益精调气中药复方制剂抑制左旋多巴神经毒性作用实验研究

朱红红

(镇江市第一人民医院 药剂科，江苏 镇江 212001)



益精调气中药复方制剂抑制左旋多巴神经毒性作用实验研究

朱红红

(镇江市第一人民医院 药剂科，江苏 镇江 212001)

目的：探讨益精调气中药复方制剂在抑制左旋多巴神经毒性中的作用。方法：将40只大鼠随机分为对照组和实验组各20只，对照组大鼠采用常规方法治疗，实验组大鼠采用益精调气中药复方治疗，采用细胞凋亡、行为学、Niss染色以及免疫组织化学方法检测治疗10天、12天、14天时大鼠黑质细胞凋亡数、旋转行为及bFGF蛋白水平。结果：实验组大鼠12天与14天灌胃时间旋转行为均显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；实验完毕后将大鼠处死，大鼠14天时黑质细胞凋亡数、bFGF蛋白表达显著多于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：益精调气中药复方制剂治疗帕金森大鼠效果理想，能够减轻左旋多巴神经毒性作用。

帕金森；左旋多巴神经毒性；益精调气；中药；复方制剂

帕金森是临床常见疾病，发病率较高，随着人们生活节奏的加快其发病率呈上升趋势。目前临床上对于帕金森尚缺乏理想的治疗方法，常规治疗方法虽然能够改善患者症状，缓解患者病情，但部分患者用药后容易产生神经毒性，影响预后[1]。近年来，益精调气中药复方制剂在帕金森疾病中广泛使用，并取得了阶段性进展。但是，临床上对于益精调气中药复方制剂是否产生左旋多巴神经毒性尚不完全明确[2]。本研究旨在探讨益精调气中药复方制剂抑制大鼠左旋多巴神经毒性作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择健康Wistar雄性3月龄大鼠(华中科技大学同济医学院实验动物中心提供)，体重180～200g，采用强迫游泳测试对大鼠行为进行筛选，取合格大鼠，进行PD建模。将40只模型大鼠随机分为对照组和实验组，每组20只。

1.2 方法

入选大鼠采用改良的Thomas方法确立右侧黑质致密部，确定坐标为：前囟后4.8mm，中线右侧2.0mm，硬膜下7.5mm；中脑腹侧被盖区域坐标为前囟后4.4mm，中线右侧1.2mm，硬膜下7.5mm，在两坐标点交叉位置注射0.3% 的6-OHDA 3.3μL。大鼠腹腔注射去水吗啡，诱发大鼠发生旋转行为，建立PD模型。对照组大鼠采用常规方法治疗：大鼠造模成功后每天采用GBE混悬液进行灌胃。实验组根据大鼠情况每天给予生理盐水以及益精调气中药复方制剂进行灌胃治疗[3]。

1.3 观察指标

①在大鼠连续灌胃第10、12、14天对大鼠行为进行观察，灌胃14天后在大鼠腹腔注射0.5mg/kg APO，连续观察2h，并采用4%多聚甲醛灌注液透心灌注，取出大鼠中脑，并采用石蜡包裹；②细胞凋亡检测。切口石蜡组织，厚度控制在5pm，根据Seaton法对凋亡细胞进行检测；③黑质细胞Nissl染色。将石蜡包块切片，厚度控制在5μm，然后采用浓度为5%的天竹牡丹水溶液进行1～2min染色，然后进行洗涤，采用95%酒精分色约2min，并采用显微镜观察。④碱性成纤维生长因子：采用免疫组化法检测大鼠碱性成纤维生长因子[4]。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组大鼠灌胃时间旋转行为比较

两组大鼠治疗10天时灌胃时间旋转行为比较差异无统计学意义(P>0.05)；实验组治疗12天、14天灌胃时间旋转行为均显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

表1 两组大鼠不同灌胃时间旋转行为结果比较 ±s，r/30min)

2.2 两组大鼠灌胃14天时黑质细胞凋亡数、bFGF蛋白表达比较

大鼠14天时天黑质细胞凋亡数为(379±26)个/mm2，bFGF蛋白表达为(0.75±0.17)%，两项数据均优于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 两组大鼠灌胃14天时黑质细胞凋亡数、bFGF蛋白

表达比较

组别大鼠数(只)黑质细胞凋亡数(个/mm2)bFGF蛋白表达(%)实验组20379±260.75±0.17对照组20368±300.11±0.01t26.0419.77P<0.05<0.05

3 讨论

帕金森患者黑质纹状体细胞很容易受到攻击，造成PC12细胞凋亡和坏死，这个过程中细胞核中线粒体双链DNA是自由基攻击的主要对象。在治疗大鼠帕金森疾病时给予益精调气中药复方制剂胃灌注，药物能够有效清除自由基，拮抗血小板活化因子，同时，能够通过血小板活化因子的膜效应影响DA能系统功能，能够有效抑制DA代谢作用[5]。

实验中，将大鼠旋转数作为反映黑质DA能神经元受损程度的重要指标，结果显示实验组治疗12天后黑质细胞凋亡数显著多于对照组，表明益精调气中药复方制剂对PD大鼠具有神经保护作用，有助于抑制帕金森大鼠左旋多巴治疗时的神经毒性。本研究中实验组12天、14天灌胃时间旋转行为显著高于对照组，结果也与相关学者研究成果类似。bFGF蛋白对机体神经功能具有一定的保护作用，该蛋白能够在多种原因下表达[6]。本次研究中，实验完毕后将大鼠处死，14天时大鼠黑质细胞凋亡数、bFGF蛋白表达显著多于对照组，也表明益精调气中药复方能够诱导bFGF蛋白表达，说明益精调气中药复方制剂能够抑制神经毒性作用。

综上所述，益精调气中药复方制剂治疗帕金森大鼠效果理想，能够减轻左旋多巴神经毒性作用，可作为帕金森病的治疗药物。

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(责任编辑：宋勇刚)

2015-04-22

朱红红(1978-)，女，江苏省镇江市第一人民医院主管药师,研究方向为医院药学。

R285.5

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1673-2197(2015)17-0013-02

10.11954/ytctyy.201517007