PCR法在奶牛乳房炎病原菌鉴定中的应用探析

金东春 鞠重基　黄京华 金雪梅

摘 要 乳房炎是乳房在化学、微生物或物理等的刺激之下所发生的一种疾病，是奶牛的一种常见疾病。基于此，立足于PCR法的发展现状，就PCR发在奶牛乳房炎病原菌鉴定中的应用进行了系统阐述，强化对PCR的发展及应用的认识。

关键词 PCR法；奶牛；乳房炎；病原菌；鉴定

中图分类号：F323.3 文献标志码：B 文章编号：1673-890X（2015）03--02

乳房炎是奶牛最为常见的一种疾病，对奶牛产业的发展具有较大的影响。当前，在对奶牛乳房炎病原菌的鉴定中，主要采取微生物培养法，这种传统的鉴定方法具有耗时长、费用高等缺点，在奶牛产业现代化发展的进程中，表现处于一定的滞后性。但随着分子生物学技术的不断发展，奶牛乳房炎病原菌的鉴定方法也得到了转变，以PCR法鉴定病原菌表现出诸多的优越性：检测灵敏度高；检测时间；检测成本低；检测范围广[1-2]。这些显著的优越性，决定了其在奶牛乳房炎病原菌鉴定中的应用价值。当前，PCR法主要有普通PCR诊断法、多重PCR诊断法和实时荧光定量PCR诊断法。具体如图1所示。本文立足于PCR法的技术特点，就其在奶牛乳房鉴定中的应用作如下具体阐述。

图1 PCR诊断法

1 普通PCR诊断法

现代分子生物学技术的不断发展，促使了PCR法在奶牛乳房炎病原菌的诊断中的应用发展，并逐步建立起了相对成熟的PCR乳房炎分子诊断方法。从实际来看，国外很多国家在PCR法的应用研究上已有诸多成效。表1是国外各国在奶牛乳房炎分子PCR法方面的研究成果[3]。从表1中可以看出，PCR诊断法在分子技术不断发展的大背景之下，PCR法在乳房炎病原菌的鉴定中，起到越来越重要的应用价值，并有广泛的鉴定范围，契合当前的技术发展需求。

2 多重PCR诊断法

从实际来看，引发奶牛乳房炎的病原菌的种类日益多样化，这就对普通PCR法有了新的要求，强调多重PCR诊断法在实际中的应用。当前，在多重PCR诊断研究中，经历了几个时期[4]。2001年，多重PCR体系在Riffon下建立，实现对4种病原菌的同时鉴定，并且在实际的应用中，具有快速、准确的实际效果；，2002年，Ramesh建立双重PCR体系，实现了对病原菌中的结肠炎杆菌和金黄色葡萄球菌的鉴定。而在我国，对于多重PCR诊断法的研究及应用也在不断深入，张善瑞建立了多重PCR体系，实现了对无乳链球菌、金黄色葡萄菌及大肠杆菌的鉴定，并取得了良好的应用效果。

3 实时荧光定量PCR诊断法

PCR法随着科学技术的不断发展，迎来了飞跃式发展，而实时荧光定量PCR诊断法就是最显著的体现。实时荧光定量PCR诊断法实现了机遇荧光信号对整个PCR扩增过程的检测，并通过建立标准曲线，最终对未知模板进行分析。当前这一方法正处于研究发展阶段，其中“Real-time PCR”技术最为显著[5]。一方面，相比于传统的PCR法，其检测灵敏度更高，且能够实现对细菌数量的明确检测；另一方面，Real-time PCR具有可定量且省时省力的特点，契合现实的需求。

总之，随着分子生物学技术的快速发展，奶牛乳房炎病原菌鉴定技术也迎来了发展的新阶段，PCR法的研究与发展，提高了奶牛乳房炎病原菌鉴定的准确性，并省时省力，非常契合当前的社会发展需求。但PCR法在应用及发展中，也存在诸多问题，如普通PCR法难以实现对不同细菌感染进行检测，且不做做出预先估计的乳房炎病例；而对于多重PCR法，其在检测灵敏度上相对较低，不能准确细菌数量。虽然Real-time PCR在前两者的基础上有了改善和发展，但高昂的设备仪器仍在现实中有一定的制约性。

参考文献

[1]刘磊.石家庄地区奶牛乳房流行病学调查及相关研究[D].保定：河北师范大学，2009（4）.

[2]孙东波.奶牛乳房炎主要病原菌基因检测技术研究进展[J].中国畜牧兽医，2012（3）.

[3]王金涛，张孝军.奶牛乳房炎诊断方法研究进展[J].现代化农业，2014（9）.

[4]王凤.奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定、血清型及耐药性研究[J].动物医学进展，2013（6）.

[5]高健，刘修权.奶牛乳房炎主要病原菌的快速检测[C].中国畜牧兽医学会2010年学会——第二届中国兽医临床大会论文集[A].2010：18-121.

（责任编辑：刘昀）