5种不同种植密度蕲艾中桉油精的含量比较

朱祥松，王伟华（1.鄂州市食品药品监督检验所，湖北 鄂州 436000；.湖北李时珍医药集团有限公司，湖北 蕲春 435300）

艾叶为菊科植物艾Artemisia argyi Levl.et Vant.的干燥叶，具有温经止血、散寒止痛、外用祛湿止痒的功能[1]。艾在我国各地均有分布。《本草纲目》中记载，艾叶本草“自成化以来则以蕲州者为胜，用充方物，天下重之，谓之蕲艾。”现代研究证明，蕲艾与普通艾叶相比，在挥发油、鞣酸、燃烧热值与醇溶性浸出物、微量元素含量方面均有明显优势[2]，彰显了蕲艾药材的道地性。挥发油为艾叶的重要化学成分，具有止咳、平喘、祛痰、消炎作用[3]。桉油精是蕲艾挥发油中含量较高的成分。因此，笔者以桉油精含量为指标，利用气相色谱（GC）法考察了蕲春县拟建蕲艾良好农业规范（Good Agricultural Practice，简称GAP）基地中不同种植密度对蕲艾桉油精含量的影响，以为规范蕲艾种植，保证蕲艾药材质量的稳定、可控提供参考。

1 材料

6890N型GC仪，包括氢火焰离子化检测器（美国Agilent公司）；SGD-300型氮氢空发生器（北京东方精华苑科技有限公司）；BS210S型电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）。

桉油精对照品（中国食品药品检定研究院，批号:110788-201004）；5种不同种植密度的蕲艾15批（在同一GAP试验基地，以分株繁殖方式分别按行距10 cm×20 cm、20 cm×30 cm、30 cm×40 cm、40 cm×50 cm、50 cm×60 cm种植五块试验区，进行相同的栽培管理，于2013年6月12日端午节中午，每一块试验区均匀采样，阴干密封保存），经鄂州市食品药品监督检验所肖文芳主任中药师鉴定为菊科植物艾A.argyi Levl.et Vant.的干燥叶；正己烷为色谱纯，环己酮为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:HP-5毛细管柱（30 m×0.32mm，0.25 μm）；起始温度:50℃，以4℃/min升至75℃，保持15min，以10℃/min升至220℃，保持3min；进样口温度:240℃；检测器温度:250℃；载气:氮气；流速:0.6ml/min；分流比:10∶1；进样量:1μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 内标溶液 称取环己酮适量，加正己烷制成每1ml含2.84mg的溶液，作为内标溶液。

2.2.2 对照品溶液 称取桉油精对照品适量，加正己烷溶解制成质量浓度为2.102mg/ml的对照品贮备液；精密量取对照品贮备液2ml及内标溶液1ml，置于5ml量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液 将艾叶剪碎，精密称取5 g，按2010年版《中国药典》（一部）附录ⅩD挥发油测定法连接装置，精密吸取正己烷2ml，置于挥发油提取管中，加热回流4 h，放冷，分取正己烷提取液置10ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 阴性样品溶液 精密量取内标溶液1ml，置于5ml量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 系统适应性试验

精密吸取“2.2”项下对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各1μl，注入GC仪中，按“2.1”项下色谱条件测定。结果，供试品溶液在与对照品溶液相同保留时间处有相应吸收峰，桉油精及内标物峰分离度＞1.5，阴性样品无干扰；理论板数按桉油精峰计＞3000。色谱见图1。

图1 气相色谱图A.对照品；B.供试品；C.阴性样品；1.桉油精；2.环己酮Fig 1 GC chromatogramsA.reference substance；B.test sample；C.negative sample；1.eucalyptol；2.cyclohexanone

2.4 线性关系考察

分别量取对照品贮备液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，置于5ml量瓶中，分别精密加入内标溶液1.0ml，加正己烷稀释至刻度，摇匀，制成不同浓度的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样1μl，记录峰面积。以对照品质量浓度（x，mg/ml）为横坐标、对照品与内标物的峰面积比值（y）为纵坐标进行回归分析，得回归方程为y＝3.9725x+0.0121（r＝0.9999）。结果表明，桉油精质量浓度在0.4204～1.2612mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取对照品溶液适量，连续重复进样6次，每次1μl，计算对照品与内标物的峰面积比值。结果，RSD为0.07%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品（种植密度为30 cm×40 cm）溶液适量，室温放置，分别于放置0、2、4、6、8、12、24h时进样1μl，依“2.1”项下方法测定，计算桉油精与内标物的峰面积比值。结果，RSD为0.55%（n＝7），表明供试品溶液在室温下24h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取种植密度为30 cm×40 cm的蕲艾样品6份，按“2.2.3”项下方法制备成供试品溶液，依“2.1”项下方法测定，计算桉油精与内标物的峰面积比值。结果，RSD为0.92%（n＝6），表明该方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取种植密度为30 cm×40 cm的蕲艾样品6份，每份约2.5 g，分别精密加入“2.2.2”项下对照品贮备液2ml，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，分别吸取供试品溶液和对照品溶液1μl，依“2.1”项下方法测定桉油精含量，计算加样回收率，结果详见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Result of recovery tests（n＝6）

2.9 样品含量测定

取不同种植密度的蕲艾样品各适量，平行3份，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，依“2.1”项下方法测定，计算每种种植密度蕲艾的桉油精平均含量，结果详见表2。

表2 不同种植密度蕲艾中桉油精含量的测定结果Tab 2 Result of content determination of eucalyptol in A.argyi of different planting densities

3 讨论

艾叶药理作用及应用较广泛[4-5]，而艾蒿的近缘种较多，药材来源复杂，被作为艾叶使用的混伪品较多[6]。蕲艾为艾叶的优质道地药材，其整体质量稳定[7]。目前，关于不同产地、不同采集期、不同年份等影响因素下艾叶化学成分的比较分析有文献报道[8-9]，而尚未见对于蕲艾GAP基地中种植密度对蕲艾桉油精含量影响的报道。故本文通过考查不同种植密度下蕲艾中桉油精的含量变化，旨在为规范种植优质蕲艾药材提供参考。

3.1 样品制备方法的选择

蕲艾中挥发油含量在端午节前后若干天达到最高峰[11]，因此该试验选择采样时间为端午节。本研究采用2010年版《中国药典》（一部）附录[1]中挥发油测定法中装置提取蕲艾挥发油，比较了1、2、3、4、5、6h的提取效果，结果4 h即可提取完全，故选择提取时间为4 h。蕲艾挥发油中成分复杂，色谱峰多不易分离，本文采用了程序升温的方法，在此色谱条件下分离效果可满足系统适用性要求。

3.2 最佳种植密度的选择

本文的试验结果表明，在蕲春拟建蕲艾GAP基地中，相同的栽培管理措施下，蕲艾种植密度在行距30 cm×40 cm以上时，桉油精的含量最高；分析其原因，可能与行距过小影响植株光合作用及生长环境的养分吸收有关[10]。考虑到种植基地单位面积蕲艾产量的因素，笔者建议蕲艾最佳种植密度为行距30 cm×40 cm。

综上所述，本方法操作简便、快速，结果准确、可靠，重复性良好，可用于蕲艾中桉油精含量的测定。通过考查不同种植密度下蕲艾中桉油精的含量变化，可为规范种植优质蕲艾药材提供参考。

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