膜叶槌果藤水提物镇痛抗炎作用的实验研究

冯洁颖 戴卫波 吴凤荣

（中山市中医院，广东 中山528400）

膜叶槌果藤水提物镇痛抗炎作用的实验研究

冯洁颖 戴卫波 吴凤荣

（中山市中医院，广东 中山528400）

目的：研究膜叶槌果藤水提物镇痛抗炎作用。方法：小鼠分别连续灌胃给予膜叶槌果藤水提物高、中、低剂量（10.88，5.44，2.72 g/kg）7 d，采用扭体法、福尔马林致痛模型、二甲苯致耳肿胀模型及腹腔毛细血管通透性实验，观察其镇痛抗炎作用。结果：膜叶槌果藤水提物可显著抑制冰醋酸引起的小鼠扭体反应次数（P＜0.01）；对福尔马林致小鼠疼痛舔足第Ⅰ，Ⅱ时相累积时间均有显著减少（P＜0.05或P＜0.01）；对二甲苯致小鼠耳肿胀有显著的抑制作用（P＜0.05或P＜0.01）；对冰醋酸引起的毛细血管通透性也有显著的抑制作用（P＜0.01）。结论：膜叶槌果藤水提物具有显著的镇痛抗炎作用。

膜叶槌果藤；镇痛；抗炎

膜叶槌果藤为白花菜科植物（Capparis membranacea Gardn.et Champ.）的干燥根。《广东省药材标准》第二册有收载[1]，在《中华本草》[2]、《全国中草药汇编》[3]等专著中均以“独行千里”之名收载。本品具有活血散瘀、消肿止痛的功效，用于跌打瘀肿，闭经，风湿骨痛，咽喉肿痛，腹痛，牙痛[1]。主要分布于两广地区，为广东习用地产药材。为进一步合理开发应用本品，本研究对膜叶槌果藤水提物进行了镇痛抗炎药理作用探讨，现将实验结果报告如下。

1 实验材料

1.1 仪器

UV-754型紫外可见分光光度计（上海第三分析仪器厂）；YLS-Q4耳肿打耳器（直径8 mm，山东省医学科学院设备站）；TD25-WS 48孔多管架自动平衡离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；微量移液器（上海求精生化试剂仪器有限公司）；BS224S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司，d=0.000 1 g）。

1.2 药品与试剂

膜叶槌果藤（购于广东广弘药材有限公司，经广东省中山市中医院主任中药师鉴定为膜叶槌果藤的干燥根）；消炎痛（吲哚美辛肠溶片，广东华南药业股份有限公司，批号：140401）；伊文思兰（中国医药公司，批号：121225）；冰醋酸（广州化学试剂厂，批号：20100914-2）；二甲苯（广州化学试剂厂，批号：130308）。

1.3 实验动物

SPF级昆明种小鼠（20± 2）g（广州中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（粤）2013-0034），饲养于广东省中山市中医院中药药理实验室（实验动物使用许可证号：SYXK（粤）2010-0109），环境温度（22± 2）℃，相对湿度50%～ 60%。根据实验性质和性别分笼喂养，自由采食饮水。

1.4 膜叶槌果藤水提物的制备

取药材500 g，加水，煎煮2次，合并滤液，浓缩成500 mL，放冷，保存于冰箱中，临用前配制成所需浓度。

1.5 统计学处理方法

采用SPSS 19.0软件处理。数据用x± s表示，组间比较采用单因素方差分析，方差齐性者采用 LSD检验，方差不齐者采用 Dunnett-t检验。以P＜0.05为差别有统计学意义。

2 方法和结果

2.1 对醋酸致痛小鼠的镇痛作用[4]

选用18～ 22 g的昆明小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分组及给药见表1，体积均为20 mL/kg，空白组给20 mL/kg生理氯化钠，qd，连续 7 d，消炎痛组最后 1天给药1次，末次给药60 min后腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 mL/10 g，观察记录注射后各动物15 min内出现扭体的次数，并计算抑制率。结果见表1。

表1 膜叶槌果藤水提物对醋酸致痛小鼠的镇痛作用

抑制率（%）=（对照组平均扭体次数－给药组平均扭体次数）/对照组平均扭体次数 ×100%。

实验结果表明，与空白对照组比较，膜叶槌果藤水提物高、中、低剂量组均能显著抑制醋酸所致小鼠扭体反应（P＜0.01），抑制率分别为45.74%， 48.67%，67.55%。结果提示膜叶槌果藤水提物能对抗冰醋酸所致小鼠的疼痛性反应。

2.2 小鼠福尔马林致痛实验[5-6]

选用18～ 22 g的昆明种小鼠50只，雌雄各半。随机分为5组，每组10只。按表2剂量灌胃给药，qd，体积均为20 mL/kg，空白组给予20 mL/kg生理氯化钠，qd，连续7 d，消炎痛组最后 1天给药1次，末次给药60 min后，于小鼠右后足底皮下注射 2.5%福尔马林溶液（20 μL/只），立即置于小鼠笼中观测。以舔后足趾时间为小鼠的反应指标，分别记录小鼠注射后（0～ 10 min）和（10～ 30 min）的累积舔足时间，代表第Ⅰ时相和第Ⅱ时相疼痛强度。

抑制率 （%）= （空白对照组时间 －试药组时间）/空白对照组时间 ×100%。

表2 膜叶槌果藤水提物对福尔马林致痛小鼠的镇痛作用

实验结果表明，与空白对照组比较，膜叶槌果藤水提物高、中、低剂量对福尔马林致痛作用的第I时相（0～ 10 min）的疼痛反应均有显著抑制作用（P＜ 0.05或P＜ 0.01），其高剂量对第Ⅱ时相（10～ 30 min）的疼痛反应也有显著的抑制作用（P＜ 0.05），其作用均强于消炎痛。

2.3 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响[7]

选用18～ 22 g的昆明种小鼠50只，雌雄各半。随机分为5组，每组10只。按表3剂量灌胃给药，体积均为20 mL/kg，空白组给予生理氯化钠，qd，连续7 d，消炎痛对照组最后1天给药1次。末次给药60 min后，各组用移液器均匀涂二甲苯30 μL于右耳双面致炎，左耳空白对照。涂完后20 min脱颈椎处死动物，剪去毛，用剪刀沿动物耳廓基线剪下两耳，叠加完整，用直径为8 mm打孔器打下两圆耳片，精确称重。以两耳片质量之差为肿胀度，计算肿胀抑制率，结果见表3。

肿胀抑制率（%）=（空白对照组平均肿胀度－给药组平均肿胀度）/空白对照组平均肿胀度×100%。

实验结果表明，与空白对照组比较，膜叶槌果藤水提物高、中、低剂量组均对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显抑制作用（P＜ 0.05或P＜ 0.01）；其高、低剂量作用强于消炎痛。提示膜叶槌果藤水提取物对急性炎性肿胀具有抑制作用。

表3 膜叶槌果藤水提物对小鼠二甲苯致耳廓肿胀的影响

2.4 对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响[8-9]

选用18～ 22 g的昆明种小鼠50只，雌雄各半。随机分为5组，每组10只。按表4剂量灌胃给药，qd，体积均为 20 mL/kg，空白组给予生理氯化钠，连续7 d，消炎痛组最后1天给药1次，末次给药60 min后，尾静脉注射0.5%伊文思兰生理氯化钠0.1 mL/10 g体质量，同时腹腔注射0.6%冰醋酸，剂量为0.1 mL/10 g体质量致炎。20 min后处死，每只用5 mL生理氯化钠冲洗腹腔，取3～ 4 mL洗液，3 000 rpm离心10 min，取上清液，在紫外可见分光光度计 590 nm波长处测吸光度（OD）值。结果见表4。

渗出抑制率 （%）= （空白对照组平均OD值－给药组平均OD值）/空白对照组平均OD值×100%。

表4 膜叶槌果藤水提物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

实验结果表明，消炎痛对照组和膜叶槌果藤水提物高、中、低剂量组腹腔洗液的OD值，与空白对照组比较，差异均有统计学意义（P＜ 0.01）。说明膜叶槌果藤水提物组能显著降低冰醋酸所致小鼠毛细血管通透性，提示膜叶槌果藤水提物能显著抑制炎性过程中毛细血管通透性增高，表现出较好的抗炎作用。

3 讨论

本实验采用醋酸致小鼠疼痛扭体反应、福尔马林致小鼠疼痛舔足反应、二甲苯引起小鼠耳廓炎性肿胀反应及醋酸引起小鼠腹腔毛细血管炎性通透性反应，对膜叶槌果藤提取物的镇痛抗炎作用进行了实验观察，在扭体法实验中膜叶槌果藤提取物能显著抑制醋酸所致小鼠的疼痛扭体反应（P＜ 0.01）。皮下注射福尔马林可通过刺激C纤维进而激活广动力背角神经元，引发疼痛，由此第Ⅰ相（0～ 10 min）时为直接刺激C纤维而引发疼痛，第Ⅱ相（10～ 30 min）则由炎症机制的参与而引发疼痛[4]。本实验研究发现膜叶槌果藤水提物对第Ⅰ时相和第Ⅱ时相疼痛均有抑制作用，表现出良好的镇痛作用。

炎症是机体对损伤所产生的防御反应。二甲苯作用于小鼠耳廓，刺激肥大细胞释放组织胺、5-羟色胺等血管活性胺类，引起耳廓组织微血管扩张和通透性升高，组织液外渗，引发水肿[4]。而稀醋酸中的H+可刺激腹腔毛细血管，使得其通透性增高，引发体液向腹腔内渗。伊文思兰可与血浆蛋白瞬间结合，随体液渗入腹腔，从而可通过检测腹腔内渗出的染料量推测出炎性物质的渗出量[8]。本研究显示膜叶槌果藤水提物高、中、低剂量组均对二甲苯致小鼠耳肿胀有显著抑制作用（P＜ 0.05或P＜ 0.01），对冰醋酸致炎后小鼠腹腔洗液伊文思兰OD值显著低于空白对照组（P＜ 0.05或P＜ 0.01），表明膜叶槌果藤水提物有显著的抗炎作用。

膜叶槌果藤具有治疗风湿骨痛、咽喉肿痛、腹痛、牙痛等药效作用[10]，本研究表明膜叶槌果藤水提物可通过抑制冰醋酸致小鼠疼痛扭体反应次数、减少福尔马林致小鼠疼痛舔足累积时间、抑制二甲苯引起小鼠耳廓炎性肿胀度及醋酸引起小鼠腹腔毛细血管炎性通透性，表现出显著的镇痛抗炎作用。

[1] 广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准（第二册）[M].广州：广东科技出版社，2011：357-359.

[2] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草（第三册）[M].上海：上海科学技术出版社，1999：672.

[3] 谢宗万.全国中草药汇编[M].北京：人民卫生出版社，1975：452. [4] 徐叔云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2002：882.

[5] 孙爱静，徐先祥，黄晓东，等.七叶莲花抗炎镇痛作用及机制研究[J].中药材，2014，37（2）：311-314.

[6] 李静，田芳，李美艳，等.白屈菜提取物中生物碱的镇痛抗炎作用研究[J].中国实验方剂学杂志，2013,19（8）：262-265.

[7] 彭伟文，谭泳怡，梅全喜，等.黑面神水提物抗炎作用实验研究[J].今日药学，2012，22（3）：145-147.

[8] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1996： 305-306.

[9] 田素英，梅全喜，钟希文，等.复方土牛膝糖浆剂抗炎作用的实验研究[J].中药材，2007，30(5)：586-588.

[10] 冯洁颖，戴卫波，李绍康，等.广东地产药材独行千里的研究进展[J].中国中医药现代远程教育，2014,12（9）：164-165.

Experimental Study of Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Capparis Membranacea Aqueous Extract

Feng Jieying，Dai Weibo，Wu Fengrong（TCM Hospital of Zhongshan City，Guangdong Zhongshan 528400，China）

Objective：To study the analgesic and anti-inflammatory effects of capparis membranacea water extracts. Methods：Capparis membranacea aqueous extracts at high，middle and low doses （10.88，5.44，2.72 g/kg）were given respectively to mice by intragastric administration for 7 days.The analgesic and anti-inflammatory effects were observed through writhing response，formalin induced pain model，xylene induced ear swelling model and celiac capillary permeability test.Results：Capparis membranacea water extract can obviously inhibit the times of writhing response in mice induced by glacial acetic acid （P＜ 0.01），the I，II phase accumulation time of mouse foot licking of formalin induced pain in mice reduced significantly （P＜0.05 or P＜0.01），xylene induced ear swelling in mice and capillary permeability induced by acetic acid were significantly inhibited （P＜0.05 or P＜0.01 and P＜0.01）.Conclusion：Capparis membranacea water extract has obvious analgesic and anti-inflammatory effects.

Capparis Membranacea；Analgesic；Anti-inflammation

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.08.006

2015-04-01）

中山市卫生局医学科研立项（2013J088）

冯洁颖，女，主管药师。研究方向：医院药学。E-mail：zslittleshadow@sina.com

戴卫波，男，硕士，主管药师。研究方向：中药临床药理。通讯作者E-mail：daiweibo007@163.com