菟蓉补肾方治疗多囊卵巢综合征的作用机制研究*

郑 君，许彩凤，王志旺

(1.甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050； 2.甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000)

·实验研究·

菟蓉补肾方治疗多囊卵巢综合征的作用机制研究*

郑 君1，许彩凤1，王志旺2

(1.甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050； 2.甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000)

目的：研究菟蓉补肾方对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS) 大鼠生殖内分泌的影响及机制。方法：取有规律动情周期的雌性SD大鼠16只作为正常对照组；以来曲唑复制PCOS模型，将造模成功的80只大鼠，按体质量随机分为模型对照组、氯米芬组(5 μg/g )、菟蓉补肾方高(68 g/kg)、中(34 g/kg)、低剂量组(17 g/kg)5组。中药组给予相应药物灌胃，其余3组给予等量蒸馏水，1 d 1次，连续21 d，其中氯米芬组最后5 d给予氯米芬。末次灌胃24 h后，称量各组大鼠体质量；股静脉采血测卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)；称取卵巢湿质量并记录，计算脏器指数；观察卵巢组织病理学改变，对黄体数、卵泡数及其成熟程度进行半定量分析；观察大鼠合笼后的受孕、产仔情况。结果：菟蓉补肾方高、中剂量组大鼠的卵巢质量及指数均减小，与模型对照组对比，差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。菟蓉补肾3个剂量组大鼠的卵泡成熟度增加，窦状卵泡与黄体数量均不同程度增多。与模型对照组对比，菟蓉补肾方各组LH 和T 明显下降，E2、P和FSH 有不同程度升高。菟蓉补肾方高、中剂量组大鼠受孕数与产仔数提高，与模型对照组对比，差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论：菟蓉补肾方对PCOS大鼠具有治疗作用，改善性激素失衡状态是其作用机制之一。

补肾活血化痰法/治疗运用；多囊卵巢综合征/药效学；生殖内分泌；动物；大鼠

多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是生育期妇女常见的内分泌疾病，以慢性无排卵和高雄激素血症为特征，表现为月经周期不规律、不孕、多毛和痤疮，是最常见的无排卵性不孕的原因[1]。中医学无本病病名，相关内容散见于“月经后期”“闭经”“不孕”“癥瘕”等篇章。历代医家对PCOS研究颇多，普遍认为本病的病机是以肾虚为本，痰湿、瘀血为标[2]。笔者根据补肾活血化痰法组成菟蓉补肾方，临床治疗PCOS患者取得良好疗效。本研究以PCOS大鼠体质量、血清性激素、卵巢组织病理学及合笼后的受孕、产仔情况为研究指标，探讨补肾活血化痰法对PCOS大鼠生殖内分泌的影响及作用机制。

1 材料与方法

1.1 动 物

6周龄SPF级雌性SD大鼠，体质量160～180 g，由甘肃中医学院实验动物中心提供，动物生产许可证号SCXK(甘)2004-0006。SPF级实验室许可证号为SYXK(甘)2011-0001。

1.2 药品、试剂与仪器

菟蓉补肾方为课题组临床多年经验方，以补肾活血化痰法组方，由菟丝子、肉苁蓉、熟地黄、当归、丹参、半夏、茯苓、皂角刺、山茱萸、巴戟天等10余种中药组成，药材由甘肃中医学院中药房提供；氯米芬片，广州康和药业有限公司产品，批号120704；来曲唑片，江苏恒瑞医药股份有限公司产品，批号12082156。卵泡刺激素(FSH，批号1799168)、黄体生成素(LH，批号176081)、雌二醇(E2，批号175761)、孕酮(P，批号176726)、睾酮(T，批号178782)放免试剂盒均购自天津九鼎医学生物工程有限公司。N- 5600PC型METASH 可见分光光度计，上海元析仪器有限公司产品；BS1103 型ZMARK酶标仪，美国BioRad产品。

1.3 动物分组、模型的建立与给药

取有规律动情周期的雌性SD大鼠16只作为正常对照组，其余大鼠参照相关实验方法[3-4]造模：来曲唑1 μg/g(溶于10 g/L羧甲基纤维素中)，1次/d，连续21 d。将造模成功的80只大鼠，按体质量随机分模型对照组、氯米芬组(5 μg/g )、菟蓉补肾方高(68 g/kg)、中(34 g/kg)、低剂量组(17 g/kg)5组。中药组给予相应药物灌胃，其余3组给予等量蒸馏水，1 d 1次，连续21 d，其中氯米芬组最后5 d 给予氯米芬。

1.4 检测指标

末次灌胃24 h后，在每组大鼠中随机取8只，称量体质量，股静脉采血测FSH、LH、E2、P、T；断颈处死，剖腹取卵巢，剥去周围附着组织，称取湿重并记录，计算脏器指数；卵巢用100 g/L 甲醛固定，石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察其组织病理学改变，对黄体数、卵泡数及其成熟程度进行半定量分析[5]。每组另外8只大鼠分成2笼，每笼放入1只雄性种鼠合笼，观察受孕与分娩情况。

1.5 统计学方法

2 结 果

2.1 各组大鼠体质量、卵巢及其指数对比

正常对照组大鼠体质量增长适中，卵巢色泽红润，体积较小。模型对照组大鼠体质量增长迅速，卵巢表面苍白，体积明显增大，卵巢质量及指数与正常对照组对比，差别有统计学意义(P<0.01)。菟蓉补肾方高、中剂量组大鼠的卵巢质量及指数均减小，与模型对照组对比，差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表1。

组 别剂量/(g·kg-1)体质量/g卵巢质量/mg卵巢指数/(mg·100-1·g-1)正常对照组—265.6±24.2*131.1±16.7**49.49±5.91**模型对照组—294.5±25.0193.9±28.065.81±7.76氯米芬组5×10-3273.3±26.3136.3±17.7**50.31±8.74**菟蓉补肾方高剂量组68267.0±25.2*140.7±18.7**53.00±7.35**菟蓉补肾方中剂量组34271.6±25.5156.0±19.5**57.60±6.60*菟蓉补肾方低剂量组17284.4±26.5159.3±22.8*56.47±10.10

注：与模型对照组对比，*P<0.05，**P<0.01。

2.2 各组大鼠卵巢组织病理学对比

正常对照组大鼠的卵巢可见多个黄体及不同发育阶段的卵泡，卵巢颗粒细胞呈现多层，一般为8～9 层。模型对照组大鼠的卵巢间质细胞增生明显，见较多早期发育的小卵泡与闭锁卵泡，排卵前卵泡少；卵泡囊状扩张明显，卵母细胞或放射冠消失，颗粒细胞层数减少，一般为1～3 层，黄体少并有不完全的黄素化。氯米芬组及菟蓉补肾方3个剂量组大鼠的卵泡成熟度增加，窦状卵泡数量与黄体数量均不同程度增多。见图1。各组大鼠卵巢的窦状卵泡与黄体数量对比见表2。

A.正常对照组； B.模型对照组； C.阳性对照组 D.菟蓉补肾方高剂量组；E.菟蓉补肾方中剂量组；F.菟蓉补肾方低剂量组图1 各组大鼠卵巢组织病理学对比 (HE，×20)

组 别剂量/(g·kg-1)窦状卵泡数量/个窦状卵泡数量/卵泡计数量/%黄体数量/个正常对照组—4.6±1.5**465.4±1.9**模型对照组—1.4±0.9142.0±0.8氯米芬组5×10-32.9±1.2*293.6±1.3*菟蓉补肾方高剂量组682.5±1.1*253.1±1.0*菟蓉补肾方中剂量组342.3±0.7*232.9±0.8*菟蓉补肾方低剂量组171.9±0.6192.5±0.8

注：与模型对照组对比，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 各组大鼠血清性激素水平对比

与正常对照组对比，模型对照组大鼠血清LH 和T 升高、E2和P降低，差别均有统计学意义(P<0.01)。与模型对照组对比，菟蓉补肾方各组和氯米芬组LH 和T 明显下降，E2、P和FSH 有不同程度升高。见表3。

组 别剂量/(g·kg-1)卵泡刺激素/(IU·L-1)黄体生成素/(IU·L-1)雌二醇/(ng·L-1)孕酮/(μg·L-1)睾酮/(μg·L-1)正常对照组—5.04±0.836.05±1.53**30.63±5.97**49.27±9.37**45.80±8.77**模型对照组—4.95±0.7912.91±2.8219.75±3.9034.96±6.08101.16±17.79氯米芬组5×10-35.59±0.957.16±1.81**27.76±5.85**45.63±8.83*61.36±11.55**菟蓉补肾方组高剂量组686.14±1.01*7.24±1.84**26.52±4.74**44.57±7.44*69.65±13.54**菟蓉补肾方组中剂量组345.62±0.898.04±1.88**24.65±4.62*40.97±7.8878.70±15.41*菟蓉补肾方组低剂量组174.53±0.759.82±2.31*21.71±4.0836.58±6.5382.19±16.71*

注：与模型对照组对比，*P<0.05，**P<0.01。

2.4 各组大鼠合笼后受孕数量与产仔数量对比

合笼后，正常对照组大鼠全部受孕，氯米芬组7只大鼠受孕，模型对照组1只大鼠受孕，并于合笼24 d后开始分娩。菟蓉补肾方高、中剂量组大鼠受孕数与产仔数提高，与模型对照组对比，差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表4。

组 别剂量/(g·kg-1)受孕数量/只产仔数量/只正常对照组—8**8.5±1.6**模型对照组—10.6±1.8氯米芬组5×10-37*6.4±2.7**菟蓉补肾方组高剂量组686*5.8±3.6**菟蓉补肾方组中剂量组346*5.1±3.2**菟蓉补肾方组低剂量组1743.0±3.3

注：与模型对照组对比，*P<0.05，**P<0.01。

3 讨 论

多囊卵巢综合征病因不明，临床表现高度异质性，是引起女性月经失调、导致生育期妇女不孕的重要原因 ，发病机制尚未明确，临床检查呈现卵巢多囊性改变、LH/FSH比值增大等[6]。现代医学治疗PCOS致不孕症主要是促排卵，常用氯米芬作为首选药物，但存在高排卵率、低妊娠率的现象，且有发生卵巢过激综合征及黄体缺陷的风险。

历代医家对本病的研究众多，比较统一的认识是该病病机复杂，涉及肾、肝、脾，兼有痰湿、瘀血，肾—天癸—冲任—胞宫轴失调。肾主胞胎，肾在月经的产生中起主导作用，故自古调经种子从肾论治。肾乃先天之本，元气之根，主藏精气，是人体生长、发育和生殖的根本。肾气虚则胞脉、胞络空虚，无力摄精成孕；肾阳虚则寒凝血瘀，阻碍孕卵着床；肾精亏虚则卵子难以发育成熟而排出。肾气盛，肾精足，卵子作为生殖之精才能发育成熟而排出。肾阴是卵子发育的物质基础，肾阳是其生长的动力。菟蓉补肾方中熟地黄、山药、山茱萸等药物促进卵泡发育。菟丝子、巴戟天、肉苁蓉等药物振奋肾阳，促进优势卵泡的形成。肾阳不足、无力推动、痰湿瘀血阻滞、卵泡郁闭等是卵泡成熟但不能排出的原因，处方中加入当归、川芎、丹参、皂角刺等行气活血通络之品，使冲任气血畅达，重阴转阳，促进卵泡的排出。众所周知，PCOS的基础治疗方法是运动和控制体质量[1]。PCOS血清T升高的表现之一是肥胖，中医辨证为痰湿。菟蓉补肾方中运用茯苓、陈皮、半夏等药物以健脾化痰除湿起到利湿减肥、间接调节内分泌的作用。

菟蓉补肾方是课题组长期临床实践总结出的治疗PCOS的有效方剂，具有补肾养血、祛痰除湿、活血化瘀的功效，紧扣PCOS肾虚为本，痰湿、瘀血为标的基本病机。本研究结果显示：经菟蓉补肾方治疗后，PCOS大鼠的体质量增长趋缓，LH与T明显下降，同时E2、P与FSH有所上升，卵巢质量及指数减小，卵巢多囊性病理改变有所缓解，窦状卵泡数与黄体数增加，受孕数与产仔数增多。结果表明：补肾活血化痰法对PCOS有一定的治疗作用，改善性激素失衡状态、调节生殖内分泌水平是其作用机制之一。

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[4]刘艳丽，贾莉婷，马葆靖，等.来曲唑法建立PCOS大鼠模型的评价[J].中国妇幼保健，2011，26(8)：1213-1216.

[5]陈芊，孙云松，孙选，等.益肾调肝Ⅱ号方对多囊卵巢综合征大鼠卵巢黄体生成素受体表达的影响[J].中医杂志，2011，52(16)：1409-1412.

[6]乐杰.妇产科学[M].7版.北京：人民卫生出版社，2008：315.

(编辑 陶 珠)

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1001-6910(2015)05-0067-04

R711.75

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.05.32

郑君(1982-)，女(汉族)，河南南阳人，主治医师，博士，研究方向：中医药调节生殖轴及治疗月经病。

甘肃省自然科学研究基金计划项目(1208RJZA194)

2014-12-15；

2015-02-03