高效液相色谱法测定盐酸度洛西汀肠溶胶囊中α－萘酚杂质含量

周宏艳 ，罗 斌 ，王 菁

（1.浙江众益制药股份有限公司，浙江 丽水 323000； 2.温州医科大学，浙江 温州 325000；3.山东省临沂市平邑县食品药品监督管理局，山东 临沂 273300）

盐酸度洛西汀（duloxetine hydrochloride）是美国Eli Lilly公司研究开发的新型口服抗抑郁症药[1－2]，具有独特的作用机制和药理特性，对5－羟色胺（5－HT）和去甲肾上腺素（NE）具有双重再摄取抑制作用[3]，在发挥抗抑郁作用的同时，还能改善抑郁症继发的躯体症状，减轻躯体疼痛症状[4－5]。该药对抑郁症、糖尿病周围神经病变所致的疼痛以及压力性尿失禁[6]等均有一定的疗效。但盐酸度洛西汀中所含杂质α－萘酚具有生理毒性，吞咽或经皮吸收都能引起中毒，对肾脏可引起出血性肾炎，误服后可出现呕吐、腹泻、腹痛、痉挛、贫血、虚脱等症状。因此，有必要对盐酸度洛西汀肠溶胶囊中所含特定杂质α－萘酚进行限度控制。本试验中建立了高效液相色谱(HPLC)法测定盐酸度洛西汀肠溶胶囊中α－萘酚杂质的含量，该方法专属性强、耐用、准确，能有效控制产品质量。

1 仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪，包括VWD检测器、G1311C自动调配泵、G1329B标准自动进样器、G1316A可调柱温恒温箱、Agilent色谱化学工作站等；BT25S型电子分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；KQ－500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。盐酸度洛西汀对照品（批号为Y0001453），盐酸度洛西汀系统适用性对照品（批号为Y0001454），均来自欧洲药品质量管理局；α－萘酚对照品（批号为 43.04.09.01，英国政府化学实验室标准集团）；盐酸度洛西汀肠溶胶囊（批号为 120801～120803，A公司市售品）；盐酸度洛西汀肠溶胶囊对照品（商品名欣百达，批号为 A858915D，美国 Eli Lilly公司）；乙腈（色谱级，美国Tedia有限公司），正丙醇（色谱级，国药集团化学试剂有限公司）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Agilent C8柱(150 mm × 4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈－正丙醇－缓冲液（配制2.9 g/L磷酸溶液，用氢氧化钠溶液调节 pH至2.5，取该溶液1L，加入 10.3 g一水己烷磺酸钠，摇匀，使完全溶解，13 ∶17 ∶70）；流速：1.0 mL /min，检测波长：230 nm；柱温：40℃；进样量：10 μL。在拟订色谱条件下，度洛西汀与杂质 F的分离度为2.32，拖尾因子为1.14，杂质C与α－萘酚的分离度为2.79，度洛西汀理论板数为8 214，表明系统适用性良好。色谱图见图1A。

2.2 溶液制备

精密称取盐酸度洛西汀对照品适量，用乙腈－水（25∶75）配制成0.2 μg/mL盐酸度洛西汀溶液，作为对照品溶液。取本品细粉适量（约相当于度洛西汀 10 mg），精密称定，置50 mL容量瓶中，加上述溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：取制剂工艺所用辅料适量，用乙腈－水（25∶75）稀释至一定浓度；取盐酸度洛西汀系统适用性对照品适量，用上述溶剂配制成0.2 g/L的溶液；取α－萘酚对照品适量，用上述溶剂配制成 0.4 μg/mL的溶液。取配制溶液各 10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1B和图1C。结果表明，辅料不干扰α－萘酚的测定，且与其他杂质峰分离效果良好。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：取 α－萘酚对照品适量（约16 mg），置20 mL容量瓶中，加乙腈－水（25∶75）溶解并稀释至刻度、摇匀；精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，用上述溶剂稀释至刻度、摇匀。分别精密量取该溶液 2，5，10，15，20 mL，置 200 mL 容量瓶中，用上述溶剂稀释至刻度、摇匀，制成系列溶液。在上述色谱条件下，精密量取以上溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，并以α－萘酚进样量（W）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，回归方程为 A＝14 593.34 W＋0.116 6，r＝0.997 6（n＝5）。结果表明，α－萘酚进样量在 8×10－4～8×10－3μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

检测限与定量限试验：取α－萘酚适量，用乙腈－水（25∶75）配制成适宜质量浓度，分别精密量取10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，并逐步稀释测定，使信噪比约为10∶1时作为定量限，信噪比约为3∶1时作为检测限。结果表明，本法的定量限为2 ng，检测限为 0.2 ng。

重复性试验：精密称取α－萘酚对照品及混合辅料6份，每份约20 mg，用乙腈－水（25∶75）配制成每1 mL溶液中含 α－萘酚为0.4 μg/mL的供试品溶液。取 α－萘酚对照品，用上述溶剂并稀释制成质量浓度为 0.4 μg/mL 的溶液。取上述溶液各 10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果6份样品含量的 RSD为0.64% （n＝6），表明方法重复性良好。

中间精密度试验：按拟订方法配制供试品及对照品溶液，不同人员在另一色谱仪器上进样测定，每台仪器每人各测定6份，合并计算12份样品含量数据。结果含量的 RSD为0.48%（n＝12），表明方法的中间精密度均较好。

回收试验：分别取 α－萘酚对照品约 16，20，24 mg各 3份，精密称定后置100 mL量瓶中，按处方量加入空白辅料，加乙腈－水（25∶75）溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取该溶液2 mL，置10 mL容量瓶中，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀；精密量取该溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀过滤即得供试品溶液。按拟订色谱条件进样，记录色谱图。结果见表1。

表1 α－萘酚回收试验结果(n＝9)

耐用性试验：将色谱条件中的参数作适度变化，如采用不同色谱柱、调节不同柱温、不同流速及供试品不同过滤次数等，考察对测定结果的影响情况。在拟订色谱条件下，由图1可见，度洛西汀与杂质F的分离度均大于2，度洛西汀的拖尾因子均小于1.5，杂质C与α－萘酚的分离度均大于2，度洛西汀理论板数均大于5 000，测定结果基本一致，可见方法的耐用性良好。

2.4 样品有关物质检查

取对照品溶液10 μL注入液相色谱仪，对照品溶液中度洛西汀峰信噪比应不小于20∶1；再精密量取供试品溶液10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图至度洛西汀主峰保留时间的2倍，α－萘酚含量用峰面积乘校正因子计算，其他杂质含量按面积归一化法计算。结果3批样品及市售欣百达（批号为 A858915D）中α－萘酚均小于0.2%，总杂质均小于0.6%。结果见表2。

表2 盐酸度洛西汀肠溶胶囊有关物质测定结果

3 讨论

文献[7－11]报道了HPLC法测定盐酸度洛西汀肠溶片或肠溶胶囊中盐酸度洛西汀含量及有关物质，但均未考察盐酸度洛西汀中特定杂质α－萘酚的含量。由于α－萘酚为特殊毒性杂质，建议对盐酸度洛西汀肠溶胶囊中所含特定杂质α－萘酚进行限度控制。抑郁症给许多患者和家庭带来严重危害，盐酸度洛西汀肠溶胶囊具有较好的治疗效果。建议盐酸度洛西汀肠溶胶囊质量标准尽快对α－萘酚杂质进行控制，保证长期用药的安全性。

参考美国药典36.0（USP36）盐酸度洛西汀检测方法，建立了测定盐酸度洛西汀肠溶胶囊中α－萘酚杂质的含量的HPLC法，方法学考察表明，该法专属性强、耐用、准确，能有效检测出α－萘酚的含量。

有关物质检查结果显示，该法能有效检测出盐酸度洛西汀肠溶胶囊中α－萘酚及总杂质的含量，可效控制产品质量。

参考文献：

[1]Ai JG，Jin Z.Antide pressant duloxetine hydrochloride[J].Drug Progress，2003，27(3):188.

[2]Kirwin JL，Goren JL.Duloxetine:an antidepressant that inhibits both norepinephrine and serotonin uptake[J].Formulary，2003，38(1):29.

[3]Xavier，Rabasseda.Duloxetine anewerotonin /nordrenalinere up take in hibitor for the treatment of depression[J].Drugs today，2004，40(9):773－908.

[4]Dunner DL，Goldstein DJ，Mallinckrodt C，et al.Duloxetine intreatment of anxiety symptoms associated with depression[J].Depress Anxiety，2003，18(2):53－56.

[5]Goldstein DJ，Lu Y，Detke MJ，et al.Duloxetine in the treatment of depression:a double－blind placebo－controlled comparison with paroxetine[J].J Clin Psychophaxmacol，2004，24(4):389－399.

[6]Zhao J，Zhu Z.New drug in the therapy of severe depression and diabetes peripheral neuropathy－duloxetine[J].Chin Pharm J，2006，41(14):1 118－1 120.

[7]Yang QZ，Ye D.Determination of duloxetine hydrochloride in duloxetine hydrochloride enteric－pellets capsules and its related substances by HPLC[J].Chin Pharm Aff，2011，25(9):922－924.

[8]Shi YL，Sha JD.Assay and test for related substances of duloxetine hydrochloride enteric－coated tablets by HPLC[J].Chin Pharm Aff，2007，21(9):720－722.

[9]Wang P，Hu HX，Shi TL.Determination of duloxetine hydrochloride and its related substances by HPLC[J].Occup and Health，2013，29(10):1 223－1 225.

[10]Huang WZ，Dong AJ，Jing HY，Liu X.Determination of related substance in duloxetine hydrochloride by HPLC[J].Practical Pharmacy and Clinical Remedies，2011，14(3):234－235.

[11]Zhuo Z，Wang Q.Determination of contents of duloxetine hydrochloride and its related substances with HPLC[J].Journal of Pediatric Pharmacy，2007，13(1):34－36.