EB病毒LMP1基因XhoⅠ位点缺失与高发区鼻咽癌相关性的Meta分析

王宏，刘芡芡，李斐斐，杨垚，谭沁，王云

(1 青岛大学医学院微生物学教研室，山东 青岛 266021； 2 济南军区青岛第一疗养院检验科；3 青岛大学医学院公共卫生系； 4 青岛大学医学院口腔学院)



EB病毒LMP1基因XhoⅠ位点缺失与高发区鼻咽癌相关性的Meta分析

王宏1，2，刘芡芡1，李斐斐1，杨垚3，谭沁4，王云1

(1 青岛大学医学院微生物学教研室，山东 青岛 266021； 2 济南军区青岛第一疗养院检验科；3 青岛大学医学院公共卫生系； 4 青岛大学医学院口腔学院)

目的 探讨EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP1)基因XhoⅠ位点缺失突变与高发区鼻咽癌(NPC)发生的关系。方法 检索PubMed、中国生物医学文献数据库、万方、维普、中国知网等数据库，收集发表于1990年1月1日—2014年12月31日的与LMP1基因XhoⅠ位点缺失突变相关的文献，根据纳入与排除标准纳入文献并提取相关数据。采用Stata 12.0软件进行Meta分析，以比值比(OR)和95%可信区间(95%CI)为效应值，采用随机效应模型进行分析，并进行发表文献偏倚评估。结果 纳入文献共8篇，病例349例，对照150例，入选文献无发表偏倚，各研究之间无异质性，各项研究的合并OR值为26.82(95%CI=8.42～85.40)。结论 EBV LMP1基因XhoⅠ位点缺失突变与高发区NPC可能存在相关性。

鼻咽肿瘤；疱疹病毒4型,人；膜蛋白质类；突变；Meta分析

EB病毒(EBV)与鼻咽癌(NPC)发生密切相关，由于EBV感染广泛存在，而NPC发病存在明显的地域性，在我国华南地区与东南亚地区高发，因此是否存在NPC相关的EBV变异毒株一直备受关注。EBV潜伏期基因表达产物在EBV致癌过程中可能发挥重要作用，其中潜伏膜蛋白1(LMP1)是公认的EBV转化基因和致癌基因，可以转化B细胞、成纤维细胞和上皮细胞，抑制人上皮细胞的分化和凋亡，促进肿瘤的转移，而且在NPC和鼻腔NK/T细胞淋巴瘤等多种肿瘤组织中表达。LMP1可调节多种细胞通路，在NPC的发生发展中发挥着重要作用[1-2]。不同来源的EBV毒株LMP1基因存在多处序列差异，最初发现N端第一外显子丢失XhoⅠ酶切位点导致的XhoⅠ缺失突变和C端第3外显子30 bp缺失导致的del-LMP1变异[3-4]；后续有研究根据LMP1基因特征性的氨基酸改变，将LMP1分为7个亚型：B95-8、China 1、China 2、China 3、Med、NC和Alaskan[5]。目前关于XhoⅠ缺失突变和(或)del-LMP1变异与NPC特别是高发区NPC发生的关系已有多项研究，但是结果不完全一致。本研究应用Meta分析方法探讨XhoⅠ缺失突变与高发区NPC发生的关系。

1 材料与方法

1.1 文献检索

检索数据库包括PubMed、维普中文科技期刊数据库、万方数据库、中国生物医学文献数据库(CBM)、中国知网全文数据库(CNKI)，并辅以追溯法以及手工检索等方法进行文献检索，使资料尽可能翔尽，语种为英文和中文。其中英文检索词为：nasopharyngeal carcinoma OR NPC、Epstein-Barr virus OR EBV、latent membrane protein l OR LMP1 OR XhoⅠ。中文检索词为：鼻咽癌、EB病毒、潜伏膜蛋白1。检索范围为1990年1月1日—2014年12月31日。

1.2 文献纳入及排除标准

1.2.1 纳入标准 ①研究以NPC病人为病例组，病人均来源于NPC高发区，标本为肿瘤组织、咽漱液或外周血；对照人群来源于同一地区，包括健康人群、慢性炎症和传染性单核细胞增多症病人，标本为组织、咽漱液或外周血；②各文献报告数据完整，有病例组和对照组的观察人数及各组XhoⅠ缺失及非缺失频数，可以计算比值比(OR)与95%可信区间(95%CI)；③同一研究机构和同一作者的重复研究文献，选择病例数大或最近发表的1篇。

1.2.2 排除标准 ①非论著类的文献；②数据不完整、无法提取相关数据以及引用他人数据的文献；③数据无法计算效应值OR与95%CI的文献。

1.3 数据提取

由2名研究者采用统一的数据提取表，独立提取数据；如意见不一致，通过讨论或由第3名研究者协助解决，最后所有项目都达成一致。提取的数据包括第一作者、地区、发表时间及标本类型等。

1.4 统计学处理

采用Stata 12.0软件进行数据分析。对纳入的研究进行异质性检验，并采用随机效应模型分析。对各研究的原始数据进行整理，计算各研究中分组数据及合并数据的OR值及其95%CI，绘制森林图，进行Meta分析。以Egger’s法绘制漏斗图，评估发表偏倚。

2 结 果

2.1 纳入文献的基本情况

在PubMed、维普中文科技期刊数据库、万方数据库、CBM、CNKI分别检索到文献442、141、167、176、182篇，排除重复文献432篇，经阅读题目和文献摘要排除仅提供LMP1功能或机制研究而未涉及LMP1基因多态性的文献595篇，通过阅读全文获得涉及NPC与XhoⅠ位点缺失文献24篇。24篇文献中排除非病例对照研究10篇，NPC低发区文献4篇，同一研究机构重复文献1篇，获得高发区NPC与XhoⅠ位点缺失的文献共计9篇，在统计学计算时有1篇文献病例组与对照组样本均为XhoⅠ位点缺失型，无法计算效应值OR与95%CI，故排除[6]。最终纳入分析的文献共8篇[3,7-13]。入选文献涵盖了我国广东、香港、台湾等地区以及马来西亚等NPC的高发区，累计样本共499例，其中病例组349例，对照组150例，具体数据见表1。

2.2 发表偏倚分析

Egger’s检验，P=0.978，文献在漏斗图上的分布基本对称，表明纳入的文献无发表偏倚(图1)。

2.3 Meta分析

异质性分析显示各研究之间无异质性(I2=22.8%)。随机效应模型分析结果显示，LMP1基因XhoⅠ缺失与高发区NPC发生相关(合并OR值为26.82，95%CI=8.42～85.40)。见图2。

表1 纳入文献的基本资料(例)

3 讨 论

自1992年CHEN等[3]首次发现台湾NPC中LMP1基因XhoⅠ位点缺失的检出率(100%，50/50)高于正常人群(30%，6/20)，陆续有研究对来自我国NPC高发区即广东、香港和台湾等地区的NPC和非NPC人群中XhoⅠ位点缺失突变进行了检测，所用方法均为PCR结合酶切。在包含对照人群的研究中，有研究表明，NPC中XhoⅠ位点缺失突变的检出率高于对照人群，从而认为XhoⅠ位点缺失突变与NPC的发生有关[3,7-10]；但同时有研究表明，NPC中XhoⅠ位点缺失突变的检出率与同一地区健康人群和其他EBV相关肿瘤如淋巴瘤中的检出率类似，认为XhoⅠ位点缺失突变与NPC发生无关[11-13]。本研究纳入的8篇文献中，5篇报告有关联性，3篇报告无关联性。对这8篇文献研究的异质性评估显示不存在异质性，可以采用固定效应模型进行计算，但为了使结果更具说服力，本研究采用随机效应模型计算，Meta分析显示LMP1基因XhoⅠ位点缺失突变与高发区NPC的发生相关，合并OR值为26.82(95%CI=8.42～85.40)。发表偏倚检验未见明显不对称漏斗图，表明Meta分析结果可信度高。在NPC非高发区亦有研究对NPC及非NPC人群中XhoⅠ位点缺失突变进行了检测，但检测样本数少，且病例对照研究较少，因此本Meta分析没有纳入NPC低发区的文献。

图1 发表偏倚检测的Egger’s漏斗图

图2 EBV LMP1基因XhoⅠ位点缺失突变与高发区NPC关系Meta分析的森林图

本研究Meta分析所涉及的人群均来源于亚洲NPC高发区，排除了人群的遗传异质性和种族差异。由于LMP1、EBV核抗原等多种EBV编码基因在不同地域或人种来源的EBV毒株呈现不同的变异类型，EBV变异与地域有关，查阅NPC非高发区XhoⅠ位点缺失突变的文献可见，亚洲地区也以XhoⅠ位点缺失突变为主，而美洲、欧洲和非洲则以非缺失突变为主，因此在进行Meta分析时，排除地域或人种差异或依据地域分层分析是必要的。故基于高发区病例对照研究的Meta分析能对数据进行更客观系统地评价和总结，提高统计检验的效能，有助于揭示EBV基因变异与EBV相关肿瘤的关系。但是，本研究能够纳入的文献偏少，而且本研究对照组中，纳入人群涉及健康人群、传染性单核细胞增多症和慢性炎症病人，标本包括组织、咽漱液和血液，而病例组除个别咽漱液和血液标本以外，均为NPC组织标本。以往有研究表明，同一个体不同部位(如组织、血液)标本检测到的EBV亚型相同[14-15]，或者不同[16-17]。因此，尽管Meta分析结果显示LMP1基因XhoⅠ位点缺失突变可能与高发区NPC相关，但研究病例偏少和标本的不一致提示需客观地评估结论的可靠性。

EBV是NPC发生的重要因素之一，造成NPC地域性分布的原因，除环境和遗传因素外，是否存在高致癌性EBV变异毒株一直是研究的热点问题之一。不同来源EBV存在多种变异，但对多数基因如LMP1、EBV核抗原和BZLF1基因的流行病学研究均未获得一致的结论[18]。造成研究结果差异的原因包括病例数少、对照人群设置不统一及标本来源不一致等，因此，今后应进行大样本、多地区的病例对照研究，而且应合理设置病例组和对照组，病例组和对照组尽量采用相同的标本(可以采用多部位取材来解决该问题)，以进一步提高研究的一致性和说服力。

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(本文编辑 马伟平)

CORRELATION BETWEEN XHOⅠ LOSS IN LATENT MEMBRANE 1 GENE OF EPSTEIN-BARR VIRUS AND ENDEMIC NASOPHARYNGEAL CARCINOMA: A META ANALYSIS

WANGHong,LIUQianqian,LIFeifei,YANGYao,TANQin,WANGYun

(Department of Microbiology, Qingdao University Medical College, Qingdao 266021, China)

ObjectiveTo investigate the relationship between XhoⅠ loss in latent membrane 1 (LMP1) gene of Epstein-Barr virus and endemic nasopharyngeal carcinoma (NPC).MethodsThe databases of PubMed, CBM, Wanfang, Weipu and CNKI were searched for the literature regarding XhoⅠ loss in LMP1 gene published from January l, 1990 to December 31, 2014, and the related data were collected according to inclusion-and-exclusion criteria. Odds radio (OR) and 95% confidence interval (95%CI) were used to analyze the correlation between XhoⅠ loss and NPC in random effect pooled measure. Egger’s test was used to assess the publication bias.ResultsEight studies including 349 NPC cases and 150 control cases were pooled in this Meta-analysis and no publication bias was found. The pooledORvalue (95%CI) was 26.82 (8.42-85.40).ConclusionThe Meta-analysis suggests the XhoⅠ loss in LMP1 gene of EBV is probably associated with endemic nasopharyngeal carcinoma.

nasopharyngeal neoplasms; herpesvirus 4, human; membrane proteins; mutation; Meta-analysis

2015-03-16;

2015-06-10

国家自然科学基金资助项目(81171571)和青岛市科技局资助项目(13-1-3-50-nsh)

王宏(1984-)，女，硕士研究生。

王云(1970-)，女，博士，教授，硕士生导师。

R739.6

A

1008-0341(2015)04-0398-04