因在210～250 nm吸光度随波长增加而急剧降低。最终采用220 nm的检测波长，既能同时检测到两药透皮1 h的接受液浓度，又避免了皮肤杂质和有机溶剂截止波长的干扰。国内外文献报道，利多卡因透皮试验常见的接收液为水、生理盐水和pH=7.4的磷酸盐缓冲液，故需进行溶解度试验以筛选合适的接受液。结果显示，在pH=7.4的磷酸盐缓冲液、水、生理盐水中，利多卡因的溶解度分别为 9.83，5.31，3.42 g/L;丙胺卡因的溶解度分别为2.71，5.92，1.71 g/L。在本试验透皮条件下，选择水作为介质，既满足漏槽条件，又简单、方便。

目前，单独报道利多卡因透皮的试验比较多[5－7]，但利多卡因与丙胺卡因同时透皮的试验报道较少。本试验结果显示，供试药和对照药透皮8 h接受液中利多卡因的累计透皮率分别为34.53% 和 32.37% ，丙胺卡因为 39.55% 和 37.71% 。而 Emla 乳膏人体药学研究显示，两药有5%～10%被吸收进入体内。本试验结果显示，两药鼠皮透皮率远大于人皮，这可能是由于鼠皮与人皮在结构组成和角质层组分差异较大所致。由于人皮难以获得，故采用鼠皮进行复方利多卡因乳膏体外透皮规律的比较。

对复方利多卡因乳膏的透皮参数进行统计，结果显示供试药和对照药中两药的流通量无显著性差异(P＞0.05)，且均符合零级透皮规律，表明供试药和对照药的体外透皮性能一致。通常采用透皮促进剂或者新型给药技术增加药物的经皮吸收[8－9]。而复方利多卡因乳膏则是利用利多卡因和丙胺卡因形成低共熔混合物而促进两药透皮，其作用机制是药物熔点降低致使热力学活度增加，从而有利于提高药物的流通量，并能降低时滞[10]。表1结果显示，两药的透皮时滞均较低，这显然有利于更快发挥复方利多卡因乳膏的局部麻醉作用。

[1]Kaweski SS.Topical anesthetic creams[J].Plastic and Reconstructive Surgery，2008，121(6):2 161 － 2 165.

[2]舒成仁，葛苗苗，黄 露，等.复方利多卡因乳膏体外透皮吸收实验[J].医药导报，2011，30(8):997 －999.

[3]柯光明，王 丽，王 平，等.利多卡因－月桂醇二元共熔系统的体外经皮渗透[J].药学学报，2005，40(8):764－768.

[4]刁雨辉，袁荣刚，周建平.复方利多卡因乳膏体外透皮吸收研究[J].中国药科大学学报，2002，33(6):489－491.

[5]申玉坤，周晋阳，申玉璞，等.盐酸利多卡因柔性纳米脂质体对小鼠皮肤的渗透性[J].中国医药杂志，2013，44(10):1 001－1 004.

[6]梁哲浩，梁文权，孙华琴.超声波促进盐酸利多卡因经皮渗透的研究[J].中国现代应用药学，2014，31(4):437 － 441.

[7]Wang Y，Su WY，Li CY，et al.Preparation and evaluation of lidocaine hydrochloride－loaded TAT－conjugated polymeric liposomes for transdermal delivery[J].International Journal of Pharmaceutics，2013，441(1 －2):748－756.

[8]周 开，岑锐标，陈伯从.不同促渗剂对蛇床子软膏透皮吸收特性的影响[J].中国药业，2013，22(14):34 －35.

[9]刘雪丽，周雪峰，王晓璐，等.促进药物透皮吸收剂型研究进展[J].中国药业，2012，21(2):77 －78.

[10]Marwah H，Garg T，Goyal AK，et al.Permeation enhancer strategies in transdermal drug delivery[J].Drug Deliv，2014，9:1 － 15.