小儿感冒颗粒的质量标准研究

杨 堃

(重庆市食品药品检验所，重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆，401121)

小儿感冒颗粒的质量标准研究

杨 堃

(重庆市食品药品检验所，重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆，401121)

目的：建立小儿感冒颗粒的质量标准。方法：用TLC法鉴别了小儿感冒颗粒中广藿香、菊花、连翘和用HPLC法测定了小儿感冒颗粒中连翘苷的含量；色谱柱为DiamonsilTMC18柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)，柱温为30 ℃，以乙腈-水(24∶76)为流动相，检测波长为202 nm，流速1.0 mL/min。结果：在TLC色谱中均能检出百秋李醇、菊花、连翘苷；且特征斑点明显，阴性无干扰；连翘苷在0.023 62 μg～0.590 5 μg范围内呈良好的线性关系，r=0.99999(n=6)，平均回收率为99.06%，RSD=1.5%.结论：方法简便、准确、重现性好；可用于小儿感冒颗粒的质量控制。

小儿感冒颗粒；质量标准；TLC；HPLC；连翘苷

小儿感冒颗粒是由广藿香、菊花、连翘、地黄、白薇、地骨皮、石膏、大青叶、板蓝根等共10味药组成的复方制剂，收载于《中华人民共和国药典》2010年版一部[1]，功用为疏风解表，清热解毒。原标准仅收载大青叶、板蓝根的薄层色谱鉴别。本文在既往研究的基础上，本文采用薄层色谱法对方中广藿香、连翘、菊花进行了定性鉴别，并采用高效液相色谱法制定了方中连翘(以连翘苷计)含量测定方法，为更好地控制小儿感冒颗粒的质量提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 小儿感冒颗粒(批号为：20120206、20120207、20120208，云南白药集团股份有限公司生产，广藿香、连翘、菊花等处方中的各味药材由太极集团重庆桐君阁药厂有限公司提供。百秋李醇(批号：772-200008)、菊花(批号：121384-200801)、连翘苷(批号：110821-200805)，购自中国药品生物制品检定研究院。

1.2 仪器 高效液相色谱仪：Agilent HP1100(包括四元泵，柱温箱，自动进样器，二级管阵列检测器)；KQ3200B型超声波清洗器(功率500W，频率40KHZ)。

1.3 试药 硅胶G(化学纯，青岛海洋化工厂)，其余试剂、试药均为分析纯。

2 方法

2.1 薄层鉴别

2.1.1 广藿香的薄层鉴别[2]取本品24 g，研细，加乙醚适量，浸泡24 h以上，时时振摇，滤过，滤液低温蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取百秋李醇对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液20～30 μL，对照品溶液1～2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60 ℃)-乙酸乙酯-冰醋酸(95∶5∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰。(见图1)

图1 小儿感冒颗粒广藿香的TLC鉴别图谱

注：1.阴性对照(缺广藿香)25 μL；2.样品(云南白药集团，批号：20120206)20 μL；3.样品(云南白药集团，批号：20120207)20 μL；4.样品(云南白药集团，批号：20120208)20 μL；5.百秋李醇对照品2 μL

2.1.2 菊花的薄层鉴别[3-4]取本品6 g，研细，加甲醇30 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用稀盐酸调pH值至2～3，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取菊花对照药材1 g，加稀盐酸1 mL和乙酸乙酯20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液1～2 μL，对照药材溶液2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(7∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇试液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且阴性对照无干扰。(见图2)

2.1.3 连翘的薄层鉴别[5-7]取本品6 g，研细，加甲醇30 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干。残渣加0.2%氢氧化钠溶液20 mL，加热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20 mL；取正丁醇提取液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次30 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加0.2%氢氧化钠溶液20 mL，加热使溶解，再用三氯甲烷振摇提取3次，每次20 mL；合并三氯甲烷提取液，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取连翘苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液10 μL～15 μL和对照品溶液10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(9∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰[8]。(见图3)

图2 小儿感冒颗粒菊花的TLC鉴别图谱

注：1.阴性对照(缺菊花)2 μL；2.样品(云南白药集团，批号：20120206)1 μL；3.样品(云南白药集团，批号：20120207)1 μL；4.样品(云南白药集团，批号：20120208)1 μL；5.菊花对照药材3 μL

图3 小儿感冒颗粒连翘的TLC鉴别图谱

注：1.阴性对照(缺连翘)；2.样品(云南白药集团，批号：20120206)；3.样品(云南白药集团，批号：20120207)；4.样品(云南白药集团，批号：20120208)；5.连翘苷对照品

2.2 含量测定

2.2.1 药味的选择 按处方中君臣药味的要求，我们先对方中广藿香[9-10](百秋李醇计)的GC含量测定[11]方法进行了研究，其含量太低，无测定意义，故对连翘[12](以连翘苷计)含量测定方法进行了研究，通过试验考察，建立了HPLC含量测定方法。

2.2.2 色谱条件[13]色谱柱：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；流动相：乙腈-水(24∶76)；检测波长：202 nm；柱温30 ℃；流速：1.0 mL/min；理论塔板数：按连翘苷峰计应不低于3 000。

2.2.3 对照品溶液的制备 精密称取在110 ℃干燥至恒重的连翘苷对照品适量，加50%甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。

2.2.4 供试品溶液的制备[14-15]取装量差异项下的本品，研细，取约6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率500 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，蒸干，残渣加适量70%乙醇使溶解，加在中性氧化铝柱(100～200目，5 g，内径1.5 cm)上，用70%乙醇溶液100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，转移至5 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。精密量取10 μL，进样，记录色谱图[6-9]。

2.2.5 阴性对照试验 取缺连翘的阴性对照约6 g，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液，注入液相色谱仪，结果在连翘苷对照品出峰时间处无对应色谱峰出现，表明阴性对照无干扰。(见图4)

图4 小儿感冒颗粒HPLC图

注：1.连翘苷对照品；2.小儿感冒颗粒样品；3.阴性对照(缺连翘)

2.2.6 测定波长的选择 我们用二级管阵列检测器分别对连翘苷对照品、小儿感冒颗粒样品进行光谱分析，结果发现202 nm为连翘苷最大吸收，且其他成分峰在此处吸收值很小，故选用202 nm作为测定波长。

2.2.7 线性范围 分别精密吸取连翘苷对照品溶液(浓度0.023 62 mg/mL)1 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL，注入液相色谱仪测定峰面积，结果见表1。

表1 线性关系试验结果

以连翘苷峰面积(A)为纵坐标，连翘苷对照品进样量(g)为横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得回归方程：y=9692.2x+17.929r=1。

上述结果表明，连翘苷对照品进样量在0.023 62 μg～0.590 5 μg的范围内，与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.8 精密度实验 精密吸取连翘苷对照品溶液(浓度0.023 62 mg/mL)10 μL，重复进样5次，按上述色谱条件测定峰面积，结果见下表。试验结果表明，仪器精密度良好。

表2 仪器精密度试验结果

2.2.9 稳定性试验 分别吸取常温下放置的同一供试品溶液10 μL，于0、2、4、8、12 h进样，测定，结果见下表。试验结果表明，供试品溶液至少在12 h内稳定。

表3 供试品溶液稳定性试验结果

2.2.10 重复性试验 取同一批号样品(批号20120207)，按含量测定项下供试品制备方法平行制备5份供试品溶液，并测定含量，结果见下表。试验结果表明，方法重复性良好。

表4 重复性试验结果

2.2.11 回收率试验 取本品(批号20120207，已测定连翘苷含量为0.046 0 mg/g)3 g，共6份，精密称定，分别精密加入连翘苷对照品溶液(5.905 μg/mL)25 mL，称定重量，同供试品溶液的制备方法制备，并按拟订的色谱条件测定连翘苷含量，按下式计算回收率，结果见表5。试验结果表明，加样回收率均在95%～105%间，符合有关的技术要求。

表5 加样回收试验结果

2.2.12 方法耐用性试验 按正文拟订的含量测定方法，分别对样品2采用不同牌号的色谱柱，分别测定连翘苷的含量，计算，结果见表6。试验结果表明，方法耐用性试验良好。

表6 方法耐用性试验结果

2.2.13 样品测定 取样品3批，按上述色谱条件和方法测定连翘苷的含量，测定结果见表7。

表7 小儿感冒颗粒中连翘苷的含量测定结果

3 讨论

在连翘的TLC鉴别方法中，若采用含量测定的方法处理样品，所得样品中连翘苷的斑点显色不理想，整个样品斑点底色较重，故采用的是正文中样品处理办法，结果很好。我们曾选用连翘同法制备对照药材溶液，结果显示：其在与样品相应位置上的斑点显色不清晰，较小，且阴性对照有个别斑点干扰，故放弃。

样品含量测定的处理方法参照文献经过试验摸索，曾对连翘苷的提取方法考察了:TLC法中样品处理方法；直接甲醇超声提取进样；和甲醇超声提取蒸干后，水溶解再用三氯甲烷提取等方法。所得样品存在杂质峰较多，主峰与杂质峰不能分离，重现性不好和回收率低等问题。同时我们考察了正文方法中甲醇超声时间，过柱用中性氧化铝用量，洗脱溶剂的浓度和用量，最终确定的正文方法能将样品中所含的连翘苷提取完全，回收率平均在100%上，且样品溶液色谱图中连翘苷色谱峰分离度好、峰形尖锐、对称性好，理论板数大于3 000，各项参数能满足HPLC的相关要求。

小儿感冒颗粒为儿科常用药，有有糖型和无糖型两种剂型；且生产厂家众多，包装规格也不同，我们当时选取市面上上述两种剂型和不同厂家规格的共18批次进行试验，按此质量标准，均能检出；此标准可行。

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[2]韩桂茹，董占军.小儿感冒颗粒的薄层鉴别和定量测定研究[J].中成药，2004，26(11):445-446.

[3]田雅琴.HPLC法测定小儿感冒颗粒中绿原酸及连翘苷含量[J].中成药，2009,31(12):484-485.

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[10]张小龙，孙晓，马新飞.气相色谱法同时测定小儿感冒颗粒中百秋李醇、薄荷脑、α-蒎烯、β-蒎烯的含量[J].首都医药，2014(22):311-312.

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(2014-04-26收稿 责任编辑：张文婷)

Study of Quality Standard of Xiao’er Ganmao Granules

Yang Kun

(ChongqingInstituteforFoodandDrugControl，ChongqingEngineeringresearchCenterforPharmaceuticalProcessandQualityControl401121,China)

Objective:To establish the quality standards for Xiao’er Ganmao Granules. Methods: Pogostemonis herba, chrysanthemi flos, and forsythiae fructus were identified with TLC. Phillyrin was meatured by HPLC. DiamonsilTMC18(5 μm，4.6 mm×250 mm) column was used. The column temperature was at 30 ℃. Acetonitrile-water (24∶76) was used as a mobile phase. The detection wavelength was at 202 nm. The flow rate was 1.0 mL/min. Results: Patchouli alcohol, chrysanthemi flos, and forsythiae could be detected by TLC, with the feature spot obvious, negative interference-free. Phillyrin showed a good linear relationship at the range of 0.02362～0.5905μg，r=0.99999 (n=6)，The average recovery rate was 99.06% and RSD was 1.5%. Conclusion: TLC method proves to be simple, accurate and with good reproducibility, thus can be used for quality control of Xiao，er Ganmao Granule.

Xiao’er Ganmao Granules; Quality standards; TLC; HPLC; Phillyrin

杨堃，重庆市食品药品检验所中药室，E-mail:yk418@tom.com

R284.1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.03.032