冬凌草胶囊质量标准研究*

刘亚楠

(河南省食品药品检验所，河南 郑州 450003)

冬凌草胶囊质量标准研究*

刘亚楠

(河南省食品药品检验所，河南 郑州 450003)

目的：建立冬凌草胶囊的薄层色谱鉴别和高效液相含量测定方法。方法：采用薄层色谱法，分别以迷迭香酸对照品和冬凌草对照药材为对照，对冬凌草胶囊进行定性鉴别；采用HPLC法测定迷迭香酸的含量，色谱柱Phenomenex-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为乙腈-2 mL/L磷酸溶液(22∶78)，流速1.0 mL/min，检测波长329 nm，柱温40 ℃。结果：薄层色谱鉴别方法斑点清晰，重现性好；迷迭香酸进样量在23.87～596.75 ng范围内线性关系良好，r=0.999 97，平均回收率100.8%，RSD为2.2%(n=6)。结论：本方法操作简便，结果准确，重现性好，能有效控制冬凌草胶囊的质量。

冬凌草胶囊；质量标准；迷迭香酸；薄层色谱法；高效液相法

冬凌草胶囊是由冬凌草经过乙醇16 h提取制成的单方制剂，具有清热解毒的作用，用于急、慢性扁桃体炎，咽炎，喉炎及口腔炎。冬凌草胶囊现行标准为国家食品药品监督管理局注册标准，检验项目设置简单，专属性差，不能满足药品质量控制需要。据文献报道，冬凌草中的主要有效成分为二萜类化合物冬凌草甲素、冬凌草乙素，三萜类化合物熊果酸、齐敦果酸，有机酸类化合物迷迭香酸等[1]。笔者根据国家药品标准提高工作要求，对冬凌草胶囊质量标准进行研究与提高；增加冬凌草对照药材和迷迭香酸对照品的薄层色谱鉴别，以及迷迭香酸含量测定，以更好地控制冬凌草胶囊的质量。

1 药品、试剂与仪器

冬凌草胶囊来自安阳中智药业有限责任公司(批号111201，110801，121201，100601，100602，100401)、河南兴源制药有限公司(批号1003280，1001280)、安阳市华安药业有限责任公司(批号121107)。对照品迷迭香酸(供含量测定用，批号111871-201203)、对照药材冬凌草(批号121325-200301)均购于中国药品生物制品检定研究院；试验中所用试剂，除乙腈为Merk.公司色谱纯外，其他试剂均为分析纯；薄层板、硅胶G板，分别购自烟台市化学工业研究所和青岛海洋化工厂。Waters 2690高效液相色谱仪，Waters 996二极管阵列检测器，美国Waters公司产品。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

2.1.1 供试品溶液的制备

取本品0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入500 mL/L甲醇50 mL，称定质量，加热回流1 h，取出，放冷，用500 mL/L甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.1.2 对照品溶液的制备

取冬凌草对照药材1 g，加甲醇30 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为对照药材溶液。取迷迭香酸对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3 薄层色谱条件

硅胶G为吸附剂，点样量5 μL，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸 (6∶4∶1)为展开剂，展开，晾干，喷以50 mL/L三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365 nm)下检视。样品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1。

图1 TLC图谱

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱为Phenomenex-C18柱(4.6 mm ×250 mm，5μm)，流动相为乙腈-2 mL/L磷酸溶液(22∶78)；流速1.0 mL/min，检测波长329 nm，柱温40 ℃。理论板数迷迭香酸峰计算应不低于4 000。

2.2.2 溶液的制备

对照品溶液的制备：取迷迭香酸对照品适量，精密称定，加500 mL/L甲醇制成每毫升含60 μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品内容物0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入500 mL/L甲醇50 mL，称定质量，加热回流1 h，取出，放冷，用500 mL/L甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，色谱图见图2。

A.对照品溶液; B.供试品溶液图2 HPLC色谱图

2.2.3 线性关系考察

取迷迭香酸对照品溶液(23.87 mg/L)，分别吸取1，2，5，10，15，20，25 μL，注入液相色谱仪，以峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标进行回归分析，得回归方程Y=3 060.56X+5 780.065，r=0.999 97。结果表明：迷迭香酸进样量在23.87～596.75 ng 范围内线性关系良好。

2.2.4 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定峰面积。结果:迷迭香酸面积的RSD值为0.4%(n=6)。

2.2.5 重复性试验

取同一批号样品，按照2.2.2项下方法操作制得样品溶液，取10 μL注入液相色谱仪，测得平均含量为5.048 6 mg/g，RSD值为1.5%(n=6)。

2.2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在0,2,4,6,8,10 h进样10 μL，测定迷迭香酸峰面积。结果：RSD值为0.2%，表明样品在10 h内稳定。

2.2.7 回收率试验

取已知含量的样品(批号100602，含量为5.0486 mg/g)6份，每份0.25 g，精密加入迷迭香酸对照品甲醇溶液(23.87 mg/L)50 mL，按照2.2.2项下方法制备供试品溶液，测定迷迭香酸的含量，计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.2.8 耐用性试验

取按2.2.2项下的方法制备的同一供试品溶液，分别用3种不同品牌的C18色谱柱测定其含量。结果表明:该方法对不同色谱柱耐用性良好。

表2 不同商品规格的色谱柱耐用性试验

2.2.9 样品测定

按照2.2.2项下的操作方法，制备9批冬凌草胶囊样品的供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各5～10 μL注入液相色谱仪，按照2.2.1项下色谱条件进行含量测定，结果见表3。

表3 9批样品含量测定结果

3 讨 论

目前，从冬凌草中已分离出多种二萜、三萜类化合物、甾体、黄酮、生物碱、挥发油、氨基酸、有机酸等成分[1]，其中熊果酸及齐墩果酸存在广泛，专属性较差。迷迭香酸具有较好的抗菌、消炎、止痛的功效，易溶于甲醇、热水，有较好的稳定性和专属性[2-3]。因此，本实验将迷迭香酸作为定量控制的指标成分。研究表明：所建立的方法操作简便，重现性好，分析快速准确。

薄层色谱试验中曾选用二甲苯-乙酸乙酯-甲酸、三氯甲烷-甲醇-甲酸、二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸等展开系统为展开剂，结果以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸 (6∶4∶1)展开系统分离效果最佳，Rf值适中，斑点清晰，重现性高。

HPLC试验中，样品提取采用3因素3水平正交试验法，分别以水、500 mL/L甲醇、甲醇3种不同提取溶剂，采用超声、加热回流2种方法提取0.5 h、1 h、2 h，通过对9个正交试验结果进行直观分析和方差分析、综合评价，结果以500 mL/L甲醇50 mL加热回流1 h提取效率最高，故采用此法制备供试品溶液。

二萜类成分冬凌草甲素是冬凌草中较好的专属性成分，但本研究收集到的9批冬凌草胶囊样品仅有2批样品检出极微量的冬凌草甲素，暂不适合作为质控指标。经过生产企业工艺研究发现，经过长达16 h的加压回流，冬凌草甲素损失严重。随着现代制药设备进步，提取效率大大提高，建议修改冬凌草胶囊生产工艺，缩短提取时间，使之既能节约能源，又能提高冬凌草甲素的含量。

[1]冯卫生，李红伟，郑晓珂，等.冬凌草化学成分进展[J].中国新药杂志，2008，17(23):2003.

[2]李伟光，梁敬钰.迷迭香酸的研究进展[J].海峡药学，2004，16(1):1.

[3]林瑞超，马双成.中药化学对照品应用手册[M].北京：化学工业出版社，2013：387.

(编辑 陶 珠)

1001-6910(2015)07-0059-03 ·药学研究·

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10.3969/j.issn.1001-6910.2015.07.29

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2015-02-04；

2015-04-22