多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞CUL4A表达及意义

刘蕊，王英曼，张海霞，闫振宇，陈乃耀

(河北联合大学附属医院，河北唐山063000)

多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞CUL4A表达及意义

刘蕊，王英曼，张海霞，闫振宇，陈乃耀

(河北联合大学附属医院，河北唐山063000)

目的 检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞中CUL4A mRNA表达，探讨其临床意义。方法 采用实时荧光PCR相对定量法检测38例MM患者(MM组)和20例非血液肿瘤患者(对照组)骨髓单个核细胞CUL4A mRNA的表达情况。结果 MM组骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达量较对照组增加(P<0.05)。MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达量与临床分期、血清β2-MG水平相关(P均<0.05)，与性别、年龄、免疫学分型不相关(P均>0.05)。治疗有效的MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达水平低于治疗无效患者(P=0.003)。结论 MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA表达上调可能是促进MM发展的因素之一，检测CUL4A可以为MM的诊断及治疗提供参考。

多发性骨髓瘤；泛素连接酶；CUL4A蛋白

多发性骨髓瘤(MM)是骨髓中浆细胞恶性增殖性造血系统肿瘤，约占造血系统肿瘤的10%。近年来，MM发病率有逐年增高的趋势，但其病因及发病机制仍未充分阐明，可能是多种因素综合作用的结果。大量研究表明，乳腺癌、前列腺癌、肺癌及结肠癌细胞中CUL4A水平均升高，并且与肿瘤发生、发展及药物敏感性等相关。本研究检测MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA表达，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2012年1月～2014年1月河北联合大学附属医院血液科住院初治MM患者38例(MM组)，均符合WHO关于MM的诊断标准；男28例，女10例；年龄40～74岁，中位年龄55岁。选取同期门诊非血液肿瘤患者20例作为对照组，男14例，女6例；年龄38～73岁，中位年龄54岁；巨幼细胞性贫血4例，缺铁性贫血7例，溶血性贫血4例，特发性血小板减少性紫癜5例。两组性别、年龄具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 骨髓单个核细胞CUL4A mRNA检测 两组均于治疗前无菌操作下取骨髓液(肝素抗凝)约3 mL，分离单个核细胞，PBS液洗涤2次，加入Trizol 1 mL，-80 ℃保存。采用实时荧光PCR相对定量法检测骨髓单个核细胞CUL4A mRNA，步骤参照试剂盒说明书。以对照组的平均表达量为参照量，采用2-ΔΔCt法计算MM组骨髓单个核细胞CUL4A mRNA的相对表达量。

1.2.2 治疗方法 MM患者采用VAD治疗方案(长春地辛1 mg+表柔比星10 mg+地塞米松40 mg，连用4 d为1个疗程，每4周重复)化疗，根据张之南主编的《血液病诊断及疗效标准》[1]判断4个疗程后的化疗效果，即完全缓解(CR)、接近完全缓解(nCR)、部分缓解(PR)、无变化(SD)、进展(PD)。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件。采用中位数结合范围表示CUL4A mRNA相对表达量，数据比较采用Mann-WhitneyU检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组骨髓单个核细胞CUL4A mRNA表达 MM组骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达量为2.216(1.106～11.163)，多于对照组(1)，P<0.05。

2.2 MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达量与临床病理参数的关系 见表1。

2.3 MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达量与疗效的关系 38例MM患者完成4个疗程化疗，CR或nCR 14例、PR 12例、SD 7例、PD 5例。

26例治疗有效(CR+nCR+PR)患者的骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达量为1.909(1.106～2.955)，12例治疗无效(SD+PD)者为4.711(1.448～11.163)，P=0.003。

3 讨论

CUL4是最新发现的一种泛素连接酶(E3)，其异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关[2]。在原发性乳腺癌[3]、原发性恶性胸膜间皮瘤[4]、卵巢癌[5]中均发现CUL4A过表达。体内外实验均显示，干扰CUL4A表达能抑制乳腺癌细胞的增殖和生长[6]。另外，肺癌细胞系H2170敲除CUL4A后对顺铂的敏感性增强[7]。关于其作用机制，Abbas等[8～10]研究发现，CUL4A可降解细胞周期抑制蛋白p21、p27，参与细胞凋亡蛋白p53降解；CUL4A可降解一系列肿瘤抑制蛋白，如Merlin蛋白[11]、mTOR通路抑制因子REDD1[12]等；表明CLUA可能通过参与调控细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的活性，激活或抑制原癌基因及抑癌基因的表达，从而直接或间接影响各种恶性肿瘤的发生、发展。

本研究发现，MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA表达量增加，且其表达量随MM临床进展而逐渐增高，与Ren等[13]在前列腺癌及李振宇[14]在结肠癌中观察到的结果一致。岑海燕等[15]研究发现，MM患者血清β2-MG水平直接反映体内肿瘤负荷，与其生存期有关，是影响预后的独立危险因素。本研究中MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达量与血清β2-MG水平密切相关，高β2-MG患者CUL4A表达量高于低β2-MG患者。本研究中治疗有效的MM患者CUL4A mRNA相对表达量低于治疗无效患者，说明CUL4A在骨髓瘤患者中的高表达可能是部分患者对化疗不敏感的原因之一，CUL4A有望成为逆转骨髓瘤耐药的一个潜在靶点。但CUL4A在MM发生、发展中的具体作用和分子机制仍需通过分子生物学实验进一步研究证实。

综上所述，MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA表达上调可能是促进MM发展的因素之一，检测CUL4A可以为MM的诊断及治疗提供参考。

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河北联合大学科学研究基金项目(Z201335)。

闫振宇，E-mail: 517556667@qq.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.12.031

R733.3

B

1002-266X(2015)12-0076-02

2014-07-05)