自体CIK细胞联合化疗二线治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察

王金烁　谢泽新　李慧杰　关丽云　董佳

自体CIK细胞联合化疗二线治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察

王金烁谢泽新李慧杰关丽云董佳

【摘要】目的观察自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合培美曲塞二线治疗晚期非小细胞肺癌的疗效。方法回顾性分析经病理学确诊的晚期非小细胞肺癌患者71例，一线化疗后复发或进展。随机分为2组，治疗组35例，采用CIK细胞联合培美曲塞单药化疗。患者每1个化疗周期结束后序贯1个周期的自体CIK细胞回输为1个疗程治疗，连续2个疗程;对照组36例，采用单药培美曲塞化疗，疗程为2周期。治疗结束后对2组的近期疗效、免疫功能、不良反应进行评价。结果治疗组客观缓解率(ORR)为48.57%，对照组为41.67%，差异无统计学意义(P＞0.05) ;治疗组疾病控制率(DCR)为85.71%，对照组为63.89%，差异有统计学意义(P＜0.05)。治疗组T细胞亚群CD3+、CD4+、CD(56)升高，CD4+/CD8+比值上升，差异有统计学意义(P＜0.05) ; CD8+治疗前后变化不大(P＞0.05)。在不良反应方面，治疗组白细胞减少、血红蛋白减少和胃肠反应发生率明显低于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论自体CIK细胞回输安全，副作用小，与培美曲塞联合二线治疗晚期非小细胞肺癌可以提高近期疗效，减轻化疗不良反应，提高患者免疫功能，值得临床推广。

【关键词】自体CIK细胞;培美曲塞;肺癌，非小细胞

作者单位: 050011河北省石家庄市第三医院肿瘤科(王金烁、关丽云)，心胸外科(谢泽新)，检验科(董佳) ;河北省石家庄市第一医院肿瘤二科(李慧杰)

E-mail: lihuijie302@ sina.com

肺癌是世界范围内发病率最高的肿瘤，是导致患者死亡的重要原因，其中非小细胞肺癌占80%以上，是临床常见的恶性肿瘤，由于起病隐匿，多数患者就诊时已为晚期，化疗在提高晚期非小细胞肺癌(NSCLC)生活质量、延长生存期方面起着重要作用。然而肺癌一线化疗总缓解率不高，许多患者在化疗过程中或化疗后出现疾病进展，需要进行二线治疗。培美曲塞(pemetrexed，PEM)是一种新型多靶点抗叶酸药物，具有高效低毒特点［1］。2004年8月被美国FDA批准治疗局部晚期或转移性NSCLC二线药物［2］。但化疗同时会影响机体的免疫功能，导致许多患者因不能耐受化疗不良反应而中断化疗。随着分子生物学和肿瘤免疫学的不断发展，以免疫治疗为基础的生物治疗模式越来越受到人们重视。细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是在多种细胞因子的诱导下生产的异质性细胞群，不仅对肿瘤细胞具有直接杀伤作用，还可调节机体免疫功能，是过继免疫治疗中的效应细胞，近年来已尝试应用于实体瘤的治疗中［3］。石家庄市第三医院肿瘤科收集2011年6月至2014年6月晚期非小细胞肺癌71例，进行临床疗效观察，报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料以2011年6月至2014年6月在石家庄市第三医院就诊的晚期非小细胞肺癌71例为研究对象，其中男45例，女26例;年龄46～71岁，平均年龄(59.8±1.3)岁;ⅢB期18例，Ⅳ期53例。按入院顺序随即分为治疗组(n=35)和对照组(n=36)。治疗组中，男25例，女10例;腺癌23例，大细胞癌9例，其他3 例;平均年龄(59.6±2.8)岁。对照组中，男26例，女10 例;腺癌22例，大细胞癌10例，其他4例;平均年龄(60.1±3.1)岁。2组患者在年龄、性别比以及疾病种类等比较均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。所有病例均经病理或细胞学证实，并按新的肺癌国际分期法TNM分期:Ⅲ～Ⅳ期，一线化疗后复发或进展，根据RESIST标准，至少有一个可测量病灶，化疗前Karnofsky评分≥60分，预计生存期＞3个月，化疗前血常规、心电图、肝肾功能、心肌酶、血凝四项无明显异常，血常规中单核细胞+淋巴细胞≥2.0×109/L，无严重病毒、细菌感染，对生物制品无过敏反应者，符合人体试验伦理委员会制定的伦理学标准，均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1对照组:所有患者均接受培美曲塞单药化疗，培美曲塞500 mg/m2第1天加入0.9%氯化钠100 ml中静脉滴注10 min以上。培美曲塞使用前1周开始口服叶酸400 μg，直到培美曲塞治疗结束后3周;培美曲塞使用前1周开始肌内注射维生素B12 1 000 μg，此后每3个周期肌内注射1次，至化疗结束;在培美曲塞使用前1 d，使用当天及使用后1 d，口服地塞米松4 mg，2次/d。同时给予格拉司琼等药物止吐治疗。每21天为1个周期，连用2周期后评价疗效。

1.2.2治疗组:在接受培美曲塞单药化疗的基础上，加用静脉回输自体CIK细胞治疗。于化疗前2 d采用血细胞单采仪收集外周血单个核细胞，第3天应用培美曲塞单药化疗，化疗方法同前。经初步得到的外周血细胞经实验室离心、洗涤、纯化后置于CO2孵育箱中，在体外进行扩增培养14 d。当CIK细胞总数达到4×109/L个以上、培养基经细菌、霉菌培养为阴性后开始收集。采用0.9%氯化钠溶液洗涤，加入5%人血白蛋白、IL-2等，最后加0.9%氯化钠溶液配制成100 ml混悬液，约含CIK细胞数为(1～2)×109/L。患者于第1个化疗周期结束后的第24小时开始静脉回输自体CIK细胞，每次200 ml，1次/d，连续2 d为1个治疗周期。第1个化疗周期结束待血常规恢复正常后，于第2个化疗周期前2 d，再次采集外周血单个核细胞进行培养，培养14 d，于第2周期化疗结束后第24小时再次回输，方法同前。1个化疗周期序贯1个周期的细胞过继免疫治疗为1个疗程。自体CIK细胞输注时需由医护人员严密监护，输注前30 min给予肌内注射苯海拉明20 mg以预防过敏反应，输注过程中嘱护士每隔10 min轻轻挤压转输袋底部，使沉淀细胞重新悬浮。如治疗期间出现不可耐受的不良反应及时终止治疗［4］。治疗2个疗程后评价疗效。

1.3观察指标

1.3.1肿瘤客观疗效评价:所有患者均接受2个周期治疗后进行疗效评价。根据美国国家癌症研究所实体瘤疗效评价标准(NCI-RECIST)对所有靶病灶和非靶病灶进行疗效评价［5］，完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、疾病稳定(SD)、疾病进展(PD)。客观缓解率(objective response rate，ORR)为(CR+PR)/总例数× 100%，疾病控制率(disease control rate，DCR)为(CR+PR+SD)/总例数×100%。

1.3.2T细胞亚群检测:所有患者于治疗前和治疗2周期后均抽取外周血，应用流式细胞仪检测T细胞亚群CD+3、CD+4、CD+8、CD56、CD+4/CD+8，化疗期间每周监测血常规及肝功能1次。

1.3.3不良反应分析:按照WHO标准进行评价，分为0～Ⅳ度［6］。研究主要关注的不良事件为骨髓抑制及胃肠道反应。

1.4统计学分析应用SPSS 17.0统计软件，计量资料满足正态性要求，以珋x±s表示，采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1近期疗效71例晚期非小细胞肺癌患者均可评价疗效，经评价无患者获得CR，治疗组PR 17例，SD 13例，PD 5例，客观缓解率(ORR)为48.57%，疾病控制率(DCR)为85.71%;对照组PR 15例，SD 8例，PD 13例，ORR为41.67%，DCR为63.89%。2组ORR比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，DCR差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1　2组患者近期疗效比较　例(%)

2.2T淋巴细胞亚群变化2组间比较，治疗前各项指标无明显异常(P＞0.05) ;治疗组治疗后较治疗前CD3+、CD4+、CD56升高，CD4+/CD8+比值上升，差异有统计学意义(P＜0.05)，且与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，CD8+治疗前后变化不大(P＞0.05) ;对照组治疗前后比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表2　2组治疗前后对T细胞亚群表达的影响　±s

表2　2组治疗前后对T细胞亚群表达的影响　±s

注:与治疗前比较，*P＜0.05;与治疗组比较，#P＜0.05

项目　治疗组(n=35)治疗前　治疗后对照组(n=36)治疗前　治疗后CD3+　55±5　58±5*　56±5　55±5#CD4+　31±6　35±6*　30±6　30±6#CD8+　29±5　29±5　30±5　28±5#CD4+/CD8+　1.27±0.35　1.49±0.54*　1.18±0.26 1.21±0.34#CD56　18±4　21±5*　20±5　18±4#

2.32组不良反应发生率比较治疗组白细胞减少、血红蛋白减少和胃肠反应发生率分别为51.43%、45.71%、37.14%;对照组白细胞减少、血红蛋白减少和胃肠反应发生率分别为75.00%、69.44%、61.11%，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

表3　2组不良反应率比较　例

3　讨论

复发性晚期非小细胞肺癌患者的治疗主要采用以全身化疗为主的综合治疗，针对一线不成功的患者，采用二线治疗有利于缓解患者病情［7］。但患者本身肿瘤负荷较重，免疫功能低下，不能继续耐受手术及放化疗，然而病情持续进展，新的治疗手段尤为重要。培美曲塞(pemetrexed，PEM)是一种新型多靶点抗叶酸药物，通过抑制胸苷酸合成酶、二氢叶酸还原酶、甘氨酰胺核苷甲酰基转移酶的活性，减少嘌呤及胸腺嘧啶核苷酸生物合成，影响肿瘤细胞DNA和RNA合成，从而发挥抗肿瘤作用［8］。培美曲塞在治疗腺癌和大细胞癌方面的总生存期优于鳞癌。恶性肿瘤患者机体免疫功能低下已经成为共识，当宿主免疫功能低下或者受抑制时，肿瘤的发病率增高。当肿瘤进行性生长时，患者免疫功能进一步受到抑制［9］。生物治疗是继手术、放疗、化疗后的第四种治疗模式［10］。肿瘤生物免疫治疗是指从自体外周血中分离的单个核细胞经过体外激活和扩增后输入患者体内，调节和增强机体免疫功能的一种最新肿瘤治疗技术，能较彻底清除肿瘤细胞。

CIK是一种新型免疫活性细胞。将人外周血单个核细胞在体外经多种细胞因子共同刺激后获得的一群异质细胞，具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK样的非MHc限制性杀瘤作用。CIK细胞具有增值速度快、杀瘤活性高、抗凋亡特性及杀瘤效应不受癌细胞多重耐药的影响等多种独特优势［11］。在肿瘤综合治疗中，自体CIK细胞治疗占有越来越重要的地位。

肺癌的发生与基因的改变及免疫功能下降有密切关系，因此晚期非小细胞肺癌患者，机体免疫功能下降，免疫监视能力降低，容易发生免疫逃逸现象。生物治疗抗肿瘤的主要免疫抑制是激活免疫细胞如NK细胞、T淋巴细胞等完成的。其中T淋巴细胞是机体细胞免疫主要参与者，是免疫应答的核心细胞，主要有两个亚群，即辅助性T细胞(Th) CD4+和抑制性T细胞(Ts) CD8+。机体的免疫平衡系统主要是由这两类细胞相互影响来维持。CD4+/CD8+为免疫调节的一项指标，其比值的降低是疾病严重程度及预后不良反应的重要指标。CD4+/CD8+比值及NK细胞低于正常时则被认为免疫调节功能紊乱，容易发生恶性肿瘤，只有在CD4+/CD8+比值及NK细胞正常时，才能够发挥正常的抗肿瘤作用。

CIK细胞杀伤靶细胞原理: CIK细胞能以不同的机制识别肿瘤细胞，通过直接的细胞质颗粒穿透封闭的肿瘤细胞膜进步胞吐，实现对肿瘤细胞的裂解;通过诱导肿瘤细胞凋亡杀伤肿瘤细胞;分泌IL-2、IL-6、IFN-γ等多种抗肿瘤的细胞因子; CIK细胞回输后可激活机体免疫系统，提高机体的免疫功能。CIK细胞治疗肿瘤比较简单，从患者的外周血中抽取部分免疫细胞于体外进行扩增和诱导，培养一定时间后，患者自身免疫细胞的数量和抗瘤活性都大大提高，再将这些激活的具有强大抗肿瘤作用的免疫细胞回输至患者体内，从而降低了肿瘤复发和转移的机率，改善了患者的生活质量，延长了患者的生存期。本研究采用CIK细胞联合培美曲塞二线治疗晚期非鳞非小细胞肺癌，治疗组近期客观缓解率(ORR)为48.57%，疾病控制率(DCR)为85.71%;对照组0RR为41.67%，DCR为63.89%。2组客观缓解率比较差异无统计学意义(P ＞0.05)，疾病控制率比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。说明CIK细胞联合化疗可以提高肿瘤治疗的效果。在T细胞亚群的观察方面，治疗组治疗后较治疗前CD+3、CD+4、CD56升高，CD+4/CD+8比值上升，差异有统计学意义(P＜0.05) ; CD+8治疗前后变化不大(P＞0.05)。说明CIK联合化疗能显著改善患者的免疫功能状态，提高患者的免疫力。在不良反应反面，CIK细胞治疗可以降低骨髓抑制和恶心、呕吐的发生率，减少因化疗不良反应所产生的痛苦，明显提高患者的生活质量。此外，该研究显示，自体CIK细胞在治疗过程中主要不良反应为畏寒、发热，仅少数患者可出现乏力、肌肉酸痛、头痛等类似感冒样症状，均可自行缓解或对症治疗后恢复正常，患者耐受性好，具有较高的安全性。

通过本研究结果显示，对于晚期NSCLC患者，自体CIK细胞过继免疫治疗可以缓解和稳定瘤灶，控制瘤体发展，改善患者生活质量，提高患者免疫功能，取得良好的临床疗效，增加患者化疗的依从性，延长患者生存期，值得在临床上推广使用。

参考文献

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(收稿日期:2014－11－12)

通讯作者:李慧杰，050011河北省石家庄市第一医院肿瘤二科;

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.10.010

【文章编号】1002－7386(2015) 10－1477－03

【文献标识码】A

【中图分类号】R 734.2