免疫功能与食管鳞癌发生发展的关系研究

王光大 武中林 赵阳 刘亮 林妍

食管癌是较常见的恶性肿瘤，发病率及病死率高，威胁人们的生命健康［1］，目前就诊的食管癌患者多为中晚期，丧失了最佳治疗时期，早期诊断及治疗对提高食管癌患者生存期及生活质量有重大意义。食管癌发生机制尚未阐明，有研究表明机体免疫功能与肿瘤的发生发展有一定关系［2－4］，本研究探讨免疫功能与食管鳞癌发生发展关系，为该病的防治提供实验基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集河北医科大学第四医院2008 年1 月至2009 年11 月80 例食管鳞状细胞癌患者静脉血，每例患者早晨空腹采静脉血1 ml 肝素抗凝，标本离体6 h 内完成流式细胞术实验。食管鳞状细胞癌80例患者中男55 例，女25 例;年龄38 ～83 岁，平均年龄(58.38 ±6.70)岁，中位年龄58.5 岁。取80 例健康人志愿者作为对照组。结合CT 检查对80 例食管鳞癌患者进行上中下段分组，上段4 例、中段55 例、下段21 例。2 组一般资料具有均衡性。

1.2 主要实验仪器及试剂 Epics-XLⅡ型流式细胞仪，美国Beckman-Coulter 公司;CD4-FITC、CD8-PE、CD25-PE 抗体，美国Beckman-Coulter 公司。

1.3 流式细胞术方法检测外周血CD4、CD8、CD25 细胞表达 取新鲜抗凝静脉血400 μl，分别加入4 个试管中，每个试管100 μl，其中一试管中加入CD4-FITC及CD8-PE 抗体各20 μl，另一试管中加入CD4-FITC及CD25-PE 抗体各20 μl，剩余两个试管中分别加入相对应的同型对照抗体。室温下避光放置30 min，裂解红细胞后上流式细胞仪检测。

1.4 流式细胞仪检测条件、参数及数据分析 采用美国Beckman Coulter 公司生产的Epics-XLⅡ型流式细胞仪，激发光源为15 mW 氩离子激光器，激发波长为488 nm，应用Expo 32 ADC 进行免疫荧光数据分析。检测前以flow-checkTMFluorpheres(10 μm)荧光微球(REF 6605359.Beckman Coulter，Inc.Fullerton，CA 92835.)作为标准样品调整仪器CV 值在2%以内。

1.5 统计学分析 应用SPSS 11.5 统计软件，计量资料以± s 表示，采用t 检验，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组外周血中CD4+及CD8+T 细胞表达水平 研究组外周血CD4+T 细胞表达率与对照组相比显著降低(P ＜0.01)，而研究组外周血中CD8+T 细胞表达率显著高于对照组表达率(P ＜0.01)。见图1。

图1 正常人及食管癌患者外周血CD +4 及CD +8 T 细胞表达

图2 正常人及食管癌患者外周血细胞表达

2.3 研究组外周血中CD+4、CD+8及细胞表达与不同临床病理特征的关系 食管鳞癌患者外周血中CD+4、CD+8及细胞表达与患者的性别、年龄、细胞分化程度及食管癌的上中下段无显著相关性(P ＞0.05)，与有无淋巴结转移具有显著相关性(P ＜0.05)。见表1。

表1 食管鳞癌患者外周血中CD+4 、CD+8及细胞表达与不同临床病理特征的关系 ± s

表1 食管鳞癌患者外周血中CD+4 、CD+8及细胞表达与不同临床病理特征的关系 ± s

项目 CD +4 T P 值 CD +8 T P 值 CD +4 CD +25T P值年龄(岁)≤60(n =45) 31.74 ±6.15 34.18 ±5.64 12.37 ±2.94＞60(n =35) 30.36 ±5.85 0.309 33.14 ±7.11 0.469 12.12 ±2.90 0.703性别男(n =55) 31.69 ±6.12 34.08 ±5.86 12.52 ±2.81女(n =25) 29.91 ±5.73 0.215 32.94 ±7.24 0.457 11.70 ±3.09 0.267细胞分化高/中(n =59) 31.37 ±6.03 33.89 ±5.68 12.56 ±2.90低(n =21) 30.46 ±6.09 0.556 33.29 ±7.95 0.711 11.41 ±2.83 0.120淋巴结转移阳性(n =27) 28.82 ±4.42 35.70 ±5.62 13.37 ±2.75阴性(n =53) 32.31 ±6.41 0.013 32.72 ±6.45 0.037 11.70 ±2.84 0.014部位上/中段(n =59)31.08 ±6.22 34.05 ±5.51 12.34 ±3.04下段(n =21) 31.28 ±5.55 0.890 32.83 ±8.24 0.451 12.05 ±2.5 5 0.700

3 讨论

食管癌是我国较常见的恶性肿瘤，河北省是食管癌的高发区，尤其是邯郸的磁县，食管癌的发病率及病死率较高，食管癌目前的常规治疗方法包括手术、放疗及化疗，对于食管癌晚期患者治疗效果均不佳，因此，食管癌的早期诊断、治疗及防治对于提高食管癌患者的生存期及生活质量具有重大意义。机体的免疫功能对肿瘤的发生起到主动的预防和抑制作用，当机体的免疫功能发生紊乱有可能促进了肿瘤的发生及发展［5，6］。

流式细胞术发展于20 世纪70 年代，能够快速对悬液中的单细胞或微粒进行定量分析和分选，由于其检测速度快、精度高、数据客观等优点，在生物医学中得到了广泛的应用［7］。流式细胞术检测人抗凝静脉血的淋巴细胞，也同样具有检测速度快、数据精确等优点，目前广泛应用于临床上患者免疫功能的检测。调节性T 细胞是一类具有免疫抑制作用的T细胞，其不仅能抑制自身免疫性疾病的发生，还可能参与肿瘤免疫的调节，导致肿瘤免疫耐受。本课题利用流式细胞术检测了食管癌患者外周静脉血CD4+、CD8+及表达水平，从而评价患者免疫功能［7］，探讨免疫功能与食管癌发生及发展的关系，为临床上食管癌化疗过程中免疫制剂的使用提供实验基础。

本试验中检测到食管鳞癌患者CD4+T 淋巴细胞与正常人相比显著降低，而CD8+及表达水平显著增高，提示食管鳞癌患者免疫功能低下，可能免疫功能紊乱在食管癌发生过程中起一定作用。同时分析了食管癌患者不同临床参数与CD4+、CD8+及T 表达关系，发现，有淋巴结转移者与无淋巴结转移者相比，外周血CD4+T 淋巴细胞显著降低，而CD8+及表达水平显著增高，而与浸润深度及细胞分化程度等无关。食管鳞癌患者免疫功能低下可能进一步促进远处转移。

综合以上的研究显示，机体的免疫功能可能与食管鳞癌发生、发展有一定的关系，调节机体的免疫力有利用临床上食管鳞癌的治疗。

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5 Reginato E，Wolf P，Hamblin MR.Immune response after photodynamic therapy increases anti-cancer and anti-bacterial effects.World J Immunol，2014，4:1-11.

6 Halvorsen EC，Mahmoud SM，Bennewith KL.Emerging roles of regulatory T cells in tumour progression and metastasis.Cancer Metastasis Rev，2014，33:1025-1041.

7 刘亮.流式细胞术在肿瘤免疫学中的应用.药品评价，2012，9:46-48.