冬枣青斑病病因初探

李庆军　杨小芹　梁丽霞　王洪涛　刘成连　原永兵

摘要：为了探明冬枣青斑病的发病原因以便有针对性地确定防治方案，笔者在实验室提纯、回接了病斑处微生物，在枣园观察发病情况并进行施肥和喷药防治。结果表明，通过对病斑处进行微生物培养、纯化、回接，发现从病班处分离的链格孢菌回接冬枣上不会主动侵染，刺孔培养后也不会形成青斑。因此，冬枣青斑病不是真菌等微生物直接侵染引起。通过观察病斑在树冠和果实上的位置，发现青斑在树冠内堂发病率最高，为22.23%；青斑主要发生在果实的背阴面，占所采病果的51.73%；主要发生在果实的中部，占所采病果的41.38%，由此可初步断定冬枣青斑病可能是缺钙引起；架设防虫网架并喷杀虫剂后，发病率显著高于对照和其他处理，而杀菌、喷钙后发病率显著降低对照，说明冬枣青斑病也不是昆虫叮咬引起，而是由于冬枣缺钙等微量元素导致冬枣抵御真菌侵染的能力下降，链格孢菌通过机械损伤或昆虫叮咬的伤口侵染所致。

关键词：冬枣；青斑病；病因

中图分类号：S665.1 文献标志码：A 论文编号：2014-0888

引言

冬枣（Zizyphus jujube Mill vc.Dongzao）别名苹果枣、雁来红、冻枣、冰糖枣，是由普通枣变异而来。冬枣含有19种氨基酸，总含量为0.985mg/100g，含蛋白质1.65%，总黄酮0.026%、烟酸0.87mg/100g，含维生素C最为丰富，达350-380mg/100g，是苹果含量的70倍、梨的140倍，是目前最高档的鲜食品种之一。随着人民生活水平的提高，冬枣的营养价值和商品价值逐渐被发掘出来，近几年在环渤海地区发展迅速，目前在山东无棣、沾化，河北黄骅一带种植面积已经超过百万亩，成为当地的农业支柱产业。2008年滨州市部分枣产区发生冬枣青斑病。发病初期，呈圆形或近圆形凹陷淡绿色病斑，后发展呈不规则条形，常并伴有0.5mm左右突起和褐色圆形小病斑。感病后枣果即失去商品价值。2009年，仅无棣县因青斑病造成的直接经济损失就达4.8亿元，严重影响了农民收入，挫伤了枣农的生产积极性，阻碍了冬枣产业的持续健康发展。2010年8月5日在无棣县部分枣园出现病情，比2009年发病早12天，并有发病更早、范围更大、危害更重的趋势。2011年和2012年病情扩展到无棣县和沾化县的大多数冬枣栽培区。因此，确定冬枣青斑病病因进而制定科学的治疗措施己迫在眉睫。

刘国利等通过喷施代森锰锌、黎芦碱等有效控制了冬枣青斑病的发生，但对致病原因未作深入系统研究；吕景海等认为，冬枣青斑病是因缺钙硼、过量使用激素、偏施N肥、虫害危害、环剥过度、土壤缺钾、病原微生物侵染等多种原因所致。但是，未明确哪一种因素是主要原因。因此，本研究从分离回接冬枣青斑病病菌、分析病果分布规律和喷药施肥入手，初步探明了该病发生的根本原因、并发症状和防治措施。

1.材料与方法

1.1试验时间、地点

套袋发病情况调查试验和青斑发生位置、部位田间调查试验于2011年9月18日在无棣县舜园枣业有限公司枣园进行。

喷施农药和叶面肥试验于2012年5月至9月进行，试验园设在海丰办事处冯铺村冬枣示范园（1号园）、棣丰办事处杨白杨冬枣示范园（2号园）和小泊头镇丁王庄示范园（3号园）。

1.2试验材料

试验园所栽品种均为‘鲁北冬枣，树龄15年以上，树势健壮，2009-2011年都有青斑病发生。用于病原培养的枣果和健康果均于2011年8月13日和8月26日2次均采自无棣县水湾镇鞠家村冬枣园，共计67个枣果样品。本园采取常规管理，2009年、2010年青斑病病情严重。

1.3试验方法

1.3.1试验设计分2批共随机摘取67个无机械损伤病果进行病原菌的分离、纯化和回接试验。（1）调查青斑果实在树冠上的分布时，每10株树1组，3个重复，随机取组设计，分别观察枣树内膛、树冠外围的南侧和北侧随机观察20个果实的发病率[10-111。（2）调查青斑在果实上的分布时，每组随机摘取100个病果，共3组，统计病斑部位。防虫、杀菌和喷施钙肥试验设防虫、杀菌杀虫和施钙肥3个处理，以常规管理为对照，每处理10株树，3个重复，随机取组设计。

1.3.2病原培养从发病果实样品中随机取出已发病但表皮未损伤的枣果，取病健交界处切成直径约5mm的小组织块装入培养血内，每果取4块。在超净工作台内先用75%的酒精将组织块进行表面消毒约10s，然后用1%的次氯酸钠浸泡0.5min，最后用无菌水冲洗3次。用在酒精灯上灭过菌的镊子将组织块取出，放在PDA平板上，每皿放4块，置于25℃恒温培养箱中培养，5天后检查记录培养结果。培养物分别以菌1、菌2、菌3……表示。转管保存于4℃冰箱中待用。

1.3.3病原菌的纯化，筛选将单孢分离纯化的菌株，置于PDA培养基上使其产孢，观察菌株培养性状，镜检孢子形态特征、测量孢子大小，初步鉴定到属或种。

1.3.4病原菌致病性测定用70%酒精棉球将枣果表面消毒，打孔器打取直径5mm的病原菌菌片，分别贴于枣果表面，每果接种2个位点，分针尖刺伤和无刺伤2种处理，每处理3个果实，保湿48h，以无菌水作对照。接种后枣果在28℃下保湿培养，5天后统计发病率。

1.3.4防虫、施用钙素和杀虫杀菌试验试验设防虫、杀菌和施钙肥3个处理，以常规管理为对照，每处理10株树，3个重复，随机取组设计。防虫试验于枣树开甲后每10株树罩1个防虫网架，并于2011年4月中旬-9月上旬每15天喷1次30%吡虫啉3000倍；杀菌试验从4月中旬9月上旬每15天喷1次大生M-45加300万单位农用链霉素；施钙肥从4月上句-9月上旬每15天喷1次氨基态页面钙肥。

9月下旬按东西南北中每棵树取样调查100个果，统计计算病果率。

1.3.5统计分析用DPS7.0进行数据分析。

2.结果与分析

2.1病原菌的分离、纯化

经培养，青斑病样品2批67个病果分离获得2种分离物。一种分离物在PDA培养基上呈绒状，灰褐色至黑色。菌丝匍匐于基质表面，分生孢子梗单生或成簇，大多数不分枝，分隔，较短，褐绿色至暗色。分生孢子倒棒形或卵形，单个或成串着生于孢梗的顶端，大小极不规律，褐绿色、褐黑色至暗色。另一种分离物为白色，在培养基上呈绒状，5-7天后颜色逐渐变深变褐。

2.2病原菌回接试验

接种处理，1组为空白对照（滤纸沾无菌水后贴果皮表面）；2组回接白菌，3组、4组回接褐菌，5组为病果对照。

空白对照的刺孔和不刺孔处理中各果均无感病症状；2组回接白菌的刺孔处理三果在刺孔处均有浅褐色病斑，但与自然发病的典型症状相比差异较大。不刺孔三果均无感病症状；3、4组回接褐菌的6个刺孔果在刺孔处有褐色至黑色病斑，与自然发病的青斑上的褐色小斑点症状吻合。取病果进行再分离，镜检证实为接种菌。经显微形态观察，确定引发冬枣青斑处褐色小点的病源为半知菌亚门的链格孢菌（Alternaria）。

各处理均未出现青斑，可见病斑不是真菌引起的。不刺孔各处理均未染菌感病，说明链格孢菌为腐生性真菌，主动侵染性差。

2.3青斑果实在树冠上的分布

青斑果实在树冠上的分布情况如图1所示。主要发生在树冠内堂，发病率为22.23%，而外围仅为2.27%，其中外围南侧发病率1-31%，外围北侧发病率3%。结果表明，树冠内堂发病率明显高于外围，外围北侧又高于外围南侧。这可能与树冠外围，特别是外围南侧通风透光较好，蒸腾拉力强有关。

2.4青斑在果实上的分布

青斑在果实上的分布情况如图2和图3所示。从横向看（见图2），青斑主要发生在果实的背阴面，占所采病果的55%，其次为侧面占31%，阳面最少占14%1从纵向看（见图3），青斑主要发生在果实的中部，占所采病果的45.67%，其次为中上部和中下部，分别占20.67%和21.67%。果实底部发病果占总病果的6.3%。果实顶部无发病现象。结果表明，果实向阳面发病轻，背阴面发病重。可见青斑病与光照、果实表面蒸腾拉力有关。有研究表明，无论在果实生长的哪个时期，果肩处的钙含量最多，果实中部最少。这与枣青斑在果实上的分布情况相一致。此结果表明，低水平的钙含量可能是青斑发生的一个重要因素。

2.5防虫、杀菌和喷施钙肥试验

防虫处理的发病率显著高于对照和其他处理。可见单独防虫不仅不能防治冬枣青斑病，反而使病情更加严重。喷施钙肥和喷杀菌剂都能有效控制发病，说明该病不是昆虫叮咬所致而与缺钙、真菌腐生有关。这和刘国利等的研究结果是一致的。架设防虫网架可使空气湿度增加，果面蒸腾受阻，妨碍了钙等微量元素的运输吸收，为真菌的滋生蔓延创造了适宜的环境条件。

3.讨论

真菌回接试验过程中所分离出的链格孢菌不具有主动侵染性，刺孔侵染后也没有出现青斑，只有褐色圆形病斑㈣。这说明冬枣青斑病不是真菌直接侵染引起。通过防虫、杀菌、喷施钙肥试验，表明冬枣青斑病也不是昆虫叮咬引起的。而是由于冬枣缺钙等微量元素导致冬枣抵御真菌侵染的能力下降，链格孢菌通过机械损伤或昆虫叮咬的伤口侵染所致。

钙是细胞膜的结构物质。钙与磷脂和蛋白质结合影响膜的相变和流动性㈣，并有利于维持膜的稳定性。果实生理失调可能是由于膜功能损伤，引起代谢的分室作用遭到破坏所致㈣。因为：（1）白熟期发病。白熟期就是果实膨大期，这个时候果实生长很快，如果吸收不到足够的微量元素，就容易表现出缺素症。（2）病斑发生在背阴、蒸腾拉力弱的部位。蒸腾拉力越小越不利于微量元素的运输、吸收。（3）叶片越绿的树上发病越明显。这是微量元素在营养生长和生殖生长过程中的分布矛盾问题。叶片越强势，吸收养分的能力就越强，争夺了本该果实吸收的营养，故病情越严重。

要根除青斑病就要从地下到地上，从枣树发芽到结果落叶，进行全方位、全时段防治。（1）补充微量元素，均衡树体营养，增强枣树抗病能力。施基肥时每公顷施45～75kg硝酸钙。在不影响果面光洁度的前提下适当喷施含钙叶面肥；（2）及时杀菌，防止病菌滋生。可选用大生M-45，石硫合剂，农用链霉素等；（3）选择吡虫啉、甲维盐等杀虫剂防治虫害，防止果面机械损伤。

4.结论

虽然喷施杀菌剂能降低冬枣青斑病发病率，但链格孢菌回接时侵染症状与青斑病不同，说明真菌不是致病的根本原因。喷施叶面钙肥可显著降低发病率，因此缺钙可能是冬枣青斑病发生的根本原因。缺钙导致果实抵御病菌侵染的能力下降，加上机械损伤等因素共同导致了青斑病的发生。