化痰理气口服液的祛痰作用与急毒实验研究*

窦建卫 陈 曦 刘素香 吴文平 徐敏妮 杨利生 白丽君 王显著

西安市中医医院(西安710021)

化痰理气口服液的祛痰作用与急毒实验研究*

窦建卫△陈 曦△刘素香▲吴文平 徐敏妮 杨利生 白丽君 王显著

西安市中医医院(西安710021)

目的：评价化痰理气口服液的祛痰作用并进行急毒实验。方法：采用小鼠酚红祛痰实验观察其祛痰作用，急毒实验测定化痰理气口服液对小鼠的最大给药量。结果：化痰理气口服液能显著增加昆明小鼠气管酚红排泌量，以最大浓度，最大给药体积，测得化痰理气口服液的最大给药量为252 g 生药/kg，相当于推荐人临床用量的504倍。结论：化痰理气口服液具有明显的祛痰功效，且急性毒性小。

化痰理气口服液源于全国名老中医黄保中主任验方蒌贝枳桔二陈汤，由全栝蒌、浙贝母合枳术丸、六君子汤化裁而成，具有健脾益气，化痰散结，宽胸理气，止咳平喘之功效[1-2]。临床疗效确切，本实验通过祛痰的药效学试验评价其作用，为进行院内制剂及新药的开发提供科学依据。并通过观察小鼠经口24 h内多次灌胃给予化痰理气口服液流浸膏所产生的急性毒性反应和死亡情况，为临床安全用药提供依据。

1 小鼠酚红祛痰实验 1.1 材料 1.1.1 药物与试剂：化痰理气口服液(批号：20130301)。盐酸氨溴索沐舒坦片(批号: H 20030360 )，酚红(批号： 20131225)伊文思蓝(批号：WC20090209)，醋酸(批号：20100329)，0.9%氯化钠注射液(批号：A100712031)。

1.1.2 实验动物：72只昆明小鼠，SPF级，体重18～22 g，雌雄各半，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，实验动物生产许可证：SCXK(陕)2012-003号，实验动物使用许可证号：SYXK(陕)2012-005。

1.1.3 主要仪器：Stat Fax 2100型分光光度计(Awareness Technology Inc., Palm City, FL, USA)，JM型电子天平(余姚纪铭称重校验设备有限公司)。

1.2 实验方法[3]1.2.1 绘制标准酚红曲线[4]：准确称取酚红200 μg，加5%碳酸氢钠溶液溶解至2 mL，配成1 mL含100 μg的溶液，然后顺次稀释成每毫升含7.0、5.0、3.0、2.0、1.5、1.0、0.5 μg酚红的溶液，利用分光光度计，测546 nm处的OD值。以酚红剂量为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。根据所测出的OD值，即可由标准曲线查出各鼠酚红的排泌量。

1.2.2 实验步骤:72只昆明小鼠，体重18～22 g，雌性。随机分为6组，即模型对照组、阳性药盐酸氨溴索组(0.27 g/kg)、橘红丸组(4.8 g/kg)化痰理气口服液高、中、低剂量组(3.0 g/kg,1.5 g/kg,0.75 g/kg)，每组12只。各组小鼠按20 mL/Kg灌胃给药，共7d,1d1次。其中模型对照组给等体积蒸馏水。实验前小鼠禁食不禁水12 h，末次给药后0.5 h，各小鼠按剂量20 mL/Kg腹腔注射5%酚红溶液，注射后0.5 h，颈椎脱臼处死小鼠，仰位固定于手术板上，剪开颈前皮肤，剥离气管周围组织，分离气管，剪下甲状软骨下缘至气管分叉处的气管，用0.5 mL 5%碳酸氢钠溶液冲洗气管，连续3次，合并洗出液，用分光光度计测546 nm波长处的光密度(OD)值，并根据实验前制定的标准曲线计算出气管冲洗液中酚红浓度。

1.4 实验结果 1.4.1 酚红排泌的标准曲线:酚红排泌标准曲线为Y=0.1376X+0.0608(R=0.9823)，结果表明标准曲线线性良好，达到准确测定酚红含量的第1步。

1.4.2 化痰理气口服液对小鼠气管酚红排泌的作用:与模型对照组相比，盐酸氨溴索组、橘红丸组、化痰理气口服液高、中剂量组小鼠酚红排泌量明显增多(P<0.01)。提示，盐酸氨溴索、橘红丸组、化痰理气口服液高、中剂量均使昆明小鼠呼吸道酚红排泌量增多，见表1。

表1 化痰理气口服液对小鼠气管酚红排泌的作用

2 急毒实验 2.1 实验材料 2.1.1 受试药物：化痰理气口服液，试验时用流浸膏(批号：20130301)。

2.1.2 试验动物及饲养环境：SPF级KM小鼠40只，体重为18～22 g，雌雄各半。由西安交通大学医学院实验动物中心提供，实验动物生产许可证：SCXK(陕)2012-003号，实验动物使用许可证号：SYXK(陕)2012-005。动物购入实验室后，雌雄分开，分笼饲养于SPF实验室内。动物适应性驯养 3 d。小鼠笼具及托盘清洗消毒后使用。动物饮水、进食自由，饲料为灭菌全价营养颗粒饲料。动物饲养条件：室温23±2oC，相对湿度40%～70%，每天光照12h。

2.2 试验方法[5]取KM小鼠，40只，雌雄各半，分性别随机分为2组，即空白对照组和给药组，每组20只，雌雄各10只。空白对照组灌胃生理盐水，每10 g体重灌胃0.4 mL；给药组灌胃化痰理气口服液流浸膏2.1g生药/mL，每10 g体重灌胃0.4 mL，1日内给药3次，给药间隔6 h。给药首日每次给药后立刻、2 h、4 h、6 h连续观察动物活动情况，包括小鼠的呼吸、运动、反射、眼睑指征、唾液分泌、竖毛、肌张力、大便、尿液、皮肤反应，以及中毒或死亡等情况，见表2。给药后第2d～14d，每天观察一般表现及死亡情况，连续观察14d。7d时称体重，14d称体重(JM型电子天平，余姚纪铭称重校验设备有限公司)后处死小鼠，将中毒死亡动物及处死动物尸检，肉眼观察主要脏器的病变情况，若有异常变化，进行病理组织学观察记录体重变化。

表2 动物急性毒性试验观察表

2.3 试验结果 经口灌胃给予化痰理气口服液流浸膏日剂量合计252 g生药/kg，给药当日小鼠活动减少，大便呈黑褐色，便稀软，次日排便恢复正常。两组小鼠呼吸正常，行为活动与自主活动未见异常，角膜、翻正、牵张反射存在，无流泪、无眼球突出。14d观察期间，动物一般情况良好，摄食正常，体重增长，毛色光滑，尿液无明显变化。整个实验期间未见动物死亡。实验结束时，处死动物，解剖并观察心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、胸腺、甲状腺、气管、食管、胃、十二指肠、结肠、膀胱、睾丸、子宫、卵巢等脏器，未见到明显的病理性改变。实验期间空白对照组和给药组体重增长一致，两组动物分性别进行比较，体重增长未见差异(P>0.05)，结果见表3。提示本实验测得最大给药剂量为252g生药/kg，相当于推荐人临床日用剂量的504倍。

表3 化痰理气口服液急性毒性小鼠体重表

3 讨 论 本实验采用经典的气管酚红排泌量实验来评价化痰理气口服液的化痰作用。酚红是一种显示剂，腹腔注射后，可通过血液循环达到肺部，可通过气管的分泌作用在气管壁检测到酚红，因此酚红排泌量能够反映气管的排痰量。小鼠酚红祛痰实验研究结果表明，化痰理气口服液高、中剂量组小鼠酚红排泌量明显增加，显示出本品具有明显的化痰功效。急毒试验以最大浓度，最大给药体积，测得化痰理气口服液的最大给药剂量为252 g生药/kg，相当于推荐人临床用量的504倍。试验结果表明化痰理气口服液急性毒性小。

[1] 杨利生，徐敏妮，王婷霄，等. 化痰理气口服液配合吸入剂治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期临床研究[J].陕西中医，2015，36(3)：302-304.

[2] 徐敏妮，刘素香.楼贝枳桔二陈汤治疗慢性阻塞性肺疾病痰气交阻证疗效观察[J].陕西中医，2013，33(12)：1573-1574.

[3] 徐叔云,卞入濂,陈 修.药理实验方法学[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2002:1359-1363.

[4] 魏 伟,吴希美,李元建.药理试验方法[M].第4版.北京:人民卫生出版社,2010:1174-1191.

[5] 陈奇主编.中药药理研究方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，2006:107-110.

(收稿2015-07-10；修回2015-08-31)

*陕西省中医药管理局课题(13-LCO32)

@化痰理气口服液 动物，实验 小鼠

R271.11

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.12.055

国家级名老中医黄保中工作室

△西安交通大学医学部药学院(西安 710061)

▲通讯作者