影响新生儿干血片G6PD筛查试验结果的相关因素分析

陈丕绩，蒋 明，谢意文，蔡巧青

(1.广东省深圳市盐田区人民医院检验科 518081;2.北京大学深圳医院妇产科，深圳 518000)



·论 著·

影响新生儿干血片G6PD筛查试验结果的相关因素分析

陈丕绩1，蒋 明1，谢意文1，蔡巧青2

(1.广东省深圳市盐田区人民医院检验科 518081;2.北京大学深圳医院妇产科，深圳 518000)

目的 分析新生儿干血片红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)筛查试验过程中可能产生影响的各类因素，为提高临床质控水平、有效减少检测过程中的外在影响因素提供参考。方法 以该院2013年6月至2014年5月862例新生儿为研究对象，分别进行受试新生儿基本资料、标本留置时间、温度、打孔部位、血片去除、加酮试剂后仪器测定时间的分组研究，探讨G6PD测定结果的影响因素。结果 季节性上，春夏季新生儿G6PD水平明显低于秋冬季；分娩方式上，阴道产G6PD水平明显低于剖宫产；标本留置时间上，留置时间越长，G6PD水平越低；温度方面，2～8 ℃冷藏G6PD水平明显高于室温；血片去除方面，去除血片的G6PD水平明显高于不去除血片；加酮试剂后仪器测定时间方面，随着测定时间的延长，G6PD水平逐渐下降。干血片G6PD检测结果在季节、分娩方式、标本留置时间、温度、血片去除和加酮试剂后仪器测定时间方面检测数据比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。性别和打孔部位对G6PD水平变化无明显影响(P>0.05)。结论 应在新生儿G6PD筛查过程中建立起完善有效的管理与质控机制，加强管理，并根据影响因素适当调整临床诊断的临界点，以减少假阴性或假阳性的产生，提高临床新生儿筛查的工作质量。

新生儿； 干血片； 红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶； 影响因素

红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)是维持红细胞膜稳定的重要元素，一旦出现G6PD缺乏，红细胞易受损伤因子分割，引起血管内溶血诱发新生儿高胆红素血症以及儿童生长发育期间的溶血性贫血，对婴幼儿的健康和发育造成威胁[1-2]。在我国，新生儿早期筛查G6PD是重要的防治新生儿高胆红素血症的手段，主要通过滤纸干血法进行G6PD的检测[3]。但由于血样中检测物水平相对较低，又是滤纸检查，G6PD的整个检测过程中影响因素较多，对检测结果产生直接影响，加强检测过程中的质量监控十分重要。本研究通过对本院新生儿干血片G6PD筛查试验过程中的各类因素进行分析，希望为提高临床质控水平、有效减少检测过程中的外在影响因素提供参考。

1 资料与方法

1．1 一般资料 以本院2013年6月至2014年5月862例新生儿为研究对象，包括男442例，女420例。阴道产528例，剖宫产334例。孕周36+2～41+3周，平均(39.2±1.6)周。全部新生儿均于娩出后72 h足跟部采血，并应用美国S&S903型滤纸制备成滤纸血片标本，经自然阴干后分置于塑料袋内，于2～8 ℃环境下保存待测。

1．2 试验设计

1．2．1 基本资料研究 对受试新生儿的性别、出生时间、分娩方式等进行统计记录。

1．2．2 标本留置时间研究 于标本内随机选取40例血样，并分成4组，分别于标本采集后1～4 d给予G6PD水平检测。

1．2．3 温度研究 于剩余标本内随机选取20例血样，均放置1 d后进行G6PD检测，分为两组，一组置于2～8 ℃保存，一组置于室温下保存。

1．2．4 打孔部位研究 随机选取剩余标本100例于2～8 ℃环境下保存1 d后检测，分别行中央和边缘血片打孔各50例。

1．2．5 血片去除研究 剩余标本内随机选取100例，分别实施血片去除与不去除试验各50例。

1．2．6 加酮试剂后仪器测定时间研究 剩余标本内随机选取40例，加酮试剂前操作相同，加酮试剂后分别于酮试剂加入时,加入后5、10、15 min进行G6PD检测。

1．3 G6PD检测结果 采用3 mm直径打孔钳于滤纸干血片上进行血片打孔，置入包被板孔内，相关试验操作方法严格参照试剂盒说明，试剂盒及多标记分析仪为美国珀金-埃尔默股份有限公司提供，采用机载软件进行G6PD的结果处理。

2 结 果

新生儿干血片G6PD检测结果影响因素见表1。季节性上，春夏季新生儿G6PD水平明显低于秋冬季；分娩方式上，阴道产儿G6PD水平明显低于剖宫产儿；标本留置时间上，留置时间越长，G6PD水平越低；温度方面，2～8 ℃冷藏G6PD水平明显高于室温；血片去除方面，去除血片的G6PD水平明显高于不去除血片；加酮试剂后仪器测定时间方面，随着测定时间的延长，G6PD水平逐渐下降。干血片G6PD检测结果在季节、分娩方式、标本留置时间、温度、血片去除和加酮试剂后仪器测定时间方面比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。性别和打孔部位对G6PD水平变化无明显影响，差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 干血片G6PD检测结果影响因素比较(n=862，U/gHb)

续表1 干血片G6PD检测结果影响因素比较(n=862，U/gHb)

3 讨 论

新生儿的临床疾病筛查是我国现代预防医学发展过程中的要素之一，也是实践我国优生优育社会理念的重要保障[4-5]。新生儿筛查有助于早期发现新生儿缺陷，尽早针对性地实施治疗，从而降低出生缺陷率、提高患儿生长发育水平[6]。G6PD缺乏症为X性连锁显性遗传类疾病，属于红细胞酶遗传性缺陷，在我国的发病范围较广，发病率主要表现为南高北低的态势[7]。据统计全球约有4亿人患有G6PD缺乏症[8]。新生儿G6PD缺乏症最主要的临床表现是新生儿胆红素血症，可致核黄疸的发生，严重影响患儿智力的发育。随着新生儿胆红素血症临床重视程度的提高，G6PD早期筛查也越来越突显出其重要地位。

G6PD目前在我国临床检测中仍以滤纸片干血斑标本，即干血片为主。在实施血液标本检测实验的整个过程中，需要经历标本采集、保存、递送、检测、结果审核等多个步骤[9]，对于疑似病例还需复检，流程相对复杂，过程中可能影响检测结果的外在因素也较多。再加上G6PD本身在血液标本中水平较低，更加大了对准确检测的影响性。因此探讨新生儿干血片G6PD筛查的影响因素对于减少实验过程中的不利因素、提高筛查质量和提升临床诊断率具有重要意义。

在本研究中，作者以本院新生儿娩出72 h后足部血样为研究对象，通过不同的分组方式对可能影响G6PG水平的各类因素进行比较分析。结果显示，新生儿的性别和检测过程中的打孔部位对G6PD的检测结果无明显影响，差异无统计学意义(P>0.05)。但检测季节、分娩方式、标本留置时间、温度、血片去除与否及加酮试剂后仪器测定时间等方面对新生儿干血片G6PD水平存在明显影响，差异有统计学意义(P<0.05)。

本研究结果表明，秋冬季节G6PD的活性高于春夏季，剖宫产分娩的新生儿血样干血片G6PD活性高于阴道分娩新生儿，提示在实施G6PD筛查诊断时对于临界值的选取应参考季节和分娩方式因素。标本留置时间上，随着留置时间的延长，G6PD逐渐失活，说明在进行相关检测时，最好在完成滤纸干血片置备后，尽早检测。干血片保存温度显示，2～8 ℃低温环境可保持G6PD有较高的活性，而置于室温下的标本G6PD水平明显下降，提示在进行标本置备与保存时，应选择低温保存，降低G6PD的失活率。不去除血片的测定结果低于去除血片的检测结果，主要原因可能与加入酮试剂未沉入反应板井底有关，如纸片仍悬浮于表层，在实施激光及荧光测定时纸片产生阻碍作用，使检测到的激光或荧光强度减弱，直接影响G6PD的检测结果。当然，随着仪器检测时间的不断延长，G6PD的活性也随之不断下降，影响检测结果的准确性，建议加入酮试剂后应尽快应用仪器检测。

综上所述，新生儿干血片的标本采集、保存、运输、检测等过程均可能对G6PD的检测水平产生影响，包括温度、时间、分娩方式等，季节因素影响G6PD水平可能与温度也有一定相关性，但目前尚无研究明确季节因素对G6PD检测结果影响的根本原因。为提高干血片G6PD的检测准确性，应在新生儿筛查的整个过程中建立起完善有效的管理与质控机制，加强管理，减少负面因素，并根据影响因素适当调整临界点，以减少假阴性或假阳性的产生，综合提高临床新生儿筛查的工作质量[10]。

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Analysis of factors infecting result of neonatal dried blood G6PD screening test

CHENPi-ji1,JIANGMing1，XIEYi-wen1，CAIQiao-qing2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,People′sHospitalofYantianDistrict,Shenzhen,Guangdong518081,China;2.theShenzhenHospitalofPekingUniversity,Shenzhen,Guangdong518000,China)

Objective To analyze factors which might affect the result of neonatal dried blood spots glucose tablets of red blood cell -6- dehydrogenase (G6PD) screening test,to improve the clinical quality control level,effectively reduce the external factors in the process of detection.Methods A total of 862 neonatus in June 2013 to May 2014 were selected in this research.According to the basic data,sample retention time,temperature,punching parts,blood removal,addition of ketone reagent determination time,all the subjects were grouped and investigated the factors affecting the determination results of G6PD.Results In terms of season,G6PD level of neonatus in spring and summer was significant lower than that of autumn and winter.In the terms of delivery mode,G6PD level of neonatus by vaginal birth was significant lower than that by cesarean section.In terms of samples indwelling time,the longer the indwelling time,the lower the G6PD level.In terms of temperature,the G6PD level of samples stored up in 2～8 ℃ was significant higher than that in room temperature.In terms of blood removal,G6PD level removed blood spots was significant higher than that of neonatus didn′t remove blood spots.In terms of addition of ketone reagent instrument for measuring time,G6PD level decreased along with the extension of time of determination.The G6PD levels of different groups divided by season,mode of delivery,sample retention time,temperature,blood removal and addition of ketone reagent instrument for measuring time were significant different (P<0.05),but those levels of different groups divided by gender and drilling sites had no significant different (P>0.05).Conclusion Management and quality control system should be established in the screening test of G6PD,the management should be strengthened to reduce the false negative or positive results.

neonatus； dried blood spots； erythrocyte glucose -6- phosphate dehydrogenase； influence factor

陈丕绩，男，本科，副主任技师，主要从事检验医学研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.04.028

A

1672-9455(2015)04-0505-02

2014-06-10

2014-10-20)