黄疸肝病患者检测白细胞异常直方图原因探讨

孙燕飞

【摘要】  目的：探讨黄疸肝病患者应用K-4500血液分析仪检测白细胞计数出现一种异常直方图的原因。方法：白细胞计数出现异常直方图的黄疸肝病患者标本，同时用手工目视计数法进行白细胞计数，并对标本进行洗涤（去除黄疸血浆、白细胞、血小板），再应用K-4500检测白细胞，所得结果运用stata 7.0进行统计分析，并同时与肝功能指标做分析。结果：出现异常直方图的黄疸肝病患者标本，K-4500计数结果明显高于目视计数法，P<0.001;应用K-4500检测洗涤红细胞（去除黄疸血浆、白细胞、血小板）稀释样本，所得单位红细胞的白细胞结果与原样本差异无统计学意义，P>0.05。出现异常直方图的病例与对照组比较，肝功能部分指标差异有显著性，P<0.001。结论：出现此种异常直方图的黄疸标本的白细胞计数，仪器法结果明显高于手工法。而这一原因主要是由于红细胞破坏不完全所致，且与肝脏代谢异常有关。 【关键词】  黄疸;直方图;白细胞

1  材料与方法1.1  研究对象  我院肝科住院患者16例（慢性重症肝炎14例，肝硬化2例），黄疸（379.68±192.06）μmol/L，对照组为随机抽取肝科住院患者25例（肝硬化3例，慢性肝炎21例，肝癌1例），其白细胞直方图分布正常。1.2  试剂和材料  采用日本Sysmex公司的K-4500三分类血液分析仪，均采用原装进口试剂，用仪器配套的校正品校正后，质控品的测试结果均在控制范围内。1.3  方法1.3.1  仪器法  所有标本系静脉血2 ml注入含有15 g/L EDTAK2 20 μl的真空试管中，充分混匀抗凝，2 h内上机检测。当样本的白细胞直方图呈图1所示的特征性曲线时，将样本复检，2次结果均值作为仪器检测结果。1.3.2   手工法  2%冰醋酸   0.38 ml加入血样20 μl混匀，充入计數池进行白细胞计数，2次结果取均值为最终结果。此操作由2名技术熟练的检验师进行。1.3.3  镜下观察  将样本及对照标本（正常白细胞直方图）在机外模拟K-4500白细胞检测流程（稀释液0.994 ml，白细胞溶血素0.5 ml，全血6 μl，13 s）镜下观察。1.3.4  将样本去除血浆后用生理盐水洗涤，4 000 r/min离心15 min，去除白细胞及血小板层，再用生理盐水将红细胞稀释至原样本数，误差<5%。手工检测白细胞<0.2×109/L，血小板<5×109/L，再上机检测。1.3.5  两组对比  用stata 7.0统计软件分析异常直方图样本组与对照组的肝功能生化指标，试寻找出现异常直方图的代谢基础。 2  结果2.1  白细胞计数  异常直方图样本的白细胞总数，仪器检测（69.34±43.23）×109/L，手工检测（5.4±2.16）×109/L，仪器检测白细胞总数比手工检测显著增高。配对t检验，t值为6.126 4，P<0.001。对照标本仪器检测（4.61±1.77）×109/L，手工检测（4.52±1.55）×109/L，两结果差异无统计学意义。t值为0.190 7，P>0.5。2.2  样本在机外模拟K-4500白细胞检测流程，镜下观察到一些碎片，可见白细胞，偶见红细胞。正常对照标本未观察到碎片。2.3  R值  为去除操作过程中的影响因素及白细胞的影响，准确评估此类重症黄疸肝病患者的红细胞对仪器检测白细胞总数的影响，特设定一个指标R值。原样本的R值=（机测白细胞值-手工检测白细胞值）×103/红细胞总数;而已去除血浆。白细胞及血小板的样本R值=（机测白细胞值-手工空白）×103/红细胞总数。去除血浆、白细胞及血小板的样本仍然出现异常直方图，它的R值（24.89±17.44）与原样本的R值（25.02±17.50）进行配对t检验，差异无显著性。t值为0.381 4，P>0.05，即此类异常直方图的出现主要与红细胞有关。2.4  样本组（异常直方图）与对照组的肝功能生化指标的分析显示  样本组与对照组的总胆红素（TBil）、白蛋白（Alb）、总胆固醇（Chol）、高密度脂蛋白胆固醇（HDLc）结果进行两样本t检验，差异有统计学意义，P<0.001;而他们的丙氨酸氨基转换酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）差异无统计学意义，P>0.5

3  结论本文所探讨的异常白细胞直方图的特征是在35 fl～98 fl范围内的细胞异常增多，其主峰靠近35 fl右侧，呈单边下降。日本Sysmex公司的K-4500血液分析仪的白细胞分析流程是先用溶血素溶解红细胞，然后依据电阻脉冲原理对白细胞计数分类。白细胞的计数取决于计数池中颗粒的多少。正常人红细胞膜表面脂蛋白含量极少，加入溶血素后红细胞很快破坏;而一些有黄疸的肝病患者，红细胞膜表面脂类异常，具有抵抗溶血素的作用，导致红细胞溶血不完全。在本实验中，我们发现红细胞溶血后仍存在部分红细胞和红细胞碎片，这与异常白细胞直方图的特征基本相符。手工检测由于使用显微镜目测，能够排除红细胞及红细胞碎片的影响，此结果与有关研究相符。体外标本去除高胆红素血浆后，不能导致仪器检测白细胞数的改变，此结果与有关研究相符。有研究表示体外去除高胆红素血浆后，白细胞结果有明显改变，还有研究提出此异常白细胞直方图是由于肝病患者血液中大血小板数目异常导致，由于仪器分析原理及试剂的不同，同一份样本也并非所有血液分析仪都出现因为红细胞膜抗溶性增强导致的白细胞计数异常增高。肝病高胆红素病例中，胆红素与自由基形成胆红素自由基，红细胞内的血红蛋白又为损伤性自由基提供了氧化还原催化剂铁，所以红细胞极易受到过氧化损伤。有研究认为胆红素自由基对红细胞的损伤作用主要是降解膜骨架收缩蛋白。黄益民等发现自由基可损伤膜的完整性，不仅造成脂疏水羟链中不饱和键的减少，同时还攻击其亲水头部及界面区而引起膜磷脂（PL）分于极性，构象和有序变化;自由基造成膜蛋白巯基氧化，二硫键和氧化硫基团的形成可直接造成膜蛋白的重构，还引起膜表面蛋白锲状缺损的分子结构变化，从而引起红细胞膜的刚性化，造成红细胞流变性降低，高胆红素病例有红细胞脆性降低。有研究表明慢性肝病红细胞膜的胆固醇（Ch）/PL之比升高，密度增大。K-4500计数白细胞时用于溶解白细胞的是Sulfolyser-季胺盐表面活性剂，溶解这种膜结构发生改变的红细胞时，PL难以与膜分离，红细胞破坏不完全。本研究中，血清Chol、HDLc与对照组相比显著性降低，笔者考虑可能HDLc的下降使Ch停留在红细胞内增多，膜Ch升高。【参考文献】 [1] 从玉隆，王淑娟.今日临床检验学[M].北京：中国科学技术出版社，1997：41.[2] 邝泳云.一种异常白细胞直方图的分析及原因初探[J].上海医学检验杂志，2000，15：15