蛇竭颗粒对神经根型颈椎病大鼠模型血清一氧化氮、血浆内皮素的影响

李劲松，周兴明，谭宗和，陈龙全

1.宣恩县民族医院（湖北宣恩445500）

2.湖北民族学院中医药学院（湖北恩施445000）

蛇竭颗粒对神经根型颈椎病大鼠模型血清一氧化氮、血浆内皮素的影响

李劲松1，周兴明1，谭宗和1，陈龙全2

1.宣恩县民族医院（湖北宣恩445500）

2.湖北民族学院中医药学院（湖北恩施445000）

目的研究蛇竭颗粒对神经根型颈椎病大鼠模型血清一氧化氮（NO）、血浆内皮素（ET）含量的影响。方法采用颈椎插线法建立大鼠神经根型颈椎病模型，将50只正常Wistar大鼠，随机分为模型组、假手术组、颈复康颗粒对照组、蛇竭颗粒高剂量组和蛇竭颗粒低剂量组，测定各组NO、ET的含量。结果治疗28 d后，蛇竭颗粒高、低剂量组及颈复康对照组血清NO含量显著升高，血浆内皮素含量明显下降，与治疗前比较有显著性意义（P＜0.05）。治疗后蛇竭颗粒高、低剂量组及颈复康对照组血清NO含量与模型组比较有显著差异（P＜0.01）；蛇竭颗粒高、低剂量组及颈复康对照组的血浆ET含量治疗后明显低于模型组（P＜0.01），蛇竭颗粒高剂量组血浆ET含量的明显高于颈复康对照组（P＜0.05）。结论蛇竭颗粒可影响内皮细胞活性因子NO、ET水平及含量的变化，对颈椎病有积极治疗作用。

蛇竭颗粒；神经根型颈椎病；血清一氧化氮；血浆内皮素

神经根型颈椎病是指以颈椎间盘退变为主要病变基础，包括颈周围肌肉、关节继发性改变和相邻椎体退变增生而刺激或压迫脊神经根的颈椎病，通常表现为颈及一侧上肢疼痛，同时伴有该脊神经根支配区域感觉缺失、运动功能缺损和反射改变而发生的一种综合症候群［1］。临床症状以颈、肩、臂、手的疼痛、麻木为主要表现，该病往往因受寒、劳累、损伤而发病。蛇竭颗粒是我院的自制制剂，具有活血化瘀、祛风除湿、消肿止痛的功用，尤其在颈椎病神经根型患肢麻木疼痛的治疗方面，有显著的作用。前期药效实验表明，该药具有显著的抗炎、镇痛和改善血液循环作用。本研究在前期研究的基础上，观察蛇竭颗粒对神经根型颈椎病大鼠模型血清一氧化氮（NO）、血浆内皮素（ET）的影响，进一步探讨该药对神经根型颈椎病的疗效乃至周围神经退形性变的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 雄性Wistar大鼠，体质量（200±10）g（湖北民族学院医学实验中心提供）50只。

1.1.2 试剂和仪器 NO（硝酸还原酶法）试剂盒（南京聚力生物医学工程研究所生产），ET（放射免疫法）试剂盒（北京东亚放射免疫研究所生产），高速冷冻离心机（北京时代北利离心机有限公司），Ecom－F6124半自动生化分析仪（德国）。

1.1.3 药物 蛇蝎颗粒药物组成（白花蛇、血竭、凤仙花、土鳖虫、威灵仙、当归、防风、葛根），本院制剂室制备，实验时用蒸馏水加热溶化蛇蝎颗粒成液态，含生药量1.0 g／mL，颈复康颗粒，承德颈复康药业集团有限公司生产。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 参照文献［2］方法：10%水合氯醛以0.35mL／100 g剂量麻醉大鼠，俯卧位固定，常规消毒后，手触下颈部附近最高棘突（T2），以第2胸椎棘突为标记，以颈7为中心，沿棘突纵行切开皮肤及皮下组织、颈后部肌群，直至C6～T2椎弓充分暴露，用尖刀锐性分离棘突两侧的肌肉，暴露棘突及两侧椎板，用眼科剪刀剪断颈6、7两侧横突以上椎板，暴露出椎管内的脊髓，用神经剥离子将脊髓推向右侧，显露出左侧颈6、7神经根，将约1.5 cm长，直径0.5mm的尼龙渔线轻轻沿脊髓纵轴放至C6－T1神经根腋下（渔线经过酒精浸泡，无菌干燥后再浸泡至0.1%的多聚赖氨酸溶液中，以增加其组织黏附性）。导致颈神经根的炎症，从而造成人鼠的神经根型颈椎病模型。逐层关闭、缝合。术后常规给手术动物注射庆大霉素防止伤口感染，连续3 d。假手术组动物仅分离C6～T2锥体，钳开C7椎板，暴露脊髓，但不做插线。

1.2.2 分组与给药 造模后大鼠为5组，分别为模型组、假手术组、蛇竭颗粒高低2个剂量组、颈复康阳性对照组。用药剂量按动物体表面积折算的等效剂量比值表，计算出大鼠用药的等效量，手术后正常饮食喂养1周，从第2周开始，每日各给药组分别灌胃给予相应剂量的药物水溶液，模型组和假手术组给予等体积生理盐水；蛇竭颗粒高、低剂量组分别每天给予6.0 g、3.0g／（kg·d）灌胃，颈复康颗粒组6.0 g／（kg·d）灌胃；每天1次，连续灌胃共4周。

1.2.3 血清NO、血浆ET含量测定 各组分别在造模后7d和治疗后28d，用2%戊巴比妥钠麻醉，取大鼠股动静脉血4mL（2mL抗凝，2mL不抗凝），严格按照NO、ET试剂盒说明操作。检测血液中NO、ET含量的变化。血清NO加10%的EDTA二钠溶液20 μL，混匀30min后，4℃离心5min，离心力为3000 r／min，提取上层清液于－20℃冰箱保存。血浆ET加40μL抑肽酶和30μL 7.5%的EDTA二钠溶液，混匀30min后，4℃离心10min，离心力为3000 r／min，提取上层血浆0.5mL，于－20℃冰箱保存。

1.3 统计学处理 实验数据分析用SPSS 17.0 for⁃windows统计软件，以均数±标准差（±s）表示，各组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有显著意义。

2 结果

治疗前假手术组血清NO含量、血浆ET含量与模型组比较有显著性意义（P＜0.05），表明造模后血清NO的含量下降，血浆ET含量升高，而蛇竭颗粒高、低剂量组，颈复康对照组及模型组之间无显著性差异（P＞0.05）。治疗28 d后，蛇竭颗粒高、低剂量组及颈复康对照组血清NO含量显著升高，血浆内皮素含量明显下降（P＜0.05）。治疗后蛇竭颗粒高、低剂量组及颈复康对照组血清NO含量与模型组比较有显著差异（P＜0.01），与假手术组比较无显著差异（P＞0.05）；蛇竭颗粒高剂量组NO含量与低剂量组比较无显著性意义（P＞0.05），与颈复康对照组比较则有显著性差异（P＜0.05）。蛇竭颗粒高、低剂量组及颈复康对照组的血浆ET含量治疗后明显低于模型组（P＜0.01），蛇竭颗粒高剂量组降低血浆ET含量的效果优于颈复康对照组（P＜0.05），而蛇竭颗粒低剂量组与颈复康对照组比较无显著性意义（P＞0.05）。见表1。

3 讨论

神经根型颈椎病中医辩证为“痹症”范畴，乃风寒湿热之邪侵袭肢体经络，气血闭阻运行不畅所致，感受风寒湿邪，痹阻经络，经脉失养，以致气血闭塞不通。蛇竭颗粒有活血化瘀、祛风除湿、消肿止痛的功效。我们前期的药效研究显示，蛇竭颗粒可提高小鼠热痛阈值；减少冰醋酸引起的扭体次数，对弗氏完全佐剂引起的大鼠足跖肿胀有较好的抑制作用，表现出镇痛、抗炎和改善血液循环的良好作用。研究表明NO和ET是一对重要的内源性细胞因子，参与颈椎病的生理和病理过程。具有扩张血管、增加灌流、抗血栓、抗炎、增加血液纤溶性及降低纤维蛋白原含量的作用［3］，它还能舒张血管平滑肌，抑制血小板粘附活化聚集，以及清除自由基等。NO作为一种新型的细胞效应分子，在介导和（或）调节心血管、神经、免疫和炎症等方面均发挥重要作用。ET是目前已知最强的内源性血管收缩物质，具有十分广泛的生物活性，具有调节体内有关活性物质的释放作用。ET还可以促进血管平滑肌细胞增殖和血栓形成，当颈椎病处于病理状态时，ET表达调控紊乱，导致ET的异常表达和释放，ET过量释放，作用于颈椎周围血管，可使局部血管发生强烈收缩、痉挛。血管紧张度取决于舒、缩血管物质间的平衡，NO与ET共同调节血管紧张性和内皮细胞连续性，可有效地舒张血管，增加血流量，一旦NO的生成与释放受抑制，两者之间的平衡被打破，内皮素将促使血管收缩、血流减少［4］。

表1 各组治疗前后血清NO和血浆ET的含量（±s，n＝10）

表1 各组治疗前后血清NO和血浆ET的含量（±s，n＝10）

注：与模型组比较∗P＜0．05，∗∗P＜0．01；与颈复康组比较△P＜0.05。

组别 NO（μmol／L）造模7 d后 治疗28 d血浆ET（pg／mL）造模7 d后 治疗28 d模型组 13.19±2.37 16.76±2.34 159.72±46.13 153.56±47.58假手术组 29.68±2.56∗ 34.35±2.87∗∗ 136.04±45.24 138.43±43.54∗颈复康组 13.56±2.31 28.27±1.74∗∗ 157.35±52.76 115.67±45.93∗∗蛇竭颗粒高剂量组（6.0g） 14.02±2.27 36.32±2.43∗∗△ 154.47±51.84 96.65±50.82∗∗△蛇竭颗粒低剂量组（3.0g） 13.74±2.15 29.68±2.17∗∗ 155.26±48.53 108.82±45.51∗∗

本研究发现神经根型颈椎病大鼠模型急性期血浆ET水平升高，NO含量降低，此时NO与ET处于紊乱状态，蛇竭颗粒治疗28 d后ET明显下降，而NO显著升高，表明该药治疗神经根型颈椎病的机制，可能是通过调控ET与NO的表达量，调节舒、缩血管因子间的平衡，从而减轻颈椎间盘组织边缘的血管增生、炎症细胞浸润、组织水肿及纤维素样渗出等慢性炎症反应，改善局部及全身血液循环，缓解神经根压迫所致的各种临床症状。确切的疗效机制尚需进一步深入探讨。

［1］ 盛锋，沈国权，孙武权.神经根型颈椎病疗效评价量表的研究［J］.中西医结合学报，2010，8（9）：824－826.

［2］ 窦夏睿，孙建宁，王威，等.急性期神经根型颈椎病模型的建立［J］.北京中医药大学学报，2006，29（5）：332－334.

［3］ 张蕾，阮君山，严令耕，等.内皮素和一氧化氮致血管损伤性疾病的分子机制及药物研发策略［J］.中国药理学通报，2012，28（2）：162－164.

［4］ 高冬，陈文元，吴立娅，等.血府逐瘀汤诱导内皮细胞血管新生中一氧化氮的作用［J］.中医杂志，2011，52（21）：1852－1855.

Effects of Shejie Granules on Serum Nitric Oxide and Plasma Endothelin in Rat M odel w ith Nerve Root Cervical Spondylosis

LIJinsong1，ZHOU Xingming1，TAN Zonghe1，CHEN Longquan2
（1．National Hospital of Xuanen，Xuanen 445500，China；
2．School ofChinese Medicine，Hubei University for Nationalities，Enshi 445000，China）

ObjectiveTo investigate the effects of Shejie granules on serum nitric oxide（NO）and plasm a endothelin（ET）in ratm odelw ith nerve root cervical spondylosis．MethodsThe rat m odelw ith nerve root cervical spondylosis w as established by intervertebralnylon suture inser⁃ting m ethod．The 50 cases of norm alW istar rats w ere random ly divided into m odelgroup，sham operation group，control group treated w ith Jingfukang granules and treatm ent group treated w ith high－dosed and low－dosed Shejie granules，respectively．The NO and ET levels in each group w ere observed．ResultsAfter treatm ent，the NO and ET levels in both treatm ent and con⁃trol group w ere im proved m ore significantly than those in both m odeland sham operation group（P＜0．05）．In addition，the effect in treatm ent group treated w ith high－dosed Shejie granules w as better than that in controlgroup treated w ith Jingfukang granules（P＜0．05）．ConclusionThe Shejie granules can influence the levels and contents of active factors of NO and ET in endothe⁃lial cell and have positive therapeutic effect on cervical spondylosis．

Shejie granules；nerve root cervical spondylosis；serum nitric oxide

R274

A

1008－8164（2015）04－0005－03

2015－06－15 责任编辑：牟冬生

湖北省卫生厅中医药研究项目（2013ZY24）。

李劲松（1965－），男，湖北宣恩人，主任医师，研究方向：民族医药临床应用。