大荨麻根的质量标准研究及不同采收期的考察

邱洪，代兵，潘永雪（.解放军第44医院药剂科，贵阳 550009；.解放军第73医院药械科，新疆 库尔勒 84000）

大荨麻根为荨麻科植物大蝎子草Girardinia suborbiculata C.J.Chen sub sp.triloba.的新鲜或干燥根。目前对大蝎子草的研究主要集中于其植物生态学[1]、药效学及临床等方面[2-7]，对其质量的研究内容较少。大蝎子草含有总黄酮、东莨菪内酯、芹菜素等[8-9]。陶玲等对大蝎子草进行了全草的研究，在草根中分离鉴定出32个成分；草茎中分离鉴定出31个成分；草叶中分离鉴定出32个成分[10-13]。为了提高大荨麻根质量的可控性，笔者用薄层色谱（TLC）和浸出物的检测方法对不同时期采收的大荨麻根进行了相关对比研究。

1 材料

1.1 仪器

QY-20型三用紫外分析仪（上海澳瑞德精密仪器有限公司）；AUW-220D型电子天平（日本岛津公司）；CH-250型超声波清洗器（北京创新德超声电子研究所）；HH-4型数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）；101A-1型电热恒温干燥箱（上海浦鸿仪器厂）；TU-1901型双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。

1.2 试剂

东莨菪内酯对照品（中国食品药品检定研究院，批号:110768-200504）；石油醚、甲酸、甲醇、磷酸、二氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷和环己烷均为分析纯，水为娃哈哈纯化水。

1.3 药材

大荨麻根采集于贵阳药用植物园、贵州省龙里县龙山镇贵州同济堂中药材种植公司基地、贵阳乌当区，经贵阳中医学院何顺志教授鉴定为荨麻科蝎子草属植物大蝎子草Girardinia suborbiculata C.J.Chen sub sp.triloba.的根。

2 方法与结果

2.1 大荨麻根中东莨菪内酯的TLC鉴别试验

分别取3批样品粉末约4 g，置于索氏提取器中，加二氯甲烷加热回流提取3 h，提取液蒸干，残渣加无水乙醇1ml溶解，作为供试品溶液。取东莨菪内酯对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。按TLC法[14]试验，吸取上述4种溶液各5～10µl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶10∶7∶1.2，V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，详见图1。经3批样品验证结果表明，此方法专属性强、重现性好，故将此TLC鉴别方法收入质量标准草案正文。

2.2 浸出物测定

2.2.1 水溶性浸出物测定 测定用的供试品需粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀。（1）冷浸法。取供试品约4 g，精密称定，置于250ml锥形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸，前6h内时时振摇，再静置18h，用干燥滤器迅速滤过；精密量取续滤液20ml，置于干燥至恒质量的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定质量。以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量，结果详见表1。（2）热浸法。取供试品约2 g，精密称定，置于100ml锥形瓶中，精密加水50ml，塞紧，称定质量，静置1 h后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1 h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定质量，用水补足减失的质量，摇匀，用干燥滤器滤过；精密量取滤液25ml，置于干燥至恒质量的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定质量，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量，结果详见表1。

2.2.2 醇溶性浸出物测定 按水溶性浸出物测定法测定，以乙醇作溶剂，结果详见表2。（1）冷浸法。取供试品约4 g，精密称定，置于250ml锥形瓶中，精密加乙醇100ml，密塞，按“2.2.1”项下冷浸法试验，结果详见表2。（2）热浸法。取供试品约2 g，精密称定，置于100ml锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，塞紧，按“2.2.1”项下热浸法试验，结果详见表2。

图1 3批大荨麻根中东莨菪内酯薄层色谱图1、2.贵阳药用植物园大荨麻根；3、4.贵州省龙里县龙山镇贵州同济堂中药材种植公司基地大荨麻根；5、6.贵阳乌当区大荨麻根；7～9.东莨菪内酯对照品Fig 1 TLC diagrams of scopoletin in 3 batches of the root of U.dioica1，2.the root of U.dioica in Guiyang medicinal botanical garden；3，4.the root of U.dioica in Guizhou Tongjitang of Chinese herbal medicines planting base of Longshan Town，Longli County，Guizhou Province；5，6.the root of U.dioica in Wudang District，Guiyang City；7-9，reference substance of scopoletin

表1 3批大荨麻根的水溶性浸出物含量（%）Tab 1 Contents of water-soluble extracts in 3 batches of theroot of U.dioica（%）

表2 3批大荨麻根的醇溶性浸出物含量（%）Tab 2 Contents of alcohol-soluble extracts in 3 batches of the root of U.dioica（%）

比较表1、表2的测定结果，大荨麻根药材水溶性浸出物比醇溶性浸出物含量高，但参照相关文献资料，大荨麻根药材中主要含有黄酮类、香豆素类等脂溶性成分，多数类似成分的水溶性差，易溶于甲醇或乙醇，所以选择用醇溶性浸出物测定大荨麻根药材比较合理；而醇溶性浸出物中热浸法测定结果比冷浸法含量高。因此，浸出物选择用醇溶性热浸法。

2.3 大荨麻根采收期的考察

2.3.1 不同季节药材的TLC鉴别对比试验 采收初春、夏季、初秋、立冬四个季节的样品各一批进行验证。分别取药材粉末约4 g，按“2.1”项下方法试验。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，详见图2。经4批样品验证结果表明，初春和秋末采收的大荨麻根含的东莨菪内酯高，夏季和初秋采收的大荨麻根含东莨菪内酯较低，故将秋末至初春采挖作为大荨麻根采收的最佳时节。

图2 不同季节药材TLC图1.初春；2.夏季；3.东莨菪内酯对照品；4.初秋；5.立冬Fig 2 TLC identifications of samples in different seasons1.early spring；2.summer；3.reference substance of scopoletin；4.early autumn；5.beginning of winter

2.3.2 不同季节药材的浸出物对比试验 采收初春、夏季、初秋、立冬四个季节的样品（采自贵阳药用植物园）各一批，按浸出物测定法[14]项下方法测定。分别取供试品约2 g，精密称定，置于100ml锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，塞紧，按“2.2.2”项下热浸法试验，结果详见表3。

表3 4批药材醇溶性浸出物含量（%）Tab 3 Contents of 4 batches of alcohol soluble extracts（%）

表3结果表明，初春和立冬采收的大荨麻根浸出物含量高，夏季和初秋采收的大荨麻根浸出物含量较低，故将秋末至初春采挖作为大荨麻根采收的最佳时节，即头年11月至翌年3月间为适宜采挖期。结合实际情况，拟定本品的采收季节为秋末至初春。

3 讨论

3.1 展开剂的选择

笔者曾采用环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶10∶7∶1.2，V/V/V/V）、甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇（5∶1∶1∶0.3，V/V/V/V）、三氯甲烷-甲醇-水（40∶10∶1，V/V/V）、石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（7∶3，V/V）、环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶10∶7∶1.2，V/V/V/V）为展开剂，结果只有环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶10∶7∶1.2，V/V/V/V）展开的荧光斑点明显，干扰小，其他方法分离效果均不理想。

3.2 供试品溶液制备方法的选择

提取溶剂分别采用70%乙醇、30%乙醇、三氯甲烷、二氯甲烷、甲醇等溶剂对样品进行加热回流提取。结果，二氯甲烷荧光斑点比较明显，专属性强，重现性好，干扰小。

3.3 提取时间的选择

取样品4份，分别加入二氯甲烷回流提取1、2、3、4 h。结果，提取3 h的样品与提取4 h的含量相近，故选用提取3 h为提取时间。

3.4 含量测定方法的选择

曾采用高效液相色谱法测定大荨麻根中的东莨菪内酯、芹菜素、齐墩果酸和熊果酸等，但含量太低，以此作为指标成分意义不大。

综上所述，本试验所建立的用TLC定性鉴别东莨菪内酯的方法，专属性强，重现性好，干扰小。用浸出物方法测定含量较为理想。不同采收期的考察有利于有效地控制大荨麻根药材的质量。

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