离子色谱法测定活血止痛散(片)中二氧化硫残留量*

艾 芸 李 荣 白 雪 谢志民 张亚锋

西安市食品药品检验所(西安710054)

离子色谱法测定活血止痛散(片)中二氧化硫残留量*

艾 芸 李 荣 白 雪 谢志民 张亚锋

西安市食品药品检验所(西安710054)

目的：建立活血止痛散(片)中二氧化硫残留量的测定方法。方法：离子色谱法,电导检测器,阴离子抑制器,淋洗液为20mmol/L氢氧化钾溶液,流速1mL/min,柱温30℃。结果：硫酸根进样量在12.5ng～1000ng内,峰面积积分值与进样量呈良好的线性关系(r=0.9994)；加样回收率为93.2%,RSD为2.89%(n=9)；最低检测限0.3μg/g,最低定量限0.8μg/g。结论：该方法简便、准确度高,可用于该制剂中二氧化硫残留量的控制方法。

我国传统中药炮制中，使用硫磺熏蒸的方法使中药材、中药饮片洁白、防虫、防腐，但药材中残留的二氧化硫对人体健康和中药材的功效会造成一定影响，实验中关于这方面的报道屡见不鲜[1]。中国药典对中药材、中药饮片中的二氧化硫残留量已有明确规定，但关于中成药中二氧化硫残留量的研究尚少见，且对于安全量也无规定[2]。活血止痛散(片)是2012年国家药品计划抽验品种，由当归、三七、制乳香、冰片、土鳖虫、煅自然铜组成，在临床中有一定的使用范围[3]。本文为考察该药二氧化硫残留情况，利用离子色谱法对成品中的残留量进行测试观察，为该药的安全使用提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪 器 ICS-5000型离子色谱仪，变色龙色谱工作站，阴离子色谱柱AS19(4×250mm)，保护柱AS19(4×50mm)均为戴安公司产品。

1.2 试剂与试药 硫酸根标准溶液：批号 GBS(E)080523，全国化工标准物质委员会标准物质研究开发中心提供，1000mg/L；亚硫酸钠：98%分析纯；盐酸：优级纯；蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性 采用离子色谱法，电导检测器，阴离子抑制器，阴离子色谱柱，淋洗液为20mmol/L氢氧化钾溶液，流速1mL/min，柱温30℃。理论塔板数按硫酸根峰计算应不低于6000。

2.2 对照品溶液制备 取硫酸根标准溶液，加水分别制成每1mL含硫酸根0.5μg、5μg、10μg、20μg、30μg、40μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取供试品粉末约10g(过三号筛)，置三颈圆底烧瓶中，加水50mL，摇匀，加入5mL盐酸，迅速密塞，接通水蒸气蒸馏，以3%过氧化氢溶液20mL为吸收液，50min收集馏出液近100mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置3h，即得。

2.4 标准曲线与线性范围 精密吸取对照品溶液各25μL，注入离子色谱仪，按上述色谱条件测定硫酸根峰面积，以峰面积为纵坐标、进样量(ng)为横坐标，计算回归方程得y=0.2068x-0.0868，r=0.9994。表明在该系统条件下，硫酸根进样量在12.5ng～1000ng范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系。

2.5 进样精密度 精密吸取上述对照品溶液(40μg/ml)25μl，各进样6次，按上述色谱条件测定保留时间和峰面积，计算变异系数。结果保留时间RSD为0.03%，峰面积RSD为2.14%，表明系统精密度良好。

2.6 方法重现性 精密称取活血止痛散粉末8.2524g、8.0580g、8.3327g、8.2659g、8.3346g、8.3443g，按上述方法测定硫酸根含量，依照(SO2/SO4=0.6669)换算成样品中二氧化硫量。结果RSD为0.98%，表明本方法的重现性良好。

2.7 中间精密度 由相同实验室的不同操作者在不同时间、不同条件下，按照重现性考察项下方法测定。结果三位不同实验人员测定的RSD为0.24%。

2.8 溶液稳定性 取硫酸根标准溶液，加水制成每1mL含硫酸根40μg的溶液。分别于0h、1h、2h、4h、8h、12h、16h、20h和24h精密吸取25μL，注入离子色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。结果RSD为2.66%，表明硫酸根溶液在24h内稳定。

2.9 干扰试验 称取阴性样品8g，按照重复性试验方法记录色谱图，并与对照品、供试品色谱对照，结果(见图1)显示阴性供试品溶液色谱中在与硫酸根标准溶液色谱峰相应的位置上无明显色谱峰出现，说明处方中其它组分不影响硫酸根的含量测定。

2.10 加样回收试验 精密称取已测得二氧化硫含量(186.2μg/g)的活血止痛散粉末3.4972g、3.4500g、3.5043g、3.5003g、3.4321g、3.4580g、3.3421g、3.3249g、3.3423g，置三颈圆底烧瓶中，每3份分别加入亚硫酸钠溶液(每1mL含亚硫酸钠0.856mg)1mL、2mL、3mL，加水50mL，摇匀，照重现性方法测定，结果平均加样回收率为93.20%，RSD为2.89%。

2.11 系统耐用性考察 系统适用性试验证明本系统在不同品牌的色谱柱、不同柱温(25℃～35℃)、不同流速(0.8mmol/L～1.2mmol/L)、不同淋洗液浓度(18mmoll/L/min～22mmol/L)条件下硫酸根分离良好、峰形对称，可用于含量测定，理论塔板数为6858～9098，故确定理论塔板数以硫酸根峰计不得低于6000。

2.12 蒸馏时间确定 取活血止痛散粉末8.0169g、8.0122g、7.6023g、7.9000g、8.0160g，照上述方法蒸馏，控制蒸馏时间分别为20min、30min、40min、50min、60min收集馏出液近100mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置3h。精密吸取上述溶液各25μL，注入离子色谱仪，按上述色谱条件测定二氧化硫的含量。结果(见图2)表明蒸馏时间对样品提取效果影响显著，当蒸馏时间为50min以上时提取率趋于平稳。为了缩短检验周期，本实验采用蒸馏时间为50min。

2.13 检测限和最低定量限的确定 取阴性供试品粉末(过三号筛)8.0003g，照重复性考察项制备阴性供试品溶液。精密吸取对照品溶液(每1mL含硫酸根2μg)1mL，分别置50mL量瓶和20mL量瓶中，加阴性供试品溶液稀释至刻度，照上述色谱条件测定，以信噪比为3时的含量为最低检测限，以信噪比为10时的含量为最低定量限。结果该方法二氧化硫的最低检测限为0.3μg/g、最低定量限为0.8μg/g。

2.14 样品限度的制定 中国药典规定山药等11味药材及其饮片中二氧化硫残留量不得超过400mg/kg，其他中药材及饮片二氧化硫残留量不得超过150mg/kg[2]。活血止痛散(片)处方中不含限度为400mg/kg的11味中药材，确定本品中二氧化硫残留量不得超过150mg/kg。

2.15 样品测定结果 活血止痛散33批次样品不合格的有14批次，占42.42%；活血止痛片54批次样品不合格的有37批次，占68.52%。说明原料中的二氧化硫残留仍有相当一部分残留在成品中。

3 讨 论

本实验依据我国2010年版的《中国药典》有关中药材及其饮片二氧化硫的含量测定，采用水加盐酸蒸馏，碘滴定的容量法[3]。容量法仪器设备简单，适合多数实验室操作，但该法未采用任何保护剂，未能改善蒸馏液中亚硫酸根的不稳定性，受环境、人员、时间等因素干扰严重，故滴定结果可靠性较差。另有文献报道用碱性溶液提取-离子色谱法测定中药中二氧化硫残留[4]。该法采用甲醛为保护剂，很大程度上改善了亚硫酸根的不稳定性，且超声提取方法用时较蒸馏法短，但活血止痛散(片)为复方制剂，且含矿物药，采用超声方法提取液成分复杂，离子色谱干扰严重，无法测得亚硫酸根。文献报道用水加盐酸蒸馏，以双氧水作为蒸馏液中亚硫酸根的吸收液，将其氧化为硫酸根，经离子色谱分析硫酸根含量，方法简便快速、干扰少[5]。水蒸气蒸馏-离子色谱法中供试液杂质较少，离子色谱干扰大幅度降低，且该法利用双氧水作为吸收剂，将蒸馏液中亚硫酸根氧化为性质更为稳定的硫酸根作为检测对象，极大降低了环境、人员、时间等因素对检测结果的影响，确保了结果的准确性。故本实验采用水蒸气蒸馏-离子色谱法测定活血止痛散(片)中二氧化硫的残留量。

按活血止痛散处方和供试品溶液制备方法折算，取土鳖虫粉末2.0g、三七粉末0.7g、煅自然铜粉末1.0g，照上述方法测定，结果显示煅自然铜对二氧化硫含量测定影响甚微，4个生产企业的土鳖虫、三七原料中二氧化硫残留量均极低。按活血止痛散处方和供试品溶液制备方法折算，取当归粉末3.5g，照上述方法测定，结果显示4个生产企业的当归原料材中二氧化硫残留量均极低，而药材市场购得三批当归饮片中二氧化硫含量均极高，初步推测活血止痛散(片)中残留的二氧化硫主要来源于当归饮片原料。本文建立了水蒸气蒸馏-离子色谱法测定活血止痛散(片)中二氧化硫的残留量，方法快速、准确，灵敏度高，干扰少，准确度高。目前关于中成药中二氧化硫残留量的研究还比较少，此法可用于控制该品种中二氧化硫的残留。

[1] 孙艳平，李 涛，顶空气相色谱-火焰光度检测器检测山药中的二氧化硫[J].陕西医学杂志2010，39(8):1024-1025,1040.

[2] 国家药典委员会.中国药典[S].2010年版第一增补本.北京：中国医药科技出版社，2010：262.

[3] 国家药典委员会.中国药典[S].北京：中国医药科技出版社，2010：956，附录61.

[4] 王欣美，夏 晶，王 柯，等.碱性溶液提取-离子色谱法测定中药中二氧化硫残留[J].中国中药杂志2011，39(19):2656-2658.

[5] 刘海静，杨瑞瑞，袁向辉，等.离子色谱法测定当归中二氧化硫残留量[J].药物分析杂志2011，31(4):752-754.

(收稿2015-01-22；修回2015-03-03)

* 国家药品计划抽验项目(中2012102046038)

色谱法 二氧化硫 @活血止痛散(片)

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.06.047