高效液相色谱法测定抗病毒药物溶出度的研究

王俊尹

【摘要】本文主要针对高效液相色谱法测定抗病毒药物溶出度展开了研究，通过结合具体的试验实例，对试验所用的方法与结果作了详细的介绍，并论述了最后所得的结果，以期能为有关方面的需要提供参考借鉴。

【关键词】高效液相色谱法；抗病毒药物；溶出度

【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2015）01-0451-02

所谓的高效液相色谱法，是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、緩冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测。其具有着高压、高速、高效等特点，在抗病毒药物溶出度的测定中有着广泛应用。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1200高效液相色谱仪；四元泵；UV2450紫外分光光度计；ZRS-8G型智能溶出试验仪；Simplicity超纯水机；MS205DU电子天平。

1.2 试剂与试药

阿昔洛韦对照品；阿昔洛韦片规格0.1g；甲醇；水为超纯水；氢氧化钠；盐酸。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：依利特BDSC18（150mm×4.6mm，5μm）；柱温：30℃；流动相：甲醇-水（10∶90）；流速：1.0mL·min-1；检测波长：254nm；进样体积：20μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取阿昔洛韦对照品23.32mg，置于25mL量瓶中，用0.4%氢氧化钠溶液适量溶解并用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液S。

2.3 溶出介质的配制

根据张启明等报道的溶出介质的选择原则，参考金丽等多条实时溶出曲线对阿昔洛韦片的质量再评价，结合阿昔洛韦的理化性质及国家食品药品监督管理局国家药品标准WS1-（X-054）-2003Z中阿昔洛韦分散片的溶出介质为水，本文采用两种pH值对比试验，分别以水，0.1mol·L-1的盐酸溶液为溶出介质进行溶出度检查。其它条件按《中国药典》2010年版二部阿昔洛韦片检查项下的溶出度测定条件：采用转浆法，水浴温度37.0±0.5℃，转速50r·min-1，溶出时间30min，溶出介质900mL。

2.4 方法学考察

2.4.1线性关系的考察：取“2.2项下”配制的对照品溶液，用水稀释成系列浓度（4.664，9.328，18.656，27.984，46.64，93.28）μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取20μL注入液相色谱仪，按“2.1”色谱条件进行测定，记录色谱图，以峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，得到回归方程：A=67.0880C+7.5073，r=0.9999。在4.664μg·mL-1～93.28μg·mL-1范围内，浓度与峰面积成良好的线性关系。

2.4.2精密度试验：精密度取浓度为18.656μg·mL-1对照品溶液20μL注入液相色谱仪，重复进样6次，测定峰面积，RSD=0.2%（n=6）。

2.4.3重现性试验：取同一批号的样品（A来源：某公司批号：20131104）按“2.3”项下操作，按“2.1”色谱条件进行测定3次，测得其溶出量的RSD为0.3%（n=3）。结果表明该方法重现性良好。

2.4.4稳定性试验：精密吸取同一批号的样品（同上）溶液20μL，分别于0，2，4，6，8，12h进样，测定峰面积，RSD=0.6%（n=6）。

2.4.5干扰实验：分别吸取0.1mol·L-1盐酸溶液A，水B，对照品溶液C，供试品溶液（溶出介质为0.1mol·L-1盐酸溶液D，溶出介质为水E）各20μL，在“2.1”色谱条件下进行测定。高效液相色谱图谱中，0.1mol·L-1盐酸溶液在254nm有较大的紫外吸收，水无紫外吸收，供试品溶液中盐酸溶液可见明显溶剂峰，但保留时间tR与阿昔洛韦对照品不同。

2.4.6加样回收率试验：采用加样回收法，精密称取已知含量的阿昔洛韦片（同上）适量，精密加入5mL的对照品溶液S，置于25mL量瓶中，用水稀释成约20μg·mL-1的溶液，分别取上述溶液20μL，注入液相色谱仪，计算加样回收率（见表1）。

表1 加样回收率试验结果（n=9）（mg）

2.5 样品测定

取“1.2”项下阿昔洛韦片，按“2.3”项下制备供试品溶液，在“2.1”色谱条件下测定，记录色谱图，按外标法计算每批的溶出结果，同时将药典方法的数据进行比较，结果表明3批不同厂家的阿昔洛韦片在以水为溶出介质与以0.1mol·L-1的盐酸溶液（9-1000）为溶出介质下溶出度均符合标准规定的标示量的80%的限度要求，两种介质，两种测定方法结果基本一致（见表2、3）。

表2 阿昔洛韦片在水中溶出度结果

表3 阿昔洛韦片在盐酸溶液溶出度结果

3 讨论

（1）药物的溶出度是评价药品质量及生产制备工艺的重要质控项目，能全面，科学地评价不同企业生产的同药品在体内的溶出行为是否一致。提供最优的标准的控制才能最真实的反应患者使用该药物的生物利用度。

（2）对比两组数据，高效液相色谱法溶出结果比紫外分光光度法数值小。是因为高效液相色谱法避免了溶出介质盐酸溶液的紫外吸收干扰，及样品中其他辅料的干扰。

（3）阿昔洛韦的紫外吸收光谱及其λmax的E（1%，1cm）值受pH（酸、中性、碱）的影响较大。按药典方法测定时，对溶出度结果有一定的干扰。0.1mol·L-1的盐酸溶液pH值为1.2，患者的胃液很难达到如此高值。水作为溶出介质可以满足溶出度限度要求，因此建议在《中国药典》2015年版修订时应考虑将水作为阿昔洛韦片的溶出度检查的溶出介质，同时采用高效液相色谱法测定。

4 结语

综上所述，本文就高效液相色谱法测定抗病毒药物溶出度进行了研究，并结合了具体的试验实例，对高效液相色谱法在抗病毒药物溶出度的测定试验作了系统的阐述，相信对有关测定试验方面的需要能有一定帮助。

参考文献：

[1]苗立红.高效液相色谱法测定替硝唑片的溶出度[J].首都医药.2014（20）.

[2]程佩素.高效液相色谱法测定多非利特胶囊的溶出度[J].中国药房.2006（23）.