不同程度肺炎患儿分泌型白细胞蛋白酶抑制剂与核因子-κB水平变化及临床意义

薛继红，冯 霞，冯孝强

(延安大学附属医院儿科二病区 716000)



·论 著·

不同程度肺炎患儿分泌型白细胞蛋白酶抑制剂与核因子-κB水平变化及临床意义

薛继红，冯 霞，冯孝强

(延安大学附属医院儿科二病区 716000)

目的 探讨不同程度肺炎患儿分泌型白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)与核因子-κB(NF-κB)水平变化及其临床意义。方法 选择66例支气管肺炎患儿，分为普通肺炎组和重症肺炎组，分别在入院24 h内(治疗前)和治疗5 d后(治疗后)检测SLPI水平和NF-κB表达水平，同时选择20例健康儿童作为健康对照组。结果 治疗前，重症肺炎组和普通肺炎组患儿SLPI水平明显低于健康对照组，NF-κB水平明显高于健康对照组(P<0.05)。治疗后，重症肺炎组和普通肺炎组SLPI水平较治疗前显著升高，NF-κB水平显著降低(P<0.05)，但重症肺炎组的SLPI水平仍低于健康对照组，NF-κB水平仍高于健康对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，普通肺炎组的SLPI水平和NF-κB水平与健康对照组差异无统计学意义(P<0.05)。结论 对肺炎患儿早期检测SLPI及NF-κB水平，有助于重症肺炎的早期诊断、治疗和预后。

肺炎； 分泌型白细胞蛋白酶抑制剂； 核因子-κB

肺炎是儿童的常见病、多发病，其中重症肺炎目前仍是导致我国5岁以下儿童死亡的主要原因。其发病机制除病原菌对气管、支气管及肺组织的直接侵袭导致通换气功能障碍外，大量炎性因子及毒素的释放也参与其中，导致免疫性损伤。分泌型白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)也叫抗白细胞蛋白酶或分泌性蛋白酶抑制剂，为黏膜上皮细胞分泌的非糖基化单链多肽蛋白，是一种嗜中性弹性蛋白酶阳离子抑制剂，具有抗菌、抗病毒、抗炎和诱导细胞增殖分化等多方面生物学活性。在炎性损伤及抗炎性损伤的平衡中起重要作用[1]。研究表明,核因子-κB(NF-κB)具有广泛的生物学活性,激活后通过调控细胞因子、黏附分子、趋化因子等多种基因的表达,参与机体感染、免疫反应、细胞增生与凋亡及肿瘤的发生等许多生物学过程[2]。本研究通过检测不同程度肺炎患儿SLPI与NF-κB水平的变化，探讨其在肺炎病程中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择本科室2013年10月至2014年10月住院确诊为支气管肺炎的患儿，共66例，其中男 34 例，女 32 例，年龄 1.5 个月至12 岁，平均 3.6岁。根据临床表现分为普通肺炎组(n=36)和重症肺炎组(n=30)，重度肺炎诊断参照中华医学会儿科分会呼吸学组制定的诊断标准[3]。所有患儿均排除器质性心脏病、梅毒性心脏病、风湿性疾病及免疫性疾病。选择同期门诊健康体检儿童20例作为健康对照组。各组性别、年龄、体质量差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 SLPI和NF-κB检测 66例患儿分别在入院24 h内(治疗前)和治疗后5 d(治疗后)，健康对照组于门诊健康体检当天抽取空腹静脉血3.5 mL，其中1.5 mL分离血浆后用于双抗体夹心ELISA法检测SLPI；另外2 mL用于制备外周血单个核细胞(PBMC)，采用流式细胞仪检测PBMC中NF-κB表达水平。检测试剂均由美国Santa Cruz公司提供。

1.2.2 其他实验室检查 所有患儿入院24 h内(治疗前)采集血液标本，采用ELISA法检测呼吸道合胞病毒IgM抗体(RSV-IgM)、腺病毒IgM抗体(ADV-IgM)、流感病毒IgM抗体(Flu-IgM)、肺炎支原体IgM抗体(MP-IgM)、衣原体(CP) IgM抗体(CP-IgM)，并检测MP和CP的DNA。同时检测白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)，并行胸部X线片检查。入院后第2天早晨采集痰液标本进行细菌培养。

2 结 果

2.1 实验室检查结果 66例患儿胸部X线片均报告肺炎，痰培养阳性者36例，其中肺炎链球菌阳性16例，金黄色葡萄球菌阳性4例，流感嗜血杆菌3例，大肠埃希菌阳性8例，肺炎克雷伯菌阳性5例。MP-IgM阳性28例，MP DNA阳性23例，CP-IgM阳性17例，CP DNA阳性21例，RSV-IgM阳性16例，ADV-IgM阳性14例，Flu-IgM阳性14例。WBC升高46例，中性粒细胞计数升高51例，CRP升高43例，PCT升高48例。

2.2 临床转归 所有普通肺炎患儿均治愈出院，重症肺炎组有2例患儿在治疗5 d后家属要求转上级医院治疗，其余患儿均治愈出院。

2.3 各组血浆SLPI水平比较 治疗前，重症肺炎组患儿血浆SLPI水平明显低于普通肺炎组、健康对照组(P<0.05)；普通肺炎组血浆SLPI水平低于健康对照组(P<0.05)。治疗后，重症肺炎组和普通肺炎组血浆SLPI水平均较治疗前有所升高(P<0.05)，但重症肺炎组仍然低于普通肺炎组与健康对照组(P<0.05)，普通肺炎组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 各组血浆SLPI水平比较

注：与本组治疗前比较，△P<0.05；与重症肺炎组治疗前比较，*P<0.05；与重症肺炎组治疗后比较，#P<0.05；与健康对照组比较，★P<0.05；-表示无数据。

2.4 各组NF-κB表达水平比较 治疗前，重症肺炎组NF-κB表达水平明显高于普通肺炎组和健康对照组(P<0.05)；普通肺炎组高于健康对照组(P<0.05)。治疗后，重症肺炎组和普通肺炎组NF-κB表达水平均较治疗前显著下降(P<0.05)，但重症肺炎组仍高于普通肺炎组和健康对照组(P<0.05)，而普通肺炎组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 各组NF-κB表达比较

注：与本组治疗前比较，△P<0.05；与重症肺炎组治疗前比较，*P<0.05；与重症肺炎组治疗后比较，#P<0.05；与健康对照组比较，★P<0.05；-表示无数据。

3 讨 论

小儿肺炎病情进展迅速、极易发生恶化，早期评估病情及判断治疗效果极其重要。SLPI是包含107个氨基酸的单链多肽，相对分子质量为11.7×103，属于乳清酸性蛋白家族。SLPI由2条高度同源的、富含半胱氨酸区(16个半胱氨酸形成的8个二硫化合物桥)和C末端区组成，C末端区具有抑制弹性蛋白酶活性的作用，N末端区有抗菌活性[4]。生理浓度为0.1～10.0 μg/mL，具有抗蛋白酶活性和抗炎活性。作为蛋白酶抑制剂，SLPI 可防止过量的中性粒细胞对宿主组织的损伤破坏作用，从而调节蛋白酶活性来维持蛋白酶抑制剂与蛋白酶之间的局部平衡，维持机体的内稳态[5]，同时，SLPI一方面受白细胞产物及相关炎性细胞因子诱导表达产生，另一方面又可有效抑制炎性细胞因子级联反应进程，从而起到抗炎作用。因此SLPI是机体重要的保护性因子。SLPI常由位于呼吸道、消化道及生殖道的上皮细胞产生[6]。近年研究发现，许多炎症性疾病患者体内SLPI水平多呈下降趋势[7-8]。本研究发现，治疗前肺炎患儿血浆SLPI水平明显低于治疗后，病情越重，SLPI水平越低，与肺炎严重程度呈负相关，随着病情的好转，SLPI水平逐渐增高，对肺炎患儿的病情变化及预后有一定的提示意义。

NF-κB是一种细胞内重要的核转录因子，通常以无活性形式存在于细胞质中，活化后广泛参与炎性反应、黏附因子、趋化因子及一些相关酶的基因调控，NF-κB受多种因素的刺激而激活,在严重感染后，机体对病原菌即可产生快速防御及参与诱导早反应基因的表达[9]。本研究中，治疗前肺炎患儿NF-κB表达水平明显高于治疗后，病情越重，NF-κB表达水平越高，随着炎症的控制，NF-κB表达水平逐渐降低，与肺炎严重程度呈正相关。

已有研究证实，在抗炎过程中SLPI水平高低与NF-κB表达有关，主要通过抑制NF-κB在肺内非巨噬细胞内的激活作用，从而限制肺部炎症的扩散，减轻炎性损伤[10]。SLPI抑制NF-κB活化的机制可能是：(1)增加NF-κB抑制因子的表达，减少NF-κB的激活[10]；(2)SLPI能够与NF-κB特定部位结合，使得NF-κB无法与相关炎性介质基因的启动子和(或)增强子中存在的特异性κB序列结合，从而抑制炎性介质激活[11]。因此，本研究中肺炎患儿在治疗前SLPI水平明显低于治疗后，且炎症程度越重，SLPI水平降低越明显，考虑与其抑制NF-κB激活的作用减弱，导致炎性介质失控性释放有关。本研究还发现经治疗后SLPI水平升高幅度小，NF-κB表达降低不明显的患儿，其CRP、PCT下降速度较慢，进一步说明SLPI水平及NF-κB表达水平与疾病的严重程度有关。依据SLPI水平及NF-κB表达情况，对临床治疗方案及时进行调整，最终除2例患儿家属要求转上级医院治疗外，其余重症肺炎患儿均治愈出院。

总之，对肺炎患儿早期检测SLPI及NF-κB水平，能够进一步明确肺炎的严重程度，有助于重症肺炎的早期诊断和治疗，在病程中动态检测其水平，能够判断临床治疗效果，指导临床用药，对疾病的预后也有一定的提示意义。

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Changes and clinical significance of SLPI and NF-κB levels in children patients with different degrees of pneumonia

XUEJi-hong,FENGXia,FENGXiao-qiang

(SecondDepartmentofPediatrics,AffiliatedHospitalofYan′anUniversity,Yan′an,Shaanxi716000,China)

Objective To investigate the changes and clinical significance of plasma secretory leukocyte proteinase inhibitor(SLPI) and nuclear factor-κB(NF-κB) levels in children patients with different degrees of pneumonia.Methods 66 children patients with bronchopneumonia in our hospital were selected and divided into the severe pneumonia group(30 cases) and the ordinary pneumonia group(36 cases).The levels of serum SLPI and NF-κB were detected within 24 h after admission,on 5 d after treatment.Meanwhile 20 healthy children were selected as the healthy control group.Results Serum SLPI level before treatment in the severe pneumonia group and the ordinary pneumonia group was significantly lower than that in the healthy control group,while the NF-κB level was significantly higher than that in the healthy control group(P<0.05).The serum SLPI level after treatment in the severe pneumonia group and the ordinary pneumonia group were significantly increased compared with before treatment,while the NF-κB level was significantly decreased(P<0.05),but serum SLPI level in the severe pneumonia group was still lower than that in the healthy control group,while the NF-κB level was still higher than that in the healthy control group,the differences were statistically significant(P<0.05),the SLPI and NF-κB levels had no statistical differences between the ordinary pneumonia group and the healthy control group(P>0.05).Conclusion Early detection of serum SLPI and NF-κB levels in children patiens with pneumonia conduces to early diagnosis,treatment and prognosis of severe pneumonia.

pneumonia; SLPI; NF-κB

薛继红，女，硕士，主治医师，主要从事小儿呼吸系统疾病研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.19.023

A

1672-9455(2015)19-2870-03

2015-02-25

2015-05-26)