血清胸苷激酶1、细胞角蛋白19片段联合检测在头颈鳞癌患者临床诊断中的价值

高群，阮宏莹，林鹏

(1天津医科大学第一中心临床学院，天津300192；2 天津市第一中心医院)

血清胸苷激酶1、细胞角蛋白19片段联合检测在头颈鳞癌患者临床诊断中的价值

高群1，阮宏莹2，林鹏2

(1天津医科大学第一中心临床学院，天津300192；2 天津市第一中心医院)

目的 探讨胸苷激酶1(TK1)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)联合检测对头颈鳞癌的诊断价值。方法 采用ELISA法检测42例头颈鳞癌(A组)、20例癌前病变(B组)患者和20例健康体检者(C组)血清TK1、CYFRA21-1。 结果 A组血清TK1、CYFRA21-1水平高于B、C组(P均<0.01)；血清TK1、CYFRA21-1联合检测对头颈鳞癌诊断的灵敏度较单项检测显著提高(P均<0.05)。结论 血清TK1、CYFRA21-1联合检测在头颈鳞癌诊断中有较好的临床价值。

头颈鳞癌；胸苷激酶1、细胞角蛋白19片段；酶联免疫吸附法

细胞质胸苷激酶1(TK1)与肿瘤细胞增殖生长密切相关，是一种灵敏有效的评估肿瘤细胞增殖的标志物。文献报道，TK1在多种肿瘤中表达[1、2]。细胞死亡时，细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)被释放入血，成为头颈鳞癌新的肿瘤标志物，敏感性优于鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)。本研究通过检测头颈鳞癌患者血清TK1、CYFRA21-1，评估二者对于头颈鳞癌早期诊断的价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取天津医科大学第一中心临床学院2013年9月～2014年9月收治的42例头颈鳞癌患者为A组，同期20例癌前病变患者(包括喉角化、喉乳头状瘤等)为B组，20名健康体检者为C组。A组男30例、女12例，年龄38～71岁、平均58岁；其中高分化癌14例，中分化癌20例，低分化癌8例；TNM分期T1、T2期28例，T3、T4期14例；均经术后病理证实为鳞状上皮细胞癌，术前均未经化疗、放疗和免疫治疗。B组男14例、女6例，年龄35～67岁、平均46岁。C组男12例、女8例，年龄28～62岁、平均43岁。排除标准：既往恶性肿瘤病史；心、肝、肺、肾等重要脏器疾患；急性感染、免疫缺陷性疾病、贫血、月经期及妊娠期等处于细胞增殖状态者。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 研究对象均采集清晨空腹静脉血5 mL，3 000 r/min离心20 min，分离血清，按标号分装于EP管内，放置于-80 ℃低温冰箱中待用。采用ELISA测定血清TK1、CYFRA21-1，严格按照说明书进行操作。灵敏度=A组阳性例数/A组总例数×100%；1项或大于1项阳性，为联合检测阳性。

1.2.2 判断标准 TK1>2.0 pmol/L、CYFRA21-1>3.3 ng/mL判断为阳性。

2 结果

2.1 各组血清TK1、CYFRA21-1水平比较 见表1。

注：与A组比较，△P<0.01。

2.2 灵敏度比较 TK1、CYFRA21-1及联合检测对头颈鳞癌诊断的灵敏度分别为76.2%、59.5%、95.2%，与各单项检测对比，TK1、CYFRA21-1联合检测对头颈鳞癌诊断的灵敏度明显提高(χ2分别为6.22、15.30，P均<0.05)。

3 讨论

TK1是DNA补救合成途径的限速酶，在ATP的参与下催化脱氧胸苷(TDR)磷酸化为脱氧1-磷酸胸苷酸(dTMP),是评估增殖细胞增殖度的重要标志[3]。正常细胞中TK1受细胞周期的调控，增殖周期中的TK1含量在细胞分裂G1期处于低水平，自S期逐渐升高，G2期达到峰值，G2晚期开始急剧降解，到M期逐渐降解至G1前期最低水平[4]。正常情况下成人TK1体内含量极微，几乎检测不出[5]。当细胞更新代谢旺盛时，如胎儿组织及成人的增殖细胞中，TK1将出现较高水平的表达。一旦发生癌变，肿瘤细胞中DNA合成剧增，处于S期和G2期的细胞比例明显升高，导致肿瘤细胞内产生的大量TK1被释放入血，TK1的活性和含量都将升高，可超过正常水平的2～100倍[6]。因此，检测组织和血清中TK1活性及含量的变化可作为肿瘤细胞增殖水平的监控指标，定量反映患者体内肿瘤细胞的增殖速度，也有助于临床评估肿瘤的恶性程度和患者的预后。赖永鑫[7]报道TK1在喉癌的诊断中具有一定价值。

CYFRA21-1是CK19的可溶性片段，由CK19的两个单克隆抗体组成,即单抗BM19-21和KS19-1，为一种酸性细胞蛋白，主要分布于单层和复层肿瘤细胞的胞质内。当分布有CK19的上皮细胞溶解或癌变坏死脱落时，可以溶解片段的形式释放大量CYFRA21-1进入血液循环，导致CYFRA21-1结构不变而含量异常升高[8]，被认为是目前检测鳞癌最好的肿瘤标志物[9]。正常时CYFRA21-1以寡聚物形式存在,含量极低。既往报道显示，血清CYFRA21-1是喉癌和下咽癌较理想的检查指标，灵敏度高于SCCAg[10]。

本研究用ELISA法检测TK1、CYFRA21-1在头颈鳞癌患者、癌前病变患者及健康体检者血清中的表达，结果显示，头颈鳞癌患者血清TK1、CYFRA21-1的含量均显著高于癌前病变及健康体检者；同时癌前病变患者TK1水平高于健康体检者，但无显著性差异，这与有关文献报道一致[11～13]。说明TK1、CYFRA21-1参与了头颈鳞癌的发生，可作为头颈鳞癌的诊断指标。

单项肿瘤标志物对肿瘤的诊断虽有一定价值，但缺乏足够的敏感性和特异度，为尽量减少这种局限性，有学者采用多个指标联合检测来提高对恶性肿瘤的诊断率[14，15]。本研究单独检测TK1、CYFRA21-1的敏感度分别为76.2%、59.5%，而两者联合检测的敏感度为95.2%。经统计学分析，差异均具有统计学意义(P均<0.05)。提示TK1、CYFRA21-1的联合检测可提高头颈鳞癌诊断的敏感度，从而有效降低漏诊率，对头颈鳞癌的早期诊断具有重要的临床应用价值。

由于观察的样本数量不多，且未对头颈鳞癌患者进行临床随访追踪，血清TK1、CYFRA21-1能否作为监测头颈鳞癌治疗效果、复发的肿瘤标志物还需进一步临床验证。

[1] Li Z, Wang Y, He J, et al. Serological thymidine kinase1 is a prognostic factor in oesophageal， cardial and lung carcinomas[J]. Eur J Cancer Prev, 2010,19(4):313-318.

[2] Chen Y, Ying M, Chen Y, et al. Serum thymidine kinase1 correlates to clinical stages and clinical reactions and monitors the outcome of therapy of 1247 cancer patients in routine clinical settings[J]. Int J Clin Oncol, 2010,15(4):359-368.

[3] Zhang F, Li H, Pendleton AR, et al. Thymidine kinase 1 immunoassay: a potential marker for breast cancer[J]. Cancer Detect Prev, 2001,25(1):8-15.

[4] Sherley JL, Kelly TJ. Regulation of human thymidine kinase during the cell cycle[J]. J Biol Chem, 1988,263(17):8350-8358.

[5] Wu C, Yang R, Zhou J, et al. Production and characterisation of a novel chicken IgY antibody raised against C-terminal peptide from human thymidine kinase 1[J]. J Immunol Methods, 2003,277(1):157-169.

[6] Chen YL, Eriksson S, Chang ZF. Regulation and functional contribution of thymidine kinase 1 in repair of DNA damage[J]. J Biol Chem, 2010,285(35):27327-27335.

[7] 赖永新.细胞质胸苷激酶与喉癌及中医证型相关性研究[D].福州：福建中医药大学,2012.

[8] Vollmer RT, Govindan R, Graziano SL, et al. Serum CYFRA 21-1 in advanced stage non-small cell lung cancer an early measure of response[J]. Clin Cancer Res, 2003,9(5):1728-1733.

[9] 陈连周,李雯,曾文涛,等．肿瘤标志物联合检测对肺癌的诊断价值[J].中华实验外科杂志,2008,25(9):1128-1129．

[10] 牛开元.喉癌、下咽癌患者血清SCCAg、CEA、CA199、CA724和CYFRA21-1含量检测及临床意义[D].合肥：安徽医科大学,2013.

[11] 曹剑霞,李斌,成红霞，等.TK1在恶性肿瘤患者血清中的变化及其临床意义[J].放射免疫学杂志,2013,26(1):97-98.

[12] 冯长生,张杰武.喉癌患者肿瘤标志物的检测意义[J].齐齐哈尔医学院学报,2011,32(19):3088-3089.

[13] 陈蓓,栾信庸,刘春生,等.喉癌喉咽癌患者血清Cyfra21-1水平的研究[J].山东医科大学学报,2000,38(4):388-389.

[14] 王文涛,张国俊.CEA、CYFRA21-1、NSE、CA125联合检测在肺癌诊断中的价值[J].中国实验诊断学,2014,18(2):224-226.

[15] 刘淼,邓玉清,刘平，等.血清SCC-Ag、VEGF、IGF-Ⅱ及TK1联合检测在早期宫颈癌诊断中的价值[J].海南医学,2012,23(13):91-93.

阮宏莹，E-mail: hongyingruan@163.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.12.029

R739.6

B

1002-266X(2015)12-0072-02

2014-10-22)