妊娠期糖尿病患者和正常孕妇在不同孕周中血清及新生儿脐血中视黄醇结合蛋白4的含量变化*

孙霞 韩淑娟 纪向虹 王茜

视黄醇结合蛋白4（Retinol binding protein，RBP4）是2005年首先由美国学者Yang等[1]最新发现的由肝脏、脂肪细胞分泌的与肥胖有关的脂肪细胞因子（adipokine），RBP4是一种血浆视黄醇结合蛋白，是全反式视黄醇即维生素A的运载蛋白，其主要功能是进行维生素A的细胞内转运代谢。在转运过程中，视黄醇结合蛋白与视黄醇、甲状腺素运载蛋白形成三聚体，将视黄醇运送至体内特定的靶组织和器官，发挥其主要作用，临床已用血清RBP4水平变化来早期诊断肝肾疾病。近年来已有研究表明，RBP4与胰岛素抵抗的发生关系密切，但RBP4水平在GDM孕妇血清中的变化有不同结论[2]。能否通过控制RBP4水平来干预GDM发展，以提供新的研究方向。本研究选择2013年1-12月在本院产科产检的孕妇100例，检测视黄醇结合蛋白4在妊娠期糖尿病患者和正常孕妇的不同孕周的血清及新生儿脐血中的含量变化，了解RBP4与GDM的关系，现具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年1-12月在本院产科产检的妊娠期糖尿病孕妇50例作为试验组，正常孕妇50例作为对照组。所选孕妇均无妊娠期高血压、冠心病、肝肾功能损害、感染等合并症，并且年龄、体质指数、采血孕周等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。

表1 两组一般资料比较（x-±s）

1.2 妊娠期糖尿病诊断标准 参照IADPSG2010诊断方法及标准，在妊娠24~28周首先检查FPG，FPG≥5.1 mmol/L，可诊断。4.4 mmol/L≤FPG<5.1 mmol/L，则行OGTT：空腹测血糖1次，然后5 min内口服75 g糖，服糖后l、2 h分别测血糖，血糖判定标准为5.1、10.0、8.5 mmol/L，如血糖有1项达到或超过正常值可诊断为GDM，3项均正常为NGT。

1.3 方法

1.3.1 标本采集 于孕31~33周（Ⅰ）、37~41周（Ⅱ）采取孕妇空腹肘静脉血，产后即刻采取足月新生儿脐血（Ⅲ），孕妇采血前3 天正常饮食与作息，每天碳水化合物摄入量在150 g以上。采血前晚要求禁食12 h，晨起8点抽取空腹静脉血，静置2 h使充分凝固，以1000 r/min离心10 min，取上清液（血清）分装，-80 ℃冰箱保存备用。但应避免反复冻融，-80 ℃不应超过1个月，标本溶血会影响结果，因此溶血标本不应进行此项检测。所有血样统一编号保存，各项指标均统一标准。

1.3.2 实验方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）测定血清RBP4水平，ELISA试剂盒购自美国DR公司，批内差异<57%。实验开始前，各试剂均平衡至室温，严格按照说明书将标准品倍比稀释。分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔内加样品稀释液100 μL，其他孔分别加标准品或待测样品100 μL，注意将样品加于酶标板底部，不触及孔壁，轻轻摇动混匀，避免气泡，用酶标板覆膜，37 ℃温育2 h。弃去液体，甩干，每孔加临用前配制的检测溶液A工作液100 μL（生物素化抗体溶液），酶标板覆膜，37 ℃温育1 h。弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1~2 min，甩干。每孔加临用前配制的检测溶液B工作液100 μL（HRP酶结合物溶液），酶标板覆膜，37 ℃温育1 h。弃去孔内液体，甩干，洗板5次。每孔加底物溶液90 μL，酶标板覆膜，37 ℃避光显色，当标准孔的前3~4孔有明显的梯度蓝色，后3~4孔梯度不明显时终止。以与底物液的加入顺序相同的顺序加终止液50 μL终止反应，蓝色立转黄色。提前设定好酶标仪（美国BIORAD iMark型全自动酶标仪），在450 nm波长测量，直接读出检测样本的浓度值。

1.4 统计学处理 所得数据采用SPSS 18.0进行统计学分析，各指标均服从近似正态分布，计量资料以（±s）表示，方差齐比较采用t检验，方差不齐比较采用t’检验，多个样本均数比较采用方差分析，RBP4与其他临床指标指标间的关系判定分别进行直线相关分析，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清RBP4水平比较 两组血清RBP4比较，差异有统计学意义（F=1680.85，P<0.001）；不同采血时段血清RBP4比较，差异有统计学意义（F=7285.51，P<0.001）；两组血清RBP4的差值在不同采血时段逐渐增加，比较差异有统计学意义（F=1381.70，P<0.001），见表 2~3。

表2 两组血清视黄醇结合蛋白4水平比较（x-±s）μg/mL

表3 重复测量方差分析结果表

2.2 不同采血时段两两比较 随着孕周的增加RBP4增加，不同时间段两两比较差异均有统计学意义（P<0.001）；试验组RBP4增加的幅度大于对照组，比较差异均有统计学意义（P<0.001），见表4。

表4 不同采血时段两两比较结果表

2.3 试验组血清RBP4水平与其他临床指标的相关性分析 血清RBP4水平与FBG、FINS、HOMA-IR均呈明显正相关（P<0.001），见表5。

表5 试验组血清RBP4水平与其他临床指标的直线相关性分析

3 讨论

GDM是指妊娠期发现或首次发生的不同程度的糖代谢异常，GDM与多种母儿并发症密切相关，GDM对母婴的危害极大，易导致血管病变，而发生胎儿宫内窘迫、巨大儿、子痫、胎盘早剥、早产等并发症。而GDM早期诊断与治疗尤其重要，人们对它研究了多年，但迄今为止GDM的发病机制尚不清，有学者提出，GDM可能是多种因素起作用而引起的一种疾病，研究脂肪因子，可进一步探讨GDM的发病机制，视黄醇结合蛋白4是2005年首先由美国学者Yang等[1]发现的由肝脏、脂肪细胞分泌的脂肪细胞因子（adipokine），RBP4位于染色体10q23-q24，由RBP4基因编码，主要功能是进行维生素A的细胞内转运代谢。RBP4属于血浆视黄醇结合蛋白，RBP4与肥胖、糖尿病、肝病、心脑血管病等的发生、发展相关[3-5]。近年来，国内外许多学者对GDM妇女RBP4和血糖等指标进行了研究，已有研究证实，RBP4与胰岛素抵抗关系密切[2]。Chan等[6]研究已发现，RBP4水平在妊娠期糖尿病孕妇血清中高于正常，任利容等[7]也认为GDM孕妇血清RBP4水平明显升高，RBP4可能参与了GDM孕妇糖代谢紊乱，刘静婧等[8]研究发现RBP4可能在T2DM发生发展中起作用。本研究显示随着妊娠的进展，血清RPB4水平呈上升趋势，妊娠期糖尿病患者血清RPB4水平各时期均高于正常妊娠组，比较差异均有统计学意义（P<0.001），与上述研究结果一致。但也有学者得出相反结论，Inoue等[9]的研究发现RBP4水平在早孕、中孕、晚孕时无明显差异；Krzyzanowska等[10]的研究结果表明孕29周时，RBP4水平在GDM患者血清中明显低于健康孕妇，而血清RBP4和视黄醇的比值却显著高于健康孕妇，并且血清RBP4水平与孕妇的胰岛素抵抗状态呈正相关；Graham等[11]研究发现血清RBP4水平与胰岛素抵抗存在显著的正相关性，在GDM复杂的发病机制中，RBP4可能参与了孕妇血糖的调节，与GDM的发生发展有关。测量RBP4浓度会有助于预测妇女发展为妊娠糖尿病的风险[12]。但其具体的作用有待于进一步的研究，结合GDM其他脂肪细胞因子的改变，对揭示脂肪因子与GDM的关系有一定帮助。王驰等[13]认为RBP4推动了对妊娠糖尿病、胰岛素抵抗的研究，并已成为现今最受人关注的脂肪因子之一。张博等[14]认为作为一种脂肪细胞因子，RBP4与胰岛素抵抗之间的密切关系是研究的重点和难点，明确其具体机制，将为糖脂代谢等相关问题展开新的思路，孙蕾芳等[15]研究显示妊娠期糖尿病孕妇皮下脂肪组织RBP4水平高表达及血清RBP4高水平，可能是妊娠期糖尿病孕妇发生胰岛素抵抗的机制之一，这些将对GDM发病机制的明确、GDM治疗及后期随访与代谢综合征的防治具有重要指导意义。

综上所述，RBP4是体内一种重要的转运蛋白，主要起着结合、转运视黄醇的作用，本研究显示，RBP4水平在妊娠期孕妇血清中显著高于对照组，随着妊娠的进展RBP4逐渐升高，新生儿脐血中含量最高，血清RBP4水平，可能对妊娠期糖尿病的筛查、预测及评估预后有一定意义，同时为GDM的诊断与治疗提供新的理论依据。

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