补肾调经中药复方对排卵障碍模型大鼠NE、 FSH及E2的调节作用*

周继春，魏伟峰，刘方洲

(1.河南省食品药品检验所， 河南 郑州 450003；2.河南省中医药研究院，河南 郑州 450004)

补肾调经中药复方对排卵障碍模型大鼠NE、 FSH及E2的调节作用*

周继春1，魏伟峰2，刘方洲2

(1.河南省食品药品检验所， 河南 郑州 450003；2.河南省中医药研究院，河南 郑州 450004)

目的：观察补肾调经中药复方对排卵障碍模型大鼠的治疗作用，探索补肾法调节下丘脑-垂体促性腺功能、促生长的作用机制。方法：以排卵障碍模型大鼠为研究对象，将同一批次清洁级SD雌性成年大鼠80只随机分为正常对照组、模型对照组、补肾调经高剂量组、补肾调经低剂量组4组。雄激素致排卵障碍大鼠模型参照俞瑾等方法[1]建立，灌胃给药5周后，采用放免法检测血中雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)水平，用荧光分析法测定下丘脑去甲肾上腺素(NE)含量。结果：补肾调经中药复方能增加血清中的E2含量(P<0.05)、FSH含量(P<0.05)，提高排卵障碍大鼠动情前期下丘脑内NE水平(P<0.01)。结论：补肾调经中药复方可能是通过NE调节GnRH的时相，使脑片GnRH释放增加，从而使卵巢周期中排卵前LH分泌峰出现，促进排卵。

不孕症；补肾调经中药复方/药效学；排卵障碍模型/药物作用；大鼠；雌二醇；下丘脑

中医认为不孕症的发生与肾-天癸-冲任-胞宫生殖轴密切相关。肾主生殖藏精。肾气旺盛，肾精充实，气血调和，则任通冲盛，经调子嗣。肾在月经产生及调节女性生殖方面有重要作用，治疗女性不孕症的重点就在于补肾、调理气血和月经，因此，补肾化瘀、养血调经是妇科治疗无排卵性疾病的常用治法。下丘脑-垂体-卵巢轴互相调节促使妇女正常排卵[1]。去甲肾上腺素(NE)可能控制下丘脑基底部和视前区的GnRH神经元活动，调节GnRH的时相，使排卵前LH分泌高峰出现，最后导致排卵[2]。因此,本研究通过检测血清中卵泡刺激素(FSH )、雌二醇(E2)含量及下丘脑部位去甲肾上腺素(NE)含量的变化探讨补肾调经中药复方的调节作用。

1 材料与方法

1.1 动 物

出生9日龄SD雌性大鼠80只，体质量15 g，由河南省动物实验提供，合格证号为11400700042310。

1.2 药品、试剂与仪器

补肾调经中药由当归、熟地黄各14 g，川芎10 g，香附 10 g， 淫羊藿、菟丝子、淫羊藿、枸杞子各30 g ，甘草 5 g组成。中药材由河南中医学院第三附属医院中药房提供，由河南省中医药研究院药理实验室制备，批号20140316；再配制成5.5 g生药/mL和2.8 g生药/mL两种质量分数的药液， 4 ℃冰箱，密封保存。丙酸睾丸酮注射液，天津金耀氨基酸有限公司产品，批号0303232；E2放射免疫分析药盒，由北京尚柏生物科技有限公司提供，批号20131020；促卵泡生成素放射免疫分析药盒，由北京尚柏生物科技有限公司提供，批号20130224。20PR-52D型离心机， 日立公司产品；GC-1200V型放免分析仪，科大创新有限公司产品。

1.3 分组、模型的建立与给药

将大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、补肾高剂量组、补肾低剂量组4组，每组20只。参照文献方法[3]造模,从大鼠出生第9天开始，除正常对照组外，其他3组颈背部皮下注射丙酸睾丸酮注射液1.25 mg/只(0.05 mL/只)；正常对照组不做特殊处理。自第70天，连续阴道涂片两个性周期(一个性周期是5 d)，观察阴道上皮细胞变化。以阴道上皮无性周期变化为造模成功。第80天起，补肾高、低剂量组分别给予补肾调经中药5.5，2.8g/mL，相当于临床剂量的20，10倍；模型对照组和正常对照组灌服蒸馏水10 μL/g体质量，连续灌胃35 d。

1.4 检测指标

灌胃结束前10天开始进行阴道脱落细胞涂片，在显微镜下判断大鼠性周期，连续两个性周期。选择相同动情周期(动情后期)，最后一次给药后禁食8 h，股动脉取血并断头处死。无菌操作下，在冰盘上迅速开颅，切取下丘脑，用荧光分析法测定NE水平。取出的血样在室温下静置2 h，以3 000 r/min转速离心10 min，取上清液，用放射免疫法测定血清中E2和FSH水平。

1.5 统计学方法

2 结 果

与模型对照组对比，补肾调经高、低剂量组下丘脑NE 水平均增高，差别有统计学意义(P<0.05)。大鼠E2水平补肾调经高剂量组和补肾低剂量组比模型对照组有显著提高P<0.05)。大鼠FSH水平补肾调经高剂量组和低剂量组比模型对照组有显著提高(P<0.05)。见表1。

分 组nNE/(ng·g-1)E2/(ng·L-1)FSH/(μg·L-1)正常对照组202.26±0.39**49.43±6.42**2.08±0.22**模型对照组201.20±0.3932.20±5.201.18±0.28补肾调经低剂量组201.48±0.34*36.12±5.71*1.39±0.25*补肾调经高剂量组201.51±0.36*37.17±7.02*1.43±0.29*

注：与模型对照组对比，*P<0.05， **P<0.01。

3 讨 论

肾藏精，主生殖，为先天之本，元气之根，在机体的整个生命活动中起到主导作用。肾精又被称为元精、元阴，为胚胎发育的原始物质，并能促进生殖功能的成熟。肾中精气充盈到一定程度时可产生具有促进人体生殖器官成熟并维持生殖功能的物质。天癸是人体肾中精气充盈到一定年龄阶段时产生的一种精微物质，古人谓之“无形之水”，能促使女子任脉通，太冲脉盛，月经按时来潮，可以怀孕；能促使男子精气溢泻，有正常的生殖功能。由此可见,天癸与现代医学所指的调节生殖功能的神经内分泌激素相类似[4]。肾-天癸-冲任-胞宫与下丘脑-垂体-卵巢-子宫轴的功能类似。肾精的先天不足或者后天亏损，冲任空虚，胞失濡养，可导致月经后期、闭经、不孕等[5]。

去甲肾上腺素能系统是下丘脑GnRH释放和垂体LH分泌的重要激活因素，NE可调节下丘脑基底部和视前区的GnRH神经元活动，调节GnRH的时相，使脑片GnRH释放增加，从而使卵巢周期中排卵前LH分泌峰出现，最后导致排卵[6]。E2参与卵泡发育的各个环节的调节，能刺激颗粒细胞的有丝分裂，促进颗粒细胞的增殖。近年来研究发现：E2可以明显抑制卵巢颗粒细胞的凋亡，减缓卵泡的闭锁，促进卵泡的生长、发育及排出[7]。现代药理研究认为：补肾药能提高垂体对下丘脑的反应，促进卵泡发育成熟。FSH是由垂体细胞合成和分泌的促性腺激素，能直接和卵巢上的受体结合，促进卵泡的发育和排卵。无FSH则卵泡发育不能超过窦生长阶段，卵泡不发育，E2水平低，生殖器官的生长和促性腺激素受负反馈影响[8]。在接近排卵时，FSH刺激颗粒细胞蛋白溶解酶原活化因子，在其作用下卵泡排出。研究表明：导致FSH水平下降的原因是E2，随着卵泡发育颗粒细胞产生大量的E2，通过负反馈抑制垂体的FSH分泌[9]。在本研究中，补肾调经中药复方对排卵障碍模型大鼠的NE 、FSH及E2水平有明显升高作用，从而调节GnRH的时相，使脑片GnRH释放增加，从而使卵巢周期中排卵前LH分泌峰出现，并能直接作用于垂体，提高大鼠生殖内分泌功能，促进卵泡发育和排卵。

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(编辑 陶 珠)

1001-6910(2015)07-0051-03 ·实验研究·

R22

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.07.26

河南省基础与前沿(132300310281)

2014-12-01；

2015-05-14