桃红四物汤促进早期闭合性骨折大鼠愈合作用研究

李秀秀，李墨华，张 舸，金福厚

(黑龙江省齐齐哈尔市中医医院，黑龙江 齐齐哈尔 161000)

桃红四物汤促进早期闭合性骨折大鼠愈合作用研究

李秀秀，李墨华，张 舸，金福厚△

(黑龙江省齐齐哈尔市中医医院，黑龙江 齐齐哈尔 161000)

目的 探讨桃红四物汤对早期闭合性骨折大鼠愈合的促进作用。方法 60只大鼠随机分为正常组，骨折对照组和桃红四物汤骨折治疗组。取后2组制成早期闭合性骨折大鼠模型。骨折后第10天对血液流动性和VEGF浓度进行检测，并作统计学分析。结果 与正常组比较，骨折对照组全血黏度、血浆黏度均明显增高(P<0.05)；与骨折对照组比较，桃红四物汤骨折治疗组的全血粘度、血浆黏度均明显减少(P<0.01)。骨折对照组与正常组比较，VEGF浓度在统计学上无显著性差异(P>0.05)；与骨折对照组和正常组比较，桃红四物汤骨折治疗组VEGF浓度显著增高(P<0.01)。结论 桃红四物汤促进大鼠骨折早期愈合的作用途径与改善早期骨折血液流动性和调节骨折早期VEGF浓度相关。

桃红四物汤；骨折愈合；实验研究

桃红四物汤首见于《医宗金鉴》，是活血化瘀作用的经典方剂之一，具有补血活血，止痛消肿，化瘀生新之功效，广泛应用于骨折的治疗。临床研究证实，桃红四物汤可以通过调节骨折早期炎性指标IL-1、IL-6和TNF-水平[1]，和改善骨折早期血液流动性[2]等，对骨折愈合起到良好的促进作用。本文采用实验性大鼠早期闭合性骨折模型，探讨桃红四物汤促进骨折愈合的作用机制。

1 材料

1.1 动物 60只SD大鼠，体重260 g～300 g，雌雄各半，由黑龙江中医药大学动物实验中心提供。

1.2 药物及试剂桃红四物汤煎剂(药物由齐齐哈尔中医院制剂室提供) 其组成为熟地黄12 g，白芍9 g，红花6 g，桃仁9 g，川芎6 g，当归9 g。以上药物经加水侵泡、常规煎煮、过滤以及蒸发，浓缩配置成生药含量1.0 gmL-1的水煎液备用。大鼠血管内皮生长因子(VEGF)ELISA试剂盒(上海凯博生化试剂有限公司批号：20130510)。生理盐水(四川科伦大药厂有限公司，批号：E030520)。

1.3 仪器 LBY-N7500A 全自动血液流变仪(北京普利生仪器有限公司)、RAC-120全自动血凝仪(上海天成科技有限公司)、荧光分光光度计(北京联合科仪科技有限公司)。

2 方法

2.1 实验动物模型制作 动物实验前均在实验室正常饲养7天。用张连方等的造模方法[3]，使用浓度为3.5%的水合氯醛，按体重10 Lg-1进行麻醉，利用三点受力原理，采用骨折器造成胫骨闭合性骨折。拍X射线片检验造模是否成功，术后3d肌肉注射青霉素40万单位预防感染，每天1次。

2.2 分组与给药 将大鼠随机分成3组：正常组，骨折对照组和桃红四物汤骨折治疗组。每组20只。桃红四物汤组灌胃量：6mlkg-1，正常组和骨折对照组均灌以等容量生理盐水。每天给药和生理盐水均为1次，连续给药10天。

2.3 指标检测

2.3.1 对骨折大鼠血液流动性的影响 最后1次给药1 h后，按前述用法用量，使用水合氯醛腹腔注射麻醉。在腹主动脉取血6 mL，放入肝素抗凝管中，做大鼠全血粘度和血浆粘度检测。并计算全血黏度/低切(10 s-1)、高切(120 s-1)和血浆粘度含量。

2.3.2 对骨折大鼠血管内皮细胞的生长因子(VEGF)的影响 最后一次给药1 h后，按前述用法用量，使用水合氯醛腹腔注射麻醉。在腹主动脉取血3 mL，放入一次性试管中，血液离心(3500转/分)15 min，取上清液存放于冰箱(-20℃)中。严格按照大鼠血管内皮生长因子(VEGF)ELISA试剂盒说明书进行操作，检测各组大鼠血清VEGF浓度。

3 结果

3.1 对骨折大鼠血液流动性的影响与正常组比较，骨折对照组全血黏度、血浆黏度均明显增高(P<0.05)；与骨折对照组比较，桃红四物汤骨折治疗组的全血粘度、血浆黏度均明显减少(P<0.01)。结果表明，桃红四物汤能够显著降低大鼠骨折后的血液粘度。见表1。

3.2 对骨折大鼠血管内皮细胞的生长因子(VEGF)的影响骨折对照组与正常组比较，VEGF浓度在统计学上无显著性差异(P>0.05)；与骨折对照组和正常组比较，桃红四物汤骨折治疗组VEGF浓度显著增高(P<0.01)。说明桃红四物汤具有提高骨折大鼠体内VEGF浓度的作用。见表2。

表1 桃红四物汤对早期闭合性骨折大鼠血液流动性的影响±s，n=20)

注：与正常组比较，*P<0.05，与骨折对照组比较，**P<0.05

表2 桃红四物汤对骨折大鼠血管内皮细胞的生长因子(VEGF)的影响

注：与正常组比较，*P>0.05，与骨折对照组比较，**P<0.01

4 讨论

《圣济总录·伤折门》云：“脉者，血之府，血行脉中……若因伤折，内动经络，血行之道不得宣通，瘀积不散，则为肿为痛，治宜除去恶瘀”。《疡医大全》曰：“有跌伤骨折，宜活血化瘀为先，血不活则瘀不去，瘀不去则骨不能接也”。可见传统中医理论，对活血化瘀法在骨折早期治疗中的重视。桃红四物汤方中，桃仁、红花为君，活血化瘀力强；再加上四物汤养血和血，去瘀血，生新血，消肿止痛，切合病机，促进骨折愈合。

VEGF是一种特异性作用于血管内皮细胞的生长因子。文献报道显示[4]，VEGF能够促进骨折早期断端骨痂新生微血管的增生，特异性增加骨折局部的血流量，增进成骨细胞与软骨内骨化之间的相互作用，诱导成骨，加快骨折愈合过程。从本实验结果中可以看出，桃红四物汤能够明显增加骨折大鼠VEGF浓度，从而对早期骨折的愈合产生促进作用。

血液流变学指标是血液循环系统内环境的反映。其中，全血黏度是反映血液流变学基本特征的参数，也是反映血液黏滞程度的重要指标。全血黏度有高切变和低切变两种黏度：高切变黏度反映红细胞的变形能力，变形能力低，血液黏度便高；低切变黏度则反映红细胞的聚集能力，红细胞相互聚集，血液黏度升高。血浆黏度是血液黏滞性和浓稠性的反映，血浆黏度是影响全血黏度的重要因素之一。任映等的研究显示[5]，骨折后骨膜微血管损伤、骨内血液系统破坏等因素，引起血液黏度增加，以早期更为明显。而骨折的愈合需要良好的微循环和充足的血运[6]。从实验结果看出，桃红四物汤降低了血液黏度，使血液流动性增加，从而改善了骨折部位血供，促进早期骨折的愈合。

实验结果表明，桃红四物汤具有促进早期骨折愈合的作用，其作用途径与改善早期骨折血液流动性和调节骨折早期VEGF浓度相关。

[1]刘善明.桃红四物汤对下肢胫腓骨骨折早期炎性指标水平影响分析[J].四川中医，2014，32(8)：78-80.

[2]王威，廖苏平，危蕾.桃红四物汤对上肢闭合性骨折早期血液流变学和炎症因子水平的影响[J].中药材，2014，37(2)：361-362.

[3]张连方，齐进，王晋申，等.小鼠闭合性股骨骨折模型的建立与评估[J].中国矫形外科杂志，2010，18(2)：143-146.

[4]钟刚，裴福兴，樊瑜波.血管内皮生长因子基因转染促进骨折愈合的实验研究[J].中国矫形外科杂志，2004，12(8)：604-606.

[5]任映，王琨，朱志慧，等.大分子葡萄糖酐血瘀大鼠偶氮蓝体表特征与血液流变性的相关性[J].中国实验方剂学杂志，2010，16(8)：105.

[6]赵志强，王体沛，王俊芳.丹参与川芎嗪对家兔骨折后血液流变学的影响[J].中华中医学杂志，2005，29(5)：374-375.

李秀秀(1974-)，女，齐齐哈尔，研究方向：中药方剂。

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1007-2349(2015)08-0066-02

2015-06-01)

△通信作者：金福厚，Tel：15845207022。