消栓饮对创伤性肢体深静脉血栓大鼠血浆TXB2/6-Keto-PGF1α的影响

汪 能，王 勇*，张 栋，黄永松，胡 拥

（1.湖南中医药大学，湖南 长沙410208；2.湖南中医药大学第二附属医院，湖南 长沙410005）

深静脉血栓(deep venous thrombosis，DVT)指在深静脉内异常凝结的血液，使静脉血管流通不畅或阻塞，血液回流受阻，从而引起深静脉的功能障碍。其发病率较高，危害性大，可引起肺栓塞等严重并发症。 骨科手术后发病率尤高，有关文献报道：在没有采取任何防治措施的临床骨科术后，DVT 的发生率可能高达40%～60%[1]。 在目前的中医领域中，对于DVT 的防治并没有统一且规范的方案。王勇教授依据丰富的理论知识和多年的临床经验，在中医辨证论治思想的指导下， 拟方消栓饮用于防治下肢DVT 形成，取得的临床疗效颇佳[2]，并进行了关于消栓饮对DVT 形成的血液流变学影响实验研究[3]。 为进一步明确消栓饮的作用机制，设计本实验观察其对DVT 模型大鼠血浆血栓素B2（TXB2）及6-酮-前列腺素F1α（6-Keto-PGF1α）的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 选取健康的SPF 级SD 雄性大鼠40 只，体质量（240±10）g，实验动物许可证：SYSK（湘）2013-0005，质量合格证：NO.43004700005816，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。

1.1.2 实验药物 （1）消栓饮组成：黄芪50 g，白芍30 g，丹参30 g，茯苓10 g，桂枝6 g，当归尾10 g，川牛膝15 g，陈皮10 g，枳壳10 g，大腹皮15 g，泽泻10 g，猪苓10 g，甘草6 g，由中药煎药机统一煎制； 将中药液经恒温水浴制作成120 mL 浓缩药液，其药液浓度为1.77 g/mL，封包备用。 （2）低分子肝素钠注射液，昆明积大制药股份公司，0.4 mL：4 250 IUaXa，生产批号：140301、140501。

1.1.3 主要设备及试剂 （1）TXB2及6-Keto-PGF1α免疫试剂盒 （长沙丽欣生物有限公司， 批号：201405）；（2）Bio-RADiMark 酶标仪 （美国伯乐公司）；（3）无水石膏绷带、显微手术器械、EDTA 管（均由湖南中医药大学第二附属医院提供）。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 大鼠常规饲养1 周后开始手术造模。 参照王兵[4]造模方法：将大鼠左侧腹股沟内侧脱毛，固定消毒、铺单后，将大鼠用10%水合氯醛2 mL 腹腔注射麻醉后，采取仰卧位腹腔注射麻醉，沿大鼠左侧腹股沟内侧纵形切开1.5 cm 的伤口，分离组织显露股静脉血管，再使用12.5 mm 全齿蚊氏钳夹紧(1 格力量)股静脉血管不同的3 处位置（相隔2 mm）各3 s，钳夹后，全层关闭伤口，用髋人字形石膏外固定双大腿，切口处行石膏开窗；假手术组不钳夹股静脉，余步骤相同，造模后25 h 后拆除石膏。 30 只大鼠造模后，其中27 只切口暴露后，肉眼下可见股静脉管腔变粗，色泽变深，呈紫黑色，血栓充满其中，长约4～8 mm，可判断为成功的深静脉血栓模型，余3 只未见明显血栓形成。

1.2.2 实验分组 健康SPF 级SD 大鼠40 只，10只作为假手术组（A 组），余下30 只造模。 将造模成功27 只大鼠随机分为蒸馏水组（B 组）、低分子肝素钠组（C 组）、消栓饮组（D 组），每组9 只。

1.2.3 给药方法 根据动物与人体表面积比值表[5]，计算出D 组予以消栓饮浓缩药液18.28 g/（kg·d）灌胃，约为2.48 mL；A 组与B 组予以等体积蒸馏水灌胃；C 组以低分子肝素钠注射液， 每支原液体积0.4 mL(4 250 IUaXa)，用生理盐水稀释为20 mL，每次按366.43 IU/（kg·d)，经腹壁皮下注射给药。 给药时间从造模后第2 天开始，均为1 次/d，持续用药7 d。

1.2.4 指标检测 在给药治疗7 d 后采用断尾取血法取血[6]，取血1.0 mL 于EDTA 管中，离心20 min（2 000～3 000 转/min)分离血浆，采用酶联免疫法测定TXB2及6-Keto-PGF1α。

1.3 统计学分析

采用SPSS 17.0 统计分析软件对数据进行统计学分析，计量资料以“±s”表示；以正态性分布检验和方差齐性检验，采用方差分析进行组间比较，采用t检验进行组内比较，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠一般状况

A 组大鼠可见精神状态较好，毛色纯白光滑，四肢活动灵活，饮食正常。 造模后各组DVT 大鼠均精神欠佳，呼吸加快，左足肿胀、肢端皮肤颜色青紫，患肢活动减少， 皮毛欠光滑。 给药7 d 后，C、D 组较B组的大鼠状态可见好转，食欲增加，后肢的血运明显改善，患肢活动灵活。 以上提示消栓饮能改善DVT大鼠的一般状态和局部血循环。

2.2 各组大鼠TXB2、6-Keto-PGF1α 表达水平比较

实施了造模手术后，B、C、D 各组大鼠血浆中TXB2含量较A 组均有明显增加，6-Keto-PGF1α表达则明显下降(P＜0.01)。 用药7 d 后与同组用药前比较，经治疗的C 组和D 组血浆中TXB2含量及TXB2/6-Keto-PGF1α明显下降(P＜0.05)， 而6-Keto-PGF1α含量有所增高(P＜0.05)；与7 d 后B 组比较，C 组和D 组 血 浆 中TXB2含 量 及TXB2/6-Keto-PGF1α明 显降低(P＜0.01)，6-Keto-PGF1α含量有所增高(P＜0.05)；C 组 与D 组 比 较，TXB2、6-Keto-PGF1α差 异 无 统 计学意义(P＞0.05)。

表1 各组大鼠TXB2、6-Keto-PGF1α 表达水平比较 （±s）

注：与A 组比较△△P＜0.01；与同组用药前比较○P＜0.05；与同时间点B 组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

组别A 组B 组C 组D 组n 10 9 9 9 TXB2(ng/L)用药前 用药7 d 后343.9±10.5 346.4±11.6 510.7±18.7△△ 489.9±17.7△△507.7±20.6△△ 420.3±21.6○**509.3±17.3△△ 424.5±27.9○**6-Keto-PGF1α(ng/L)用药前 用药7 d 后164.3±14.7 165.9±15.4 112.7±15.2△△ 127.5±15.6△△111.6±14.6△△ 142.7±11.8○*110.2±12.6△△ 144.6±12.6○*TXB2/6-Keto-PGF1α用药前 用药7 d 后2.1±0.2 2.1±0.2 4.6±0.5△△ 3.9±0.4△△4.6±0.6△△ 3.0±0.3○**4.7±0.6△△ 3.0±0.4○**

3 讨论

近年来，DVT 的防治备受关注。 血流缓慢、血管内膜损伤、血液高凝状态是学界公认的DVT 产生的高危因素，而血管内膜的损伤被认为是最主要的因素。 本实验造模法，利用蚊氏钳直接钳夹大鼠分离后的左侧股静脉，固定制动，模拟临床手术时DVT形成的部分条件，建立急性创伤性肢体深静脉血栓形成的大鼠模型，可以较好地反映骨科临床肢体创伤固定后形成DVT 的病理变化过程。

前列环素（PGI2）主要产生于血管内皮细胞，可舒张血管、抑制血小板黏附和凝集，抵抗血栓的形成。 血栓素A2（TXA2）主要由血小板产生，具有收缩血管和促血小板聚集的作用。 两者在正常生理状态下保持动态平衡，相互拮抗、相互协调，共同维持血管收缩性和血小板正常功能，使凝血状态维持平衡。PGI2和TXA2极不稳定，生成后便转化成稳定的代谢产物6-Keto-PGF1α和TXB2，因此可通过检测6-Keto-PGF1α和TXB2反映PGI2和TXA2的变化[7-8]。 临床报道，DVT 病人存在着的TXA2/PGI2平衡失调[7]，因此研究药物对两者平衡的影响，在防治DVT 方面有着重要的意义。

下肢深静脉血栓形成可归类为中医学中“脉痹”或“肿胀”等范畴，古籍中的相关记载颇多。 王勇教授认为，此病主要由外伤、久卧、产后等病因致气血逆乱，瘀血阻滞脉络，营血回流不畅，水津外溢，聚而为湿，流注下肢发为肿胀；确定了以益气养血、活血化瘀为主，佐以利湿消肿的治疗原则，拟方消栓饮取得较好的临床疗效。 方中重用黄芪为君药，甘温益气，使气旺以助血行；芍药与桂枝配伍，养血和营，温经通痹；丹参、当归尾、牛膝等祛瘀通脉，补血活血；茯苓、猪苓、泽泻等利水渗湿；陈皮、枳壳等行气消胀。 全方配伍严谨，使气血生化有源，气行瘀化；水湿清利有常，脉通水行。

低分子肝素钠具有剂量单一、疗效肯定、用药安全的优点，是目前国内外学者公认的预防DVT 的首选药物[10-11]，故本研究将其作为阳性对照药物，意在通过对比揭示消栓饮对模型大鼠DVT 形成的影响机制。 从本次实验结果可以看出，用药前各组的TXB2值明显高于A 组，这说明静脉血栓形成时，血液中TXB2水平会迅速增高。 一周后，B 组的TXB2水平略有下降，推测其有自愈倾向。 而D 组用药后的TXB2值又显著低于B 组（P＜0.05），与C 组比较无明显差异（P＜0.05），说明通过消栓饮治疗可以明显地降低血液中TXB2的含量，使其更加趋于正常。同样，血栓形成后6-Keto-PGF1α值明显降低，通过消栓饮和低分子肝素钠的治疗可以升高血液中6-Keto-PGF1α含量。

本次研究结果显示，造模后TXB2升高而6-Keto-PGF1α降低，使TXB2/6-Keto-PGF1α明显高于正常组，与文献报道一致[8]。 这表明在静脉血栓形成过程中以TXA2的缩血管、血小板聚集作用为主。 经消栓饮治疗后TXB2/6-Keto-PGF1α趋向正常， 表示消栓饮治疗能有效地改善TXA2/PGI2平衡失调， 这时以PGI2为主的舒张血管、抑制血小板黏附和凝集作用为主，从而加速血栓的溶解和吸收，并防止新的血栓形成，其作用机制可能与低分子肝素钠相似。 根据实验结果可以推测， 血液中PGI2/TXA2平衡失调是引起DVT 的基础之一。 因此， 对于骨科术后及DVT 患者，在常规检测的基础上进行血浆TXB2、6-K-PGF1α测定， 对预测 DVT 发生及观察药物对DVT 的治疗作用有重要意义。

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