HPLC法测定中药成分溶度参数的实验研究

祝 辉 罗自力 张国庆 何德云 杜建红

成都军区药品仪器检验所，四川 成都 610017

HPLC法测定中药成分溶度参数的实验研究

祝 辉 罗自力 张国庆 何德云 杜建红

成都军区药品仪器检验所，四川 成都 610017

目的：探讨高效液相色谱法用于测定中药成分溶度参数的可行性。方法：运用色谱理论及Hildebrand-Scatchard溶解度理论创立HPLC法测定化合物的溶度参数的数学表达式，利用咖啡因验证该理论并对大黄类成分进行测定。结果：咖啡因验证该法可信度高，曲线拟合所得芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄素甲醚溶度参数分别为39.65 J1/2/cm3/2、39.10 J1/2/cm3/2、38.41 J1/2/cm3/2和36.50 J1/2/cm3/2。结论：高效液相色谱指纹图谱构建数学模型方法能够同时对中药多个组分进行分析、测定，能够为单味中药药剂的制造工艺提供一定的理论基础与测定技术方面的支持。

高效液相色谱法；中药；溶度参数

中药及复方有效多成分群的溶解规律预测是从事中药制剂研究的前提和基础[1]。目前，溶解度或总浸出物的方法来衡量中药及复方中多成分在某一溶剂中的溶解行为并不能从理论上揭示化合物溶解的本质规律，制约了单味调配中药的剂型改革和中药配伍规律的药剂学理论的阐明[2]。本文基于HPLC中的指纹图谱分析方法及原理，对中药成分溶度参数进行分析，以期为中药制剂的现代化提供理论和实验依据。

1 HPLC指纹图谱

中药指纹图谱是指某种中药材或中成药经过适当处理后，采用一定的分析手段，提取其化学信息并加以描述，能够标志该中药材或中成药特性的共有峰的图谱[3]。HPLC色谱条件的选择、稳定性试验和精密度试验是构建HPLC指纹图谱的主要部分。

1.1 色谱条件的选择 应该使中药成分尽可能多的在HPLC中显示出来，保持各个峰较好的分离度和峰型。此外色谱条件还要保证主要指标成分以及活性成分能够非常有效地进行分离。一般将分析时间控制在4h内。DAD检测器的出现让我们可疑选择更多的检测波长，实现多波长的同时检测，所获得的HPLC指纹图谱能展示中药多波长指纹图谱的丰富信息，用其定性和定量分析更准确。进样量应保持最小成分的特征峰峰面积在4位数以上。在保证以上条件的前提下，应保持色谱条件的简单、实用。

1.2 稳定性试验 选择特定的时间点，如24h、36h及48h，对所制备的供试品溶液的稳定性进行考察，计算本时段之内的特征色谱峰的相对保留时间与峰面积的比值的离散程度，相对标准偏差(RSD)应<5%。

1.3 精密度试验 对仪器的精密度进行考察，可通过两种方法实现。①制备6～9份供试品溶液，对不同时间段内的特征峰保留时间及峰面积进行分析，RSD<5%为合格。②同一供试品溶液在同一个色谱条件之下，以及在同一个时间段之内进行6～9次的连续进样，对特征峰保留时间及峰面积进行分析，RSD<3%为合格。

2 基本原理

2.1 中药单成分保留时间与溶度参数的关系Hildebrand-Scatchard正规溶液溶解度方程与HPLC色谱原理结合的公式为：

①

②

最终计算得到

③

2.2 总量参数AT,BT,CT与指纹图谱总量几何平均保留时间、单成分保留时间，a，b，c的关系

④

3 材料与方法

3.1 仪器与材料 Agilent 1200高效液相色谱仪，配备DAD检测器；梅特勒XPE型电子天平；咖啡因(批号：050605)上海试剂二厂生产；芦荟大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄素甲醚均购自中国药品生物制品鉴定所；乙腈为色谱纯；水为Milliq水。

3.2 方法

3.2.1 供试品的制备 分别精密称取咖啡因和大黄类药物成分的标准品各5mg置于25 ml容量瓶中，乙腈定容至刻度，为标准液。分别量取上述大黄类药物成分标准液1ml，混合后制成混合对照品溶液。均过膜备用。

3.2.2 色谱条件 色谱柱：安捷伦ZOBAX PLUS色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱温：30℃；进样量：10μl；流动相：乙腈和水梯度洗脱，咖啡因运行50min，乙腈体积比由30%～100%运行，25%～100%、15%～100%、10%～100%、5%～100%和0%～100%6个程序。大黄类药物运行100min，乙腈体积比由50%～100%运行，40%～100%、30%～100%、20%～100%、10%～100%和0%～100%6个程序。

4 结果与分析

4.1 咖啡因单成分溶度参数 指纹图谱几何平均保留时间与总量表观溶度参数关联的函数表达式或数学模型，根据数学表达式计算出咖啡因在不同洗脱条件下的溶度参数值大小值分别为38.02 J1/2/cm3/2、38.34 J1/2/cm3/2、38.96 J1/2/cm3/2、39.23 J1/2/cm3/2、39.96 J1/2/cm3/2和40.25 J1/2/cm3/2。进行求导线性法处理，δR得见表1。

表1 咖啡因导数线性回归法所得溶度参数

4.2 大黄类成分溶度参数 根据数学表达式计算出芦荟大黄素在不同洗脱条件下的溶度参数值分别为42.02 J1/2/cm3/2、43.34 J1/2/cm3/2、44.92 J1/2/cm3/2、46.27 J1/2/cm3/2、43.35 J1/2/cm3/2和45.49 J1/2/cm3/2。大黄酸在不同洗脱条件下的溶度参数值分别为42.02 J1/2/cm3/2、43.34 J1/2/cm3/2、44.92 J1/2/cm3/2、46.27 J1/2/cm3/2、43.35 J1/2/cm3/2和45.49 J1/2/cm3/2。大黄素在不同洗脱条件下的溶度参数值分别为41.49 J1/2/cm3/2、42.43 J1/2/cm3/2、44.22 J1/2/cm3/2、44.69 J1/2/cm3/2、45.39 J1/2/cm3/2和45.99 J1/2/cm3/2。大黄素甲醚在不同洗脱条件下的溶度参数值分别为38.12 J1/2/cm3/2、39.54 J1/2/cm3/2、40.92 J1/2/cm3/2、41.47 J1/2/cm3/2、42.55 J1/2/cm3/2和43.59 J1/2/cm3/2。大黄类成分进行求导线性法处理，得见表2。曲线拟合所得芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄素甲醚溶度参数分别为39.65 J1/2/cm3/2、39.10 J1/2/cm3/2、38.41 J1/2/cm3/2和36.50 J1/2/cm3/2。见表2。

表2 大黄类成分导数线性回归法所得溶度参数

5 结论

本文为中药复方药剂学配伍规律研究搭建理论与技术平台，该法运用统计学原理，求算指纹图谱曲线的总量零、一、二阶矩。其中总量一阶矩为总量保留时间对峰面积的算术平均值，而总量几何平均保留为总量保留时间对峰面积的几何平均值，因此可以反映整张图谱众多指纹峰的集中趋势[4]。本文所测得咖啡因和大黄类成分的溶度参数与文献报道[5]基本一致，说明本方法可信。因此，高效液相色谱指纹图谱构建数学模型方法，能够同时对中药多个组分进行分析、测定，能够为单味中药药剂的制造工艺提供一定的理论基础与测定技术方面的支持。

[1] 贺福元，周宏灏，罗杰英，等．HPLC测定中药成分溶度参数的理论与实验研究[J]．中国中药杂志，2008，33(6)：642-647．

[2] 贺福元，刘文龙，扶瑾，等．HPLC测定中药多成分总量溶度参数的理论及实验研究[J]．中国中药杂志，2010，35(8)：977-983．

[3] 李凤丽，李进，吴娇．指纹图谱技术在中药领域研究中应用现状[J]．天津药学，2014，26(3)：52-57．

[4] 张聪，金德庄．中药山茱萸HPLC色谱指纹特征研究[J]．中成药，2008，30(12)：1726-1731．

[5] 赵成．高效液相色谱法(HPLC)用于测定中药成分溶度参数的研究[J]．亚太传统医药，2012，8(10)：15-16．

祝辉(1979-)，男 ，四川双流人，汉族，博士，主管药师，主要从事临床药学的研究。

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1007-8517(2015)08-0012-03

2015.01.27)