P-STAT3和FHIT在卵巢上皮性肿瘤的表达及相关性研究

肖凤春 张春丽 方 蓉 毛玉萍 倪桂宝

P-STAT3和FHIT在卵巢上皮性肿瘤的表达及相关性研究

肖凤春 张春丽 方 蓉 毛玉萍 倪桂宝

卵巢上皮性肿瘤；P-STAT3；FHIT；表达

信号转导和转录激活因子（signal transducer and activator of transcription，STATs）蛋白最早是20世纪90年代初在干扰素诱导的胞内信号传导过程研究中发现，随着研究的不断进展发现STATs在肿瘤发生发展中起着重要的作用。而STAT3是STATs蛋白家族中最重要的成员，实体肿瘤中多表现STAT3的异常活化，p-STAT3是其磷酸活化形式，已有大量实验[1]证实p-STAT3与中枢神经系统疾病、肿瘤、心血管系统等多种疾病的病理生理过程有着密切的关系。脆性组氨酸三联体基因（fragile histidine triad，FHIT）是近年发现的一个抑癌基因，研究[2]显示，FHIT基因能够抑制部分肿瘤细胞的活性。本实验使用免疫组织化学方法检测卵巢上皮性肿瘤组织中p-STAT3和FHIT的表达，分析两种蛋白的表达情况与卵巢上皮肿瘤临床病理参数的关系及两者的相关性，以探讨它们在卵巢上皮性肿瘤发生、发展过程中所起到的作用。

1 材料与方法

1.1 病例和组织标本选取 选取2004年1月—2014年6月初次手术且有完整的临床及病理资料的卵巢上皮性肿瘤患者的存档石蜡块，患者术前均未行化疗、放疗或生物治疗。所有标本均重新切片由病理医生HE染色确诊；卵巢癌组织学分型参照WHO分型标准[3]，确诊为卵巢上皮性肿瘤，其中卵巢癌40例，卵巢交界性肿瘤20例，卵巢良性肿瘤20例。卵巢癌根据组织学分化程度[3]，分为高分化12例和低分化28例；淋巴结转移31例，无淋巴结转移9例。

1.2 免疫组织化学方法检测 p-STAT3和FHIT的表达采用过氧化酶标记的链霉卵白素（S-P）免疫组织化学方法，经脱蜡、水化，抗原修复，滴加过氧化物酶阻断试剂，滴加第一抗体，滴加生物素标记的二抗，DAB显色，苏木精复染，常规脱水、透明、封固等。

1.3 免疫组化染色结果半定量分析[4]染色结果判断p-STAT3定位于恶性肿瘤细胞和部分血管内皮细胞的胞核，FHIT定位于细胞的胞浆。染色强度：无着色是0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。高倍镜下每个视野计数100个细胞的阳性细胞数作为阳性程度的判断标准：10%以下0分，10%～50%为1分，50%～75%为2分，75%以上为3分。综合评定结果为染色强度和染色阳性细胞的乘积，＜3分阴性，≥3分阳性。

1.4 统计学方法 应用SPSS16.0统计软件进行数据分析，计数资料采用χ2检验，采用Spearman等级相关分析p-STAT3和FHIT表达的相关性，P＜0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

p-STAT3在上皮性卵巢癌中的阳性表达率为80%，高于交界性肿瘤的60%及良性肿瘤的10%，差异均有统计学意义（P＜0.05）。FHIT在上皮性卵巢癌中的阳性表达率为32.5%，低于交界性肿瘤的50%及良性肿瘤的75%，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 三组卵巢组织p-STAT3和FHIT表达比较［例（%）］

p-STAT3在低分化卵巢癌患者的阳性表达率为89.3%，高于高分化卵巢癌患者的58.3%，在卵巢癌淋巴结转移患者的阳性表达率为90.3%，高于无淋巴结转移患者的44.4%，差异有统计学意义（P＜0.05）。FHIT在低分化卵巢癌患者阳性表达率为17.9%，低于高分化卵巢癌患者的66.7%，在卵巢癌淋巴结转移患者的阳性表达率为19.4%，低于无淋巴结转移患者的77.8%，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 卵巢癌组织p-STAT3和FHIT阳性表达与临床病理特征的关系［例（%）］

p-STAT3和FHIT蛋白在卵巢癌中的表达存在显著负相关（P＜0.05）。见表3。

表3 卵巢癌组织p-STAT3和FHIT表达的相关性

3 讨论

卵巢癌早期症状无特异性，并且易于转移和广泛播散，是威胁女性生命的常见妇科恶性肿瘤之一，近年来其发病率呈上升趋势。癌症是一种与基因相关的疾病，致癌基因的激活和抑癌基因的失活，可使细胞生长和分化的调节失控，导致细胞基因突变，细胞异常增生而发生癌变[4]。因此，研究上皮性卵巢癌发生的分子机制，对早期诊断卵巢癌及寻找新的有效的治疗靶点有重大的现实意义。

STAT3信号转导通路存在于不同类型的细胞和组织中，参与细胞的生长、凋亡、恶变等过程的调控。激活后的p-STAT3以同源或异源二聚体形式移位到胞浆，在靶基因的启动区与特定的DNA元件结合，发挥其生物学活性[5]。研究[1]表明，细胞内外的刺激均可以激活STAT3，在生理情况下，p-STAT3信号通路的激活是暂时性的，并处于严密调控之中。在各种致瘤信号的刺激下，p-STAT3被持续活化、恒定表达，将来自各种途径的肿瘤性酪氨酸激酶信号进行整合，调控目标靶基因的转录，参与细胞的恶性转化，促进肿瘤的增殖和浸润转移，因此，p-STAT3被认为是一种致癌基因，与肿瘤的发生、发展及预后密切相关。目前已发现多种肿瘤细胞系及人的癌变组织中存在着STAT3的组成性激活，因此通过阻断STAT3信号通路可以抑制肿瘤细胞生长并且诱导肿瘤细胞凋亡，从而为恶性肿瘤的基因治疗提供了一个理想的候选靶目标[6-7]。本研究发现，p-STAT3在卵巢癌表达高达80%，在低分化卵巢癌患者和卵巢癌淋巴结转移的表达率分别为89.3%、90.3%，均明显高于良性肿瘤及交界性肿瘤组的表达，差异有统计学意义（P＜0.05），与文献报道的结果一致。提示p-STAT3在卵巢癌组织中呈高活化，同时p-STAT3的表达与肿瘤分化程度及淋巴结转移有相关性。

抑癌基因的失活也与卵巢癌的发生、发展及预后密切有关，FHIT是近年来分离出的一种重要的脆性位点抑癌基因，在正常上皮细胞如卵巢、肺等中可检测到高水平的FHIT mRNA及FHIT蛋白的表达，FHIT基因敲除小鼠的淋巴组织、肝脏、睾丸、胃及小肠均出现了肿瘤，证实了该基因具有抑制多个系统肿瘤形成的功能[8]。综合目前的研究，FHIT基因在人类大部分的上皮性肿瘤组织中（如肺癌、宫颈癌、乳腺癌等）表达降低或缺失，且与多种肿瘤预后、复发相关，希望为卵巢癌的发病机理研究、预后判断提供新的指标[4，9-10]。Ozaki等[11]分析44例卵巢癌、19例卵巢交界性肿瘤和16例良性腺瘤的FHIT蛋白的表达，发现14%的卵巢癌有FHIT蛋白表达缺失或显著减少，而在卵巢交界性癌和良性腺瘤中未发现减少，并且FHIT蛋白表达异常大多在低分化的卵巢癌中。本研究显示FHIT在卵巢癌组患者表达仅32.5%，且在低分化卵巢癌患者（17.9%）和卵巢癌淋巴结转移患者（19.4%）的表达率降低，均明显低于良性患者及交界性肿瘤患者的表达，差异有统计学意义（P＜0.05），提示FHIT在卵巢癌组织中呈低表达，同时随着卵巢癌分化程度的降低或出现淋巴结转移时，FHIT表达呈显著下降趋势。

STAT3和FHIT均参与了卵巢癌细胞周期调控和细胞凋亡，而两者生物学效应相反，本研究中发现，p-STAT3和FHIT在肿瘤中的表达存在显著负相关（P＜0.05），推测两者可能在作用机制上存在某种联系，并且随着肿瘤恶性程度的增加，p-STAT3表达增高，而FHIT表达减低。综上可见p-STAT3和FHIT在卵巢肿瘤的发生、发展中起着重要作用，运用免疫组化法联合检测p-STAT3和FHIT蛋白的表达简单易行，有助于提高上皮性卵巢癌早期诊断的准确性和客观性，对上皮性卵巢癌的淋巴结转移及早期预后评估有一定指导意义。

［1］Avalle L，Pensa S，Regis G，et al.STAT1 and STAT3 in tumorigenesis：A matter of balance［J］.Jakstat，2012，1（2）：65-72.

［2］Miyawaki Y，Kawachi H，Ooi A，et al.Genomic copy-num ber alterations of MYC and FHIT genes are associated with survival in esophageal squamous-cell carcinoma［J］.Cancer Sci，2012，103（8）：1558-1566.

［3］Kurman RJ，Carcangiu ML，Herrington CS，et al.WHO classification of tumours of female reproductive organs［M］.4th Edition，Lyon：IARC，2014：12-40.

［4］吴春，郭庆，刘琦，等.卵巢浆液性腺癌中FHIT的表达及意义［J］.临床与实验病理学杂志，2013，29（3）：261-264.

［5］Cai L，Zhang G，Tong X，etal.Growth inhibition of human ovarian cancer cells by blocking STAT3 activation with small interfering RNA［J］.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2010，148（1）：73-80.

［6］Min H，Wei-hong Z.Constitutive activation of signal transducer and activator of transcription 3 in epithelial ovarian carcinoma［J］.J Obstet Gynaecol Res，2009，35（5）：918-925.

［7］Ji T，Gong D，Han Z，et al.Abrogation of constitutive Stat3 activity circumvents cisplatin resistant ovarian cancer［J］. Cancer Lett，2013，341（2）：231-239.

［8］Fujishita T，Doi Y，Sonoshita M，etal.Developmentof spontaneous tumours and intestinal lesions in Fhit gene knockout mice［J］.Br JCancer，2004，91（8）：1571-1574.

［9］Kujan O，Tarakji B，Thakker N，etal.The expression of FHIT in salivary carcinoma ex pleomorphic adenoma［J］.Anticancer Res，2012，32（8）：3147-3152.

［10］张爽，王艳，刘静蕾，等.FHIT和Livin在非小细胞肺癌中的表达及临床意义［J］.实用肿瘤学杂志，2011，25（2）：136-140.

［11］Ozaki K，Enomoto T，Yoshino K，et al.Impaired FHIT expression characterizes serous ovarian carcinoma［J］.Br J Cancer，2001，85（2）：247-254.

（收稿：2015-03-31 修回：2015-05-11）

浙江省中医药大学校级课题项目（No.201111）

浙江省中医院病理科（杭州 310006）

肖凤春，E-mail：longrch@163.com