接骨竭七活血贴的薄层鉴别研究

孟 婷 杨莲芳 雷 琨 李富贤 石会丽

武警陕西总队医院(西安 710054)

接骨竭七活血贴的薄层鉴别研究

孟 婷 杨莲芳△雷 琨△李富贤△石会丽△

武警陕西总队医院(西安 710054)

目的：建立接骨竭七活血贴中龙血竭、延胡索、当归、冰片与薄荷脑、乳香与没药的薄层色谱(TLC)鉴别方法。方法：采用TLC法，考察供试品前处理工艺及其TLC展开剂的种类和配比条件，对龙血竭、延胡索、当归、冰片与薄荷脑、乳香与没药等进行定性鉴别。结果：接骨竭七活血贴与阳性对照药材在相应位置显相同斑点，而阴性对照品则各项TLC鉴别均不受方中其他成分的干扰。结论：该方法操作简单，检出结果可靠，重现性好，可作为接骨竭七活血贴的质量控制。

接骨竭七活血贴是陕西省中医医院自主研发的院内制剂，疗效显著，临床应用，得患者肯定。由龙血竭、延胡索、三七、当归、冰片、薄荷脑、乳香、没药等十三味药组成，具有舒筋活血，散瘀止痛功效。用于跌打损伤，闪腰岔气，伤筋动骨等血瘀肿痛。为了确保药品质量,经反复多次的方法学考察和试验，建立了本制剂中的龙血竭、延胡索、当归、冰片与薄荷脑、乳香与没药等药味的薄层鉴别方法。

1 仪器与试药 ZF-2型三用紫外仪(上海安亭电子仪器厂)；KQ-100型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；赛多利斯BD211D电子天平(德国赛多利斯公司)；对照药材：龙血竭 (批号121252-201303)；延胡索(批号120928-200604)；薄荷脑(批号110728-200506)；冰片(批号110743-200504)；当归(批号120927-200613)；乳香(120970-200403)；没药(天然没药)(120967-200903)。对照品：延胡索乙素 (批号110726-201213)；均购于中国药品生物制品鉴定研究院。接骨竭七活血贴制剂、阴性样品均由陕西省中医医院药剂科提供。氨水、氯仿、甲醇、苯、甲苯、乙酸乙酯、正己烷等试剂均为分析纯。

2 方法与结果 2.1 龙血竭的薄层鉴别 取供试品1片，除去盖衬，取膏药约5g，置三角瓶中，加无水乙醇10mL，超声30min，倾出上清液，作为供试品溶液(G)。同上法制成阴性对照溶液(D)。另取龙血竭对照药材0.2g，加无水乙醇2mL,参照供试品制成对照药材溶液(D)。吸取供试品和对照品溶液各3～6μL，一字形分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲醇-氯仿(1∶99)溶液为展开剂，展开晾干，直接紫外365nm下观察。或喷以香草醛5%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，紫外(365nm)下观察。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.2 延胡索的薄层鉴别 取供试品1片，除去盖衬，取膏药约5g，置三角瓶中，加水25mL，用0.05mol/L硫酸调pH至2～3，超声提取30min，过滤，滤液以氨试液调pH至9～11，转移至分液漏斗中，用乙醚振摇提取3次，每次l0mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液[1-2]。取延胡索对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。薄层色谱条件照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各3～6μL，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯一丙酮(9∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3min后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显同色的荧光斑点。

2.3 当归的薄层鉴别 取供试品1片，除去盖衬，取膏药约5g，加85%乙醇40mL，超声30min，滤过，滤液浓缩蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。取当归对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。薄层色谱条件：照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，分别吸取供试品溶液和对照药材溶液各3～6μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.1)溶液为展开剂[3-4]，展开，晾干，在紫外(365nm)下观察。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显亮蓝色同色的荧光斑点。

2.4 冰片和薄荷脑薄层鉴别 取供试品2片，除去盖衬，取膏药约10g，置三角烧瓶中，加无水乙醇15mL，振摇2min，倾出上清液，作为供试品溶液。再取冰片、薄荷脑对照品，分别加甲醇制成每1mL含5mg、2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液5～10μL，对照药材溶液3μL，点成一字形，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-苯-丙酮(20∶10∶1)[5]溶液为展开剂，展开，第1次8cm,取出，晾干，第二次展开15cm,取出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝色斑点。

2.5 乳香和没药的薄层鉴别 取供试品1片，除去盖衬，取膏药约5g，置三角烧瓶中，加无水乙醇15mL，超声30min，倾出上清液，作为供试品溶液。取阴性贴剂，同上法分别制成二者的阴性对照溶液。再分别取乳香、没药对照药材0.3g，加无水乙醇5mL，同上法处理，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液6～10μL，对照药材溶液5μL，点成一字形，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-苯-丙酮(20∶10∶ 1)溶液为展开剂[6]，展开，第一次6cm,取出，晾干，第二次10cm, 取出，晾干，喷以5%香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3 讨 论 样品预处理与供试品溶液的制备：根据延胡索中所含生物碱的性质，对供试样品进行了恰当的处理，方法简单，样品分离纯化好，除去了基质及其它药材等干扰成分。展开剂的选择与优化 ：根据当归中含有有机酸的理化性质，在展开剂中加入少许的酸，结果样品色谱分离的清晰，重现性很好。薄荷脑、冰片的展开剂参考了文献中的种类与极性，调整原为正己烷-苯-丙酮(20∶10∶2)，现将丙酮改为1，结果色谱分离非常好；乳香没药展开剂为首创。样品成分复杂，展距短分离好。显色剂优化：薄荷脑与冰片用5%香草醛硫酸液显色时，供试品层析色谱斑点特多，不易辨析；5%的磷钼酸溶液显色，板面清析易辨，背景淡黄色，色谱斑点显普蓝色。龙血竭原标准用10%浓硫酸显色后日光观察，改为不用显色，直接紫外下365nm处检视荧光，色谱斑点清晰易辩；或用上法显色后，观察荧光也可，否则，供试品显色后在日光下与对照药材无对应斑点。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部,2010.

[2] 尹 华，章建华，张春霞，等.芪参健骨颗粒的薄层鉴别研究[J].浙江中医药大学学报,2011，35(1)：79-80.

[3] 利创华，林艳菲，丘思兰，等.归芍调经口服液质量标准研究[J].湖北中医药大学学报，2013.3(15)：43-44.

[4] 宋 辉，戴明宽.克痢痧妇炎灵中冰片樟脑的薄层色谱鉴别[J].中国药业，1998，7(10)：26-27.

[5] 李 萍，赵鲁青.子宫锭中血竭冰片的薄层色谱鉴别[J].中国药业，2008,12(17)：51-52.

[6] 王苏会，闫 荟，王 瑞，等.消骨增贴中乳香、没药的薄层鉴别[J].中国医院药学杂志，2009,5(29)：414.

(收稿2015-09-29；修回2015-10-25)

中药鉴定 @接骨竭七活血贴

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.12.053

△陕西省中医药研究院(西安 710003)