消痤凝胶中丹酚酸B离体大鼠透皮率测定

马永功，杨全伟，肖 柳

1.长治市潞安矿业集团总医院（山西长治046204）

2.武汉市第一医院（湖北武汉430022）

3.武汉市中医医院（湖北武汉430014）

消痤凝胶中丹酚酸B离体大鼠透皮率测定

马永功1，杨全伟2∗，肖 柳3

1.长治市潞安矿业集团总医院（山西长治046204）

2.武汉市第一医院（湖北武汉430022）

3.武汉市中医医院（湖北武汉430014）

目的测定消痤凝胶中丹酚酸B离体大鼠透皮率。方法 以改良的Franz扩散池，以离体的大鼠皮肤为屏障，以HPLC测定消痤凝胶中不同时间丹酚酸B的透皮累计量。结果通过HPLC测得消痤凝胶中丹酚酸B 24 h的离体透皮率为29.89%。结论消痤凝胶具有良好的透皮性能。

凝胶；丹酚酸B；离体透皮率

近年来，由于生活节奏加快，工作压力大等原因，女性青春期后痤疮发病率逐渐升高，且病程长、皮疹反复，给患者身心健康带来严重影响。西医认为主要与雄激素、皮脂分泌增多、毛囊口上皮过度角化、隐球病菌、痤疮丙酸杆菌及遗传因素等有关［1－2］。治疗多为口服或外用抗生素、维A酸等药物治疗，中医传统治疗一般多从肺，脾，胃的湿热痰瘀论治。无论中医还是西医对患者心理、情绪变化、饮食、睡眠等会影响痤疮发病病理生理过程因素的干预指导不足，导致临床不尽人意，故而成为痤疮治疗的一个新难点［3］。随着医学模式向生物－心理－社会综合医学模式的转变，心理因素致病越来越受到重视，有研究表明，青春期痤疮患者焦虑和抑郁程度与发病率均高于正常健康人，采用中药疏肝疗法治疗女性青春期后痤疮有明显的疗效［4］。

消痤凝胶为纯中药外用制剂，该方由丹参、当归、黄芩等八味中药组成。主要功效为疏肝理气，凉血活血。为了测定消痤凝胶的透皮率，本试验以处方中主药丹参中有效成分丹酚酸B的含量为考察指标，来研究消痤凝胶的透皮性能。

1 材料

France扩散池（天津药典标准仪器厂）；Wa⁃tere2695高效液相色谱仪（美国）；电热恒温水浴锅（北京医疗设备厂）；旋转搅拌器（江苏省江阴科研器械厂）。丹酚酸B对照品（批号：110715－201016，购于中国食品药品检定研究院）；甲醇（色谱纯，美国Fisher公司）；其余试剂均为分析纯，水为双蒸水；SPF级雄性大鼠，购于湖北省实验动物中心，实验动物合格证号：No.42000600002570。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：HypersilBDSC18（200mm× 4.6mm，5μm），流动相：乙腈－甲醇－水－甲酸（7∶25∶67∶1），流速：1.0mL·min－1，波长：286 nm，柱温：30℃。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取丹酚酸B13.94mg，置于50mL容量瓶中，加75%甲醇，制成每1mL含0.2788mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取消痤凝胶1.0 g，精密称定，加50%甲醇50mL，称重，超声溶解40min，放冷，再次称重，用50%甲醇补足重量，过滤，取续滤液，得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺丹参药材的消痤凝胶0.5 g，精密称定，按供试品溶液制法制备，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性 分别吸取丹酚酸B对照品溶液、供试品溶液，丹参空白溶液各20μL按上述色谱条件进样检测，可见丹酚酸B对照品、供试品在18min左右出现丹酚酸B特征吸收峰，丹参空白对照无干扰，结果见图A－C。

图A 丹酚酸B对照品1

图B 供试品

图C 阴性

2.3.2 线性关系 精密吸取上述对照品溶液，分别在上述色谱条件下精密取2、3、4、5、10mL、母液分别至20mL量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，分别进样20μL，测定峰面积，以峰面积、对照品浓度计算线性回归方程：Y＝1424X－14953，r＝0.9996；表明丹酚酸B在24.84～290.48μg／mL范围内线性关系良好。

2.3.3 精密度 取同一标准品溶液。连续进样6次，每次20μL。6次测定结果表明丹酚酸B峰面积RSD为1.03%，表明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性 精密吸取同一供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，24h测定丹酚酸B峰面积。其RSD为1.27%，表明样品溶液在24 h内稳定。

2.3.5 重复性 取消痤凝胶，精密称取6份，按照

2.2.2项下的方法制备和测定丹酚酸B的含量，计算RSD为1.58%，表明该方法重复性良好。

2.3.6 回收率实验 精密称取已知含量的同一批样品6份，分别加入适量的丹酚酸B对照品，按照供试品2.2.2项下的方法制备，测得平均回收率为100.58%（RSD＝1.94%），表明该方法稳定可行。

2.4 离体大鼠透皮率测定

2.4.1 离体大鼠透皮试验 取SPF大鼠，脱颈椎处死，用剪刀剪去鼠毛，取8%脱毛剂脱毛，剥离整个皮肤，洗净（备用）。取消痤凝胶，精密称定为1.005 g，作为透皮试验中凝胶样品，采用改良的Franz扩散池，将制备好的鼠皮固定于接受池上，将上述称重的消痤凝胶紧贴于皮肤外层，接受池内加满生理盐水，透皮试验装置于（37±1）℃水浴保温，同时开启磁力搅拌棒以200 r／min的速度搅拌，以皮肤进入接收液时开始计时，分别于3，6，9，12，24 h取出接受池中全部接受液，同时立即补加相同体积预温至（37±1）℃的新鲜生理盐水［5－7］。

2.4.2 透皮率供试品溶液的制备 将5次接受液分别水浴浓缩至干，残渣加50%甲醇溶液定溶于1 mL量瓶中，过微孔滤膜即得3，6，9，12，24 h的离体透皮吸收供试品。

2.4.3 离体透皮吸收液含量测定 将上述制得的不同时间所得供试品分别注入高效液相色谱仪，各进样20μL检测，计算溶液中丹酚酸B含量，结果见表2。

表2 消痤凝胶中丹酚酸B的离体透皮率结果

3 讨论

本组结果表明，随着时间延长，消痤凝胶中丹酚酸B的透皮吸收率逐渐增加，但单位时间内透皮量逐渐降低，在未加入透皮促进剂的情况下，丹酚酸B 24 h离体透皮率达29.89%，说明该凝胶剂具有良好的透皮率。

影响透皮吸收的因素很多［8－9］，如药物成分性质、基质性质、药物浓度、给药面积，不同年龄的动物的皮肤、不同动物的皮肤以及皮肤角质层贮库作用的影响，都对药物的透皮吸收有一定的影响。本实验未考虑到这些方面的影响，因此，今后这方面的因素值得进一步探究。

通过采用中药疏肝消痤方制备的凝胶剂贴敷于病灶部位，有效成分释放于皮肤角质层从而透过皮肤进入体内，通过中药有效成分来调节人体的神经、内分泌和免疫系统等多个靶点来改善患者焦虑、抑郁状态，从而发挥抗雄性激素活性，抗毛囊皮脂腺导管角化，抗痤疮棒状杆菌等作用，为青春期后痤疮治疗和心理干预提供了一个安全有效的方法。目前通过自制消痤凝胶联合异维A胶囊治疗肝郁型痤疮，缩短起效时间，提高治愈率，无不良反应发生，值得临床推广使用。

［1］ 易娟娟，刘俊，唐妍，等.痤疮患者血清IL－10水平的检测及其意义［J］.皮肤性病诊疗学杂志，2015，22（4）：296－298.

［2］ 余美英，王红莉，李虹，等.皮肤隐球菌病1例［J］.湖北民族学院学报：医学版，2011，28（1）：59.

［3］ 冯小兰，曾宪玉.从“郁乃痤”辩治痤疮［J］.新中医，2014，46（12）：240－241.

［4］ 方玉甫，王丽，徐俊涛，等.疏肝消痤方治疗女性青春期后痤疮疗效及对心理指标的影响［J］.中国中医基础医学杂志，2015，21（9）：1131－1135.

［5］ 吴和珍，付冲，杨艳芳，等.天杏咳喘贴中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的大鼠离体透皮试验［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19（18）：58－60.

［6］ 肖柳，杨全伟.祛风活络膏贴中川续断皂苷Ⅵ离体小鼠透皮率测定研究［J］.湖北中医杂志，2013，35（6）：25－26.

［7］ 韩建伟，张莉.复方元胡止痛膏贴中延胡索乙素离体小鼠透皮率初步测定［J］.中国药师，2010，13（1）：35－37.［8］ 梁秉文.中药经皮给药制剂技术［M］.北京：化学工业出版社，2006：36－38.

［9］ 盛国荣，谢勇.祛白酊透皮效果的实验研究［J］.西北药学杂志，2002，17（1）：21－22.

A Study on Xiao Cuo gel of Dan Phenolic Acid B in Vitro Transdermal Rate Determ ination

MA Yonggong1，YANG Quanwei2∗，XIAO Liu3
（1．General Hospital of Lu′an Mining Group，Changzhi046204，China；2．Wuhan No．1 Hospita，Wuhan 430022，China；3．Wuhan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430014，China）

ObjectiveTo determ ine the Xiaocuo gel of salvianolic acid B in vitro rat skin perm e⁃ation rate．MethodsM odified Franz w as used as diffusion cell and in vitro rat skin as barrier，and HPLC to determ ine antiacne gelat different tim e of salvianolic acid B transderm al cum ulant．Re⁃sultsThe HPLCm easured salvianolic acid B 24h in vitro skin penetration rate of 29．89%in Xiaoc⁃uo gel．ConclusionTransderm al Xiaocuo gel has good perform ance．

Gel；Dan phenolic acid B；transderm al rate in vitro

R944.9

A

1008－8164（2015）04－0064－03

2015－08－12责任编辑：牟冬生

马永功（1972－），男，山西长治人，药剂师，研究方向：中药开发；∗

杨全伟（1986－），男，硕士，药师，研究方向：医院制剂开发。