禽霍乱的综合性诊断

李静

(临沂市兰山区畜牧兽医局 山东 临沂276000)

诊断目前解决禽霍乱耐药问题的方法主要有：通过药敏试验选出敏感药物，制定合适的剂量、合理的疗程，选用几种敏感药物交替使用；采用中草药及其方剂、中西复方药进行防治。我市常见禽霍乱防治中的药物和疫苗的选用提供依据。不但可提高鸡的成活率，而且能减少兽药残留和耐药菌株的产生，大大提高我市鸡养殖的经济效益、生态效益和社会效益。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 仪器生化培养箱（型号:420型）、超静工作台（型号SW-CJ-ICU型）、高压灭菌器（型号：PXQGD2型）、显微镜、冰箱、离心机、常用玻璃器械、牛津杯、陶皿盖、镊子。

1.1.2 试验动物

1.1.2.1一周龄健康小白鼠12只(大小、体重相近,雌雄各半)。

1.1.2.230周龄健康蛋鸡20羽。

1.1.2.3来自临沂市不同地方的六起自然发病病例，通过发病情况调查、临床症状、病例变化、细菌学检查、生化试验、动物试验确诊病例为禽霍乱，共计罗曼蛋鸡10000羽，海兰蛋鸡7000羽。

1.1.3 试验用品

1.1.3.1培养基鲜血琼脂平板培养基、麦康凯琼脂平板培养基、肉汤培养基（由试验室提供材料按配方自制）。

1.1.3.2生化微量反应管

乳酸、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、尿素管等一系列反应生化微量反应管共11种（由试验室提供）。购于杭州天和微生物试剂有限公司。

1.1.3.3常规药敏试纸

恩诺沙星、环丙沙星、丁胺卡纳、强力霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、卡那霉素等一系列常规药敏试纸共12种(购于中国农科院兰州兽医研究所)

1.2.试验方法

1.2.1 病例来源临沂市郯城、费县、兰山、临沭、沂南5个县区的6起自然发病病例，根据发病先后分别记为：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ。

1.2.2 发病情况、临床症状、剖检变化

调查发病情况、现场察看临床症状、系统剖检病死鸡并观察病理变化。

1.2.3 细菌学检查

病料直接涂片染色镜检：采取典型病例心血、肝、脾组织病料涂片、触片，分别经革兰氏染色和瑞士染色、镜检，取上述病料分别接种于鲜血琼脂平板培养基、麦康凯琼脂平板培养基、肉汤培养基，置37℃温箱中培养24～48h，进行细菌分离培养，取分离菌进行生化试验。

病原菌分离培养：取上述病料分别接种于鲜血琼脂平板培养基、麦康凯琼脂平板培养基、肉汤培养基，置37℃温箱中培养24～48h，进行细菌分离培养。

1.2.4 生化试验

分离菌纯培养物分别接种于微量生化反应管，置37℃恒温培养24h，观察。

1.2.5 分离菌致病性试验

小白鼠致病试验：试验分三组，每组4只。

试验一组接种组织病料悬液：无菌操作取自发病鸡肝、脾组织加灭菌生理盐水，制成1∶10悬液，低速离心取上清液腹腔接种0.2ml/只。

试验二组接种培养物：取24h肉汤培养物0.2ml，或钩取鲜血琼脂上的菌落制成生理盐水悬液，取0.2ml，腹腔接种。

试验三组接种生理盐水：取0.2ml灭菌生理盐水腹腔接种，作为对照组。

1.2.6 动物回归试验

若上述试验第二组小白鼠死亡，则无菌操作取试验死亡小白鼠病料接种于肉汤培养基中，置于37℃温箱内培养18h，分别取肉汤培养物和灭菌生理盐水按0.1mL/只静脉注射30周龄健康鸡，试验组鸡10羽，对照组鸡10羽，观察结果。

1.2.7 药敏试验

1.2.7.1常规纸片法药敏试验：在超净工作台上，采用纸片扩散法。用吸管滴加纯培养菌液1滴（约0.02ml）于鲜血琼脂平板培养基上，涂均匀加盖后放置10min左右，平板面稍干后，用镊子将药敏纸片平放在鲜血琼脂平板培养基上，并轻压使其紧贴平板表面，两纸片中心距离不少于24mm，纸片与平皿边缘不少于15mm。贴好纸片的平板，置37℃培养24h，测量抑菌圈，依据药敏标准判定选出高敏药物。

1.2.7.2判定标准：抑菌圈在0～10mm为低敏，10～15mm为中敏，15mm以上为高敏。

2 试验结果

2.1 发病情况

根据发病先后分别记为病例Ⅰ～Ⅵ。各组的发病情况见表1。

表1 各组禽霍乱病例的发病情况

2.2 临床症状

部分病鸡没有任何临床症状表现就突然死亡，特别是白天未见异常表现，但于夜间死亡。大部分病鸡精神沉郁，食欲减退或绝食，饮水增加。垂头缩颈，两翅下垂，羽毛松乱，严重时呼吸困难，死前张口呼吸。

2.3 剖检变化

有的未见内脏病理变化，仅见嗉囊中积有较多的饲料或液体；多数病例可见：皮下、腹部脂肪有出血点；心包内有不透明黄色胶冻样渗出物；肠粘膜和肠浆膜有出血点，尤其是十二指肠最明显；肺瘀血和出血；肾脾充血、肿大；肝肿大、质地变脆、呈黄色、表面布满多量的针尖或粟粒大小的黄白色或灰白色坏死灶，纵面切开，坏死灶内大外小，成扫把状；产蛋鸡卵黄膜呈紫红色，血管怒张，有的卵黄破裂形成卵黄性腹膜炎，有的子宫中有一成熟的软壳蛋或在泄殖腔中有一硬壳蛋。

2.4 细菌学检查

2.4.1 涂片镜检

瑞士染色可见典型的两级着色，即菌体两端染色深，中间浅，无鞭毛，不形成芽孢，新分离的强毒菌株有荚膜；革兰氏染色为阴性。

2.4.2 细菌分离培养

在鲜血琼脂上可见到2～3mm大小的光滑、隆起、灰白色、半透明、露珠样不溶血的小菌落；在麦康凯培养基上未见到细菌生长；在肉汤培养基中出现轻度混浊、管底有沉淀、表面有灰白色菌环。

2.4.3 生化试验

分离菌不液化明胶；能分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇和半乳糖，产酸不产气；不发酵乳糖、肌醇和鼠李糖等；触酶、硫化氢、M－R（甲基红试验）、V－P试验均为阴性。

2.4.4 分离菌毒力试验

试验组一：小白鼠几天后全部死亡，剖检死亡鼠, 肝脏表面有许多针尖大小的坏死灶，心冠脂肪、心外膜、十二指肠等有很多出血点。试验组二：小白鼠几天后全部死亡，剖检死亡鼠,肝脏表面有许多针尖大小的坏死灶，心冠脂肪、心外膜、十二指肠等有很多出血点。试验组三：小白鼠全部正常。从病死鼠体内能分离到与攻毒菌一样的巴氏杆菌。

2.4.5 动物回归试验

试验组10羽鸡都呈现禽霍乱症状，4羽死亡，剖检显示为禽霍乱病理变化；对照组10羽鸡完全正常。从病死鸡体内能分离到与攻毒菌一样的巴氏杆菌。

2.5 药敏试验

2.5.1 西药药敏试验

表3 禽霍乱西药药敏试验结果

由表3可知病例Ⅰ至病例Ⅵ的首选高敏药物依次为：氟苯尼考、恩诺沙星、诺氟沙星、丁胺卡纳、环丙沙星、强力霉素。

3 讨论与分析

3.1 禽霍乱是蛋鸡群的常发病，及时、快速诊断病情是控制本病的重要前提，本文探讨的综合性诊断能及时准确的对病例进行诊断，具有一定的推广价值。

3.2 防治本病的重要手段是使用抗菌西药，但随着抗菌西药的广泛使用，耐药情况越来越严重，有必要通过药敏试验筛选有效药物用于临床。本药敏试验表明在我市流行的禽霍乱对氟苯尼考、恩诺沙星、诺氟沙星、丁胺卡纳、环丙沙星、强力霉素较敏感，为临沂市对本病进行药物预防提供了用药参考资料。

3.3 多杀性巴氏杆菌是体内常在菌，当机体抵抗力下降时易发病，故要加强饲养管理，减少发病机会。特别要搞好卫生消毒和免疫接种工作、及时进行药物预防、减少应激，夏季要特别防止热应激。

[1]杨慧芳主编.养禽与禽病防治[M].北京:中国农业出版社,2006,1:304～307.

[2]张秀美主编.禽病防治完全手册[M].北京:中国农业出版社,2005,1:166～173.