黄芪薄层鉴别方法改进分析

沈洁

黄芪为豆科植物膜荚黄芪Bge和蒙古黄芪Hsiao的干燥根，对机体免疫系统影响广泛，免疫活性促进作用明显，并促体液免疫，使单核巨噬细胞所具有的吞噬作用增强，对T、B淋巴细胞吞噬作用有刺激作用，并对自然杀伤细胞相关功能加以促进，使体内组织细胞的存活延工，黄芪多糖F 8可使肿瘤患者和正常人淋巴细胞免疫功能提高，T抑制细胞功能降低，进而将TS细胞抑制免疫反应的作用解除[1-2]。黄芪以多糖、黄酮、皂苷为主要成分，对其行薄层鉴别，并探讨鉴别改进方法，对其临床应用有推动意义。本研究对探讨黄芪薄层鉴别方法的改进措施，现总结如下。

1 材料与方法

1.1 材料 选用黄芪药材、黄芪甲苷对照品作材料，各50份，薄层色谱硅胶G板，分析纯作化学试剂。

1.2 方法

1.2.1 黄芪甲苷对照品 （1）药典方法：在20m L甲醇中加入黄芪粉末3 g，加热回流1 h，完成滤过处理，将滤液在中性氧化铝柱中加入，用100m L 40%甲醇完成洗脱处理，对洗脱液进行收集，蒸干，取水30m L在残渣中加入，促使其达到溶解状态，用正丁醇振摇提取2次，20m L/次，与正丁醇液合并，用水洗涤2次，20m L/次，将水液弃去，蒸干正丁醇液，取甲醇0.5m L加入残渣促其溶解，充当供试品溶液。对照组为黄芪甲苷。运用照薄层色谱法完成相关试验，将上述2种溶液各吸收2μL，于同一硅胶G薄层板上放置，展开剂为三氯甲烷-甲醇-水的下层，行展开处理后，完成取出处理，并晾干，取10%硫酸乙醇溶液喷洒，加热至斑点清晰显色。（2）新拟方法：取3 g黄芪粉末，加40m L水饱和正丁醇，完成加热及回流1 h操作，行滤过处理，用氨试液将滤液洗涤2次，20m L/次，与氨试液合并，备用。用水将正丁醇洗涤2次，20m L/次，将水液弃去，蒸干正丁醇，取甲醇0.5m L在残渣中加入，促其溶解，充作供品溶液。（3）对比2种方法：分析照薄层色谱法试验特点，对新拟方法制备和按药典方法制备的对照品溶液和供试品溶液各吸取2μL，于同一硅胶G薄层板上放置，展开，完成显色处理。

1.2.2 黄芪药材 （1）药典方法：取2 g黄芪粉末，在30m L乙醇中加入，加热回流30m in，蒸干滤液，取0.3%氢氧化钠溶液15m L在残渣中加入促使溶解，完成滤过处理，用稀盐酸对滤液进行调节，使pH值达5～6，振摇提取，对乙酸乙酯液分取，滤液蒸干。取乙酸乙酯1m L对残渣溶解，发挥供试品溶液作用。取黄芪对照药格，采用相同的方法做成对照药材溶液。应用照谱层色普法开展相关试验，上述2种溶液各吸取10μL，于同一硅胶G薄层板上放置，展开，晾干，检视。（2）新拟方法：取氨试液，调节pH至5～6，振摇提取，蒸干，取乙醇乙酯1m L加入残渣溶解，作供试品溶液。（3）方法对比：相较照薄层色谱法试验，对2种方法所获试液可吸取10μL，于同一硅胶G薄层板上放置，展开，显色。

2 结果

采用新拟薄层方法对黄芪甲苷进行鉴别，鉴别有效率为98%，应用药典方法提取供试品溶液最为简便，薄层分离有效率为96%。居较高水平，所获取的黄芪甲苷斑点较为清晰和明显。

3 讨论

黄芪对T细胞功能、淋巴细胞增殖有较大影响，研究显示，黄芪对免疫功能有促进作用，且从黄芪中提取的成分，经筛选，部分促进免疫作用明显，其中作用最强的为F 3，应用后机体可完全免疫，而取白芥素-2、干扰素等应用，仅部分免疫恢复，F 2免疫抑制机能较强，可在肾、心移植中作用免疫抑制剂应用，以对排斥反应进行对抗[3-4]。黄芪对正常机体抗体生长促进作用明显，研究显示，取黄芪100%水煎剂应用，可使免疫早期的抗原与细胞结合，包括T淋巴细胞和抗体分泌细胞，自然杀伤细胞及B淋巴细胞明显增多，故对鉴别黄芪有较高的要求，以为临床用药提供准确的参考依据[5]。

鉴别黄芪，从1990年版至后完善的2005年版，《中国药典》均对薄层色谱鉴别方法有所收集，以黄芪甲苷作对照品，黄芪薄层鉴别方法无明显差异，在含黄芪的中成药中，多引用《中国药典》的质量标准，在药品检验中，依据药典方汉对黄芪和黄芪成分的中成药行多次检验，药点收截的鉴别黄芪薄层色谱的方法，提出供试品溶液的措施较繁琐，特别是柱层析分离时比较浪费时间。依据黄芪化学成分，查找相关文献，反复试验，对黄芪薄层对供试品溶液进行鉴别的方法进行模索，相较药典方法，操作较为简单，黄芪甲苷有明显斑点，具理想的分离效果[6]。

黄芪以皂苷、多糖、黄酮为主要成分。黄酮和皂苷均于正丁醇中溶解，故可直接用正丁醇提取，黄酮类成分用氨试液洗涤去除，多糖类成分用水洗涤移除，黄芪总皂苷粗口即可抽出，用用薄层色谱法完成下一步分离操作，供试品色谱中，可明显显现黄芪甲苷斑点[7-8]。

2005年版《中国药典》黄芪项下，黄芪对照药材实施薄层鉴别的措施有增加，实际为对黄芪中含有黄酮类成分的鉴别，用新拟方法对供试品溶液进行提取，使操作过程简化，方汉较简单，可获得可靠的检测结果。

综上，黄芪薄层色谱鉴别采用新拟方法，相较药典，提取供试品溶液快速、简便，可获得可靠、准确的检验结果，具较高的应用价值。

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