核酸检测技术在献血者HBsAg筛查中的意义

莫锦政 谢敬文 马伟文 蓝文莉 黎淑贞

（广东省广州市番禺区中心血站 广州511400）

●诊疗经验●

核酸检测技术在献血者HBsAg筛查中的意义

莫锦政 谢敬文 马伟文 蓝文莉 黎淑贞

（广东省广州市番禺区中心血站 广州511400）

目的：回顾性分析献血者HBsAg项目的筛查结果，探讨核酸检测技术（NAT）在献血者血液筛查中的应用价值。方法：采用两个厂家的酶联免疫吸附实验（ELISA）检测试剂盒对献血者开展HBsAg筛查；ELISA检测阴性的献血者标本，采用罗氏诊断cobass201系统进行HBV-DNA检测。结果：在14 642份经过两遍ELISA检测HBsAg阴性标本中，检出13份HBV-DNA阳性，阳性检出率约为0.089%。结论：在经过两次ELISA检测HBsAg阴性的献血者中，仍然存在一定比例的HBV-DNA阳性，给临床输血安全带来较大的风险；血站应用ELISA联合NAT的血液筛查策略，能有效降低临床输血传播HBV的风险。

HBV-DNA核酸检测（NAT）；血液筛查；隐匿性乙型肝炎病毒感染（OBI）；输血风险

乙型肝炎病毒（HBV）感染是一个世界性公众的健康问题，我国是个HBV感染的高流行区域。HBV感染是临床输血安全重要预防焦点之一。虽然血站已经对HBsAg开展两遍检测以及近年来ELISA试剂盒检测技术不断改进，输血传染HBV的风险已经降到较低的水平，但是病毒窗口期、病毒变异、免疫沉默、隐匿性乙型肝炎病毒感染（OBI）等因素造成的漏检仍无法避免。核酸检测技术（NAT）的应用可以弥补酶联免疫吸附实验（ELISA）的不足，更进一步地提高血液安全。近3年来，我国发达地区采供血机构血液筛查也相继引入NAT技术。本站从2012年12月开始引进NAT血液筛查技术，现将应用情况报道如下：

1 材料与方法

1.1 标本来源及处理 本站2012年12月～2013 年6月无偿献血标本17 641份。献血者样本留取3份，1份用EDTA-2K抗凝真空管（广州阳普公司生产）留取5 ml用于血液ELISA检测，2份用无菌EDTA-2K抗凝带分离胶真空管（VACUETTE生产）各留取5 ml，其中紫色盖的用于NAT检测，白色盖的用于留样备用和确证实验。所有标本4 h内离心并分离血浆，用于ELISA和NAT检测的标本置于2～8℃冰箱保存，48 h内进行检测，用于留样备用和确证实验的样本置于-20℃以下冰箱保存。

1.2 试剂及检测 无偿献血标本先进行两遍酶联免疫吸附实验HBsAg筛查。酶联免疫吸附实验试剂盒HBsAg采用厦门新创、DiaSorin（Murex version3. 0）。NAT检测试剂：cobas TaqScreen MPX Test，cobas TaqScreen MPX Control Kit。挑出HBsAg阴性的标本共14 642份进行核酸联合检测HIV-RNA、HCV-RNA和HBV-DNA，6个标本混样到一个POOL，其中每个样本吸样167 μl，对混样阳性POOL进行单个样本（每个样本吸样1 ml）拆分实验，拆分阳性样本送罗氏公司进行HIV-RNA、HCV-RNA和HBV-DNA分项确证实验。

1.3 仪器设备 KH120R低温离心机（KHB）、瑞士哈美顿STAR全自动加样仪、深圳爱康AE150全自动一体机、德国西门子BEHRING全自动酶免后处理机、日本Olympus AU400全自动生化仪、美国Roche Cobas s 201核酸检测系 统（Hamilton MICROLAB STAR全自动混样仪、COBAS Amplipre核酸提取仪及COBAS Taqman核酸扩增检测仪）。

2 结果

在17 641份无偿献血标本中选取14 642份经两遍ELISA检测HBsAg阴性的标本进行NAT实验，检出13份HBV-DNA阳性，阳性率约为0.089%。该13份HBV-DNA阳性样本的乙肝两对半结果分析见表1。

3 讨论

目前，我国大部分采供血机构均采用两种不同试剂进行ELISA平行检测，虽然近年来ELISA试剂盒的灵敏度、特异性不断改进，但是仍无法避免病毒感染窗口期、病毒变异、免疫沉默等因素造成的漏检。有研究表明NAT混样检测，可将HBV、HCV和HIV感染的平均窗口期分别由56 d、70 d、22 d缩短为41 d、12 d和11 d[1～2]，而且不受病毒变异、个体免疫因素影响，使输血感染相关病毒的风险降到最低，极大程度地保障血液安全。本站对14 642份两遍酶联免疫吸附实验HBsAg阴性的标本中，应用NAT

检测技术筛查出13份HBV-DNA阳性，阳性率0.089%。从该13份样本的乙肝两对半结果分析可见，该批样本中大部分可能是隐匿性乙肝炎病毒感染。隐匿性乙型肝炎病毒感染（occult hepatitis B virus infection，OBI）是指除血清转换前的窗口期外，机体存在乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）DNA，但无法检测到乙肝病毒表面抗原（HbsAg）的HBV感染，可伴有或不伴有乙肝病毒核心抗体（抗-HBc）或乙肝病毒表面抗体（抗-HBs）[3]。它是一种特殊形式的乙肝病毒感染，可通过输血、器官移植等传播乙肝病毒，并与慢性肝病、肝细胞肝癌及慢性丙肝发生、发展及治疗有关，具有重要的公共卫生学意义。多数OBI感染者的血循环中HBV-DNA的拷贝数均较低，一般小于105 copies/ml，OBI可有多种临床形式，可以是肝功能正常、HBsAg（－）的“健康人”[4]，可以是急性乙肝感染恢复后[5]，也可能在慢性HBV感染者自发或使用抗病毒药物后出现[6]，所以酶联免疫吸附试验技术无法检测到OBI感染者乙肝病毒表面抗原阳性，因此说明隐匿性乙型肝炎病毒感染的HBV是目前本地区血液安全的主要隐患之一，本地区有必要对献血者常规实行酶免联合核酸检测的筛查策略，以降低临床输血传播HBV的风险。

[1]Busch MP.HIV,HBV,and HCV:new developments related to transfusion safety[J].Vox Sang,2000,78(s2):253-256

[2]王迅,郑岚,张晰,等.核酸扩增技术（NAT）在上海血液筛检中的初步应用[J].中国输血杂志,2003,16(3):157-160

[3]Allian JP.Occult hepatitis B virus infection[J].Transfus Clin Biol, 2004,11(1):18-25

[4]Siva CM,Costi C,Michelon C,et al.Low rate of occult hepatitis B virus infection among antiHBc positive blood donors living in a low prevalence region in Brazil[J].J Infect,2005,51(1):24-29

[5]Yuki N,Nagaoka T,Yamashiro M,et al.Long term histologic and virologic outcomes of acute self limited hepatitis B[J].Hepatology, 2003,37(5):1172-1179

[6]Loriot MA,Marcellin P,Walker F,et al.Persistence of hepatitis B virus DNA in serum and liver from patients with chronic hepatitis B after loss of HbsAg[J].J Hepatol,1997,27(2):251-258（收稿日期：2014-12-15）

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10.13638/j.issn.1671-4040.2015.06.038