板玄口服液的提取工艺及质量标准研究*

刘安龙

(洛阳市第二中医院，河南 洛阳 471003)

板玄口服液的提取工艺及质量标准研究*

刘安龙

(洛阳市第二中医院，河南 洛阳 471003)

目的：优选名老中医经验处方板玄口服液的最佳水提取工艺，并建立其质量标准。方法：以复方中表告依春的含量为指标，采用HPLC法测定其含量，采用L9(34)正交试验设计，考察加水量(A)，煎煮时间(B)，煎煮次数(C)3个因素对其水提取工艺的影响；采用高效液相色谱法测定板玄口服液中表告依春的含量，色谱柱为Agilent C18柱，流动相为甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钠缓冲液(氢氧化钠试液调节pH值 7.4)(7∶93)，流速1.0 mL/min，检测波长242 nm，柱温30 °C。结果：水提取工艺影响因素大小依次是C>A >B；表告依春进样量在0.020～0.400 μg范围内线性关系良好，r=0.999 8；平均回收率为98.36%，RSD为1.63%(n=6)。结论：提取工艺稳定可行；板玄口服液中表告依春的测定方法简便、准确，重现性好，精度高，可用于该制剂的质量控制。

板玄口服液；提取工艺；正交试验；高效液相色谱法；表告依春；含量测定

板玄口服液为洛阳市第二中医院医疗机构制剂，由板蓝根、玄参、荆芥、薄荷、僵蚕(麸炒)、山豆根、连翘、浙贝母、桔梗、苦杏仁(炒)等中药煎制提取制成，具有辛凉解表、清热解毒、利咽散结、消肿的作用，用于热毒壅盛所致的咽喉发干、声哑失音、烦躁口渴，以及上呼吸道感染、慢性扁桃体炎、喉炎、咽炎和咽喉溃疡见上述证候者。方中板蓝根为君药之一，据文献报道，表告依春为板蓝根的主要抗病毒有效成分之一[1]，且表告依春的水溶性很好，因此在水提制剂中含量较高[2]。为了最大程度发挥该方剂的复方功效，选择表告依春作为考察指标[3]，用正交实验法对其水煎煮提取工艺进行研究，优选最佳提取工艺，对板玄口服液开展定量控制。

1 药品、试剂与仪器

本研究使用的所有中药材，均由安徽省亳州市药材总公司提供，经河南中医学院陈随清教授鉴定为正品；(R，S)-告依春对照品，含量测定用，购自中国食品药品检定研究院，批号111685-200802；甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为自制超纯水；柱层层析硅胶，青岛市基亿达硅胶试剂厂产品, 批号0080881。岛津LC-20A高效液相色谱仪(SPD-20A ΜV/VIS检测器，自动进样器)，日本岛津公司产品；色谱柱为Phenomenex C18柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm)；BS2242S电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司产品；8-1-B型电子调温电热套，天津市泰斯特仪器有限公司产品；酒精计，沈阳市金城玻璃计器厂产品；H.H.S电热恒温水浴锅，上海医疗器械五厂产品。

2 方法与结果

2.1 口服液的制备

2.1.1 正交试验优选工艺

选取料液比(A)、煎煮时间(B)、煎煮次数(C)为试验因素，每个因素设计3个水平，按L9(34)表进行正交试验，以表告依春为测定指标，优选提取工艺。选定的因素水平见表1，正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。

表1 因素与水平

表2 正交试验结果

表3 方差分析结果

注：F0.05(2,2)=19.0，F0.01(2,2)=99.0。

由表2和3可知：3种因素的影响程度顺次为C>A>B。其中C因素(提取次数)P<0.05，说明对实验结果有显著性影响。C因素的最佳水平为2水平，即药材煎煮2次。A、B因素则影响较小，不呈显著性。为缩短生产时间间隔和减少浪费原材料，结合实验结果，对工艺条件A1B1C2与A2B2C2同时进行验证实验，结果差异不大，最优工艺参数为A1B1C2，即料液比为1∶6(g/mL)、煎煮次数为2次，每次煎煮时间为1 h。

2.1.2 制备方法

将合格净料饮片按处方60倍量置于提取罐中加5倍量水，浸泡1 h 后煎煮2次(第1次煎煮1 h，并收集芳香水；第2次煎1 h)；合并两次药液滤过，将滤液浓缩至相对密度约1.20(80 ℃)；静置，冷藏24 h；过滤醇沉，回收乙醇并浓缩；加入芳香水，再加甜蜜素、苯甲酸钠各180 g，搅拌;加纯化水至60 000 mL，静置，滤过。用灌封机灌装于10 mL玻璃瓶中，灭菌、灯检、包装，每盒10支。

2.2 板玄口服液中表告依春的含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱为Agilent C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.01mol/L 磷酸二氢钠缓冲液(氢氧化钠试液调节pH值7.4)(8∶92)，流速1.0 mL/min，检测波长242 nm，柱温30 ℃，进样量20 μL。

2.2.2 对照品溶液的制备

精密称取表告依春对照品10.0 mg,置100 mL量瓶中，加100 mL/L甲醇溶解并定容，摇匀，制成表告依春10 mg/L的对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备

精密量取板玄口服液2 mL，置10 mL容量瓶中，缓缓滴加甲醇至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.2.4 阴性对照试验

按处方比例并以相同工艺制备缺板蓝根阴性制剂适量，按2.2.3项下方法制备缺板蓝根阴性对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液、供试品溶液和缺板蓝根阴性对照品溶液，按2.2.1项下色谱条件进行测定，记录色谱图。见图1。

2.2.5 标准曲线的制备

精密吸取2.2.2项下的对照品溶液各2,5,10,20,30,40 μL溶液，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图。以峰面积积分值(Y)为纵坐标，对照品溶液的进样量(X)为横坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=7 153.9X-22.69,r=0.999 8。结果表明：表告依春进样量在 0.020～0.400 μg范围内线性关系良好。

2.2.6 精密度试验

吸取同一供试品溶液，按上述色谱条件重复进样6次，记录色谱图。结果：表告依春的峰面积的RSD值为0.15%。表明：仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性试验

吸取同一供试品溶液，分别在放置0，2，4，6，8及12 h后，测定表告依春的峰面积。结果：表告依春含量的RSD值为0.78%。表明：供试品在12 h内稳定。

2.2.8 重复性试验

取同一批板玄口服液，按2.2.3项下方法制备6份供试品溶液，再按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图，计算表告依春的含量及相对标准偏差。结果：表告依春含量的RSD值为0.59%。表明：本方法重复性较好。

2.2.9 加样回收率试验

精密吸取已知含量的同批次样品(批号为140829)6份，每份1.0 mL，置10 mL容量瓶中，精密加入55.5 mg /L表告依春对照品溶液1.0 mL，按2.2.3项下供试品溶液制备方法制备加样回收供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件进样并记录色谱图，测定峰面积并计算回收率。结果：平均回收率为99.37%，RSD为0.62%(n=6)。表明：方法回收率较好。见表4。

2.2.10 样品含量测定

取3个批次的板玄口服液，按2.2.3项下方法制备，分别精密吸取供试品溶液20 μL，按上述色谱条件进样测定，记录色谱图。计算含量，结果见表5。

表5 板玄口服液中表告依春含量

3 讨 论

本研究采用正交试验法，以表告依春含量为指标，对板玄口服液的提取工艺进行了优选。实验中先采用正交试验法对煎煮加水量、煎煮时间和煎煮次数进行考察，结果表明3个因素对提取结果有不同程度的影响。方差分析表明：煎煮次数对提取效果影响较大，为显著性影响因素。结合医院制剂生产的实际情况，确定最佳生产工艺为：药材加6倍量水，提取次数2次，每次1 h。

板玄口服液有板蓝根和其他药材经水提醇沉制成，所含成分较多[4]，考虑到表告依春的抗病毒作用较强，以其为质控指标，摸索质控条件[5-7]，并建立了板玄口服液中表告依春的含量测定方法。在选择流动相时，对比考察了甲醇-50 mL/L磷酸溶液(8∶92)、甲醇-水、甲醇-50 mL/L磷酸溶液(7∶93)、乙腈-水等流动相，结果以本文所选甲醇-0.01mol/L 磷酸二氢钠缓冲液(氢氧化钠试液调节pH值 7.3)(7∶93)为流动相时峰形良好，基线平稳、分离度较好，无拖尾现象。研究表明：采用HPLC测定板玄口服液中表告依春的含量的方法简便易操作，重复性和专属性较好。表告依春的含量测定可为板玄口服液的质量标准提供科学数据支持。

[1]陈凯，窦月，陈智，等.板蓝根抗病毒与抗内毒素等清热解毒药效作用及化学基础研究进展[J].中国方剂学杂志，2011，17(18)：285-288.

[2]孙东东，李祥，陈建伟，等.板蓝根醇提部位化学成分研究[J].中国药房，2007，18(30)：2325-2326.

[3]黄芳，熊雅婷，徐丽华，等.板蓝根不同提取物中抗病毒成分表告依春在大鼠体内的药代动力学[J].中国药科大学学报，2006，37(6)：519-522.

[4]左丽，李建北，徐景，等.板蓝根的化学成分研究[J].中国中药杂志，2007，32(8)：688-691.

[5]聂黎行，王钢力，戴忠，等.手性高效液相色谱法测定板蓝根中表告依春和告依春含量[J].色谱，2010，28(10)：1001-1004.

[6]张亚辉，郉建国，薛桂蓬，等.超滤法纯化板蓝根中表告依春的工艺研究[J].农垦医学，2009，31(6)：503-506.

[7]熊清平，张强华，徐燕萍，等.大孔树脂对板蓝根中表告依春的纯化工艺研究[J].安徽农业科学，2011，39(30)：142-144.

(编辑 陶 珠)

1001-6910(2015)07-0061-03 ·药学研究·

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B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.07.30

刘安龙(1963—)，男(汉族)，河南洛阳人，副主任中药师，本科，研究方向：中药学。

洛阳市科技局2013社会科技发展计划(1301071A—6)

2015-02-12；

2015-05-18